草鱼生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用经草鱼生长激素(gcGH)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/O-Ag14)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,得到7株阳性杂交瘤细胞株,其中2株为强阳性。交叉试验表明,这些杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)同大鳞大马哈鱼生长激素(sGH)、大鳞大马哈鱼促性腺激素(sGTH)及牛生长激素(bGH)均不起反应。小鼠腹水McAbs滴度高达1:1280000。受体-gcGH-McAb夹心试验表明,McAb确与有活性的gcGH有特异反应。用间接ELISA方法可检测到浓度为0.125#g/ml的gcGH。     

草鱼生长激素在毕赤酵母中的高效分泌表达

为大量获得具有生物学活性的草鱼生长激素,对草鱼生长激素cDNA在毕赤酵母中的表达进行了研究。将草鱼生长激素cDNA克隆入毕赤酵母表达载体pGAPZ-α-B,构建表达载体pGAPZ-α-B-GH。在三磷酸甘油醛脱氢酶（GAP）启动子的调控作用下,一个类似于天然生长激素大小、分子量约22kD的蛋白获得表达,其表达量约50mg/L。Western杂交表明：表达的蛋白与兔抗草鱼生长激素的多克隆抗体特异结合,证实该表达蛋白为草鱼生长激素;受体夹心式ELISA检测表明：表达的草鱼生长激素具生物学活性,能与不同种鱼来源的肝膜受体特异结合。     

鲤鱼（Cyprinus carpio）血清生长激素变化的酶联免疫吸附测定

本研究的目标是纯化鲤（Cyprinus carpio）生长激素,用于制备抗鲤鱼生长激素的单克隆抗体,建立鲤鱼生长激素的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）技术,并用所建立的技术检测不同环境下养殖的鲤鱼的血清生长激素水平的变化．利用柱纯化技术纯化酵母表达草（Ctenopharyngodon idella）生长激素,免疫新西兰白兔（Oryctolagus cuniculus）,获得抗草鱼生长激素多克隆抗体．摘取鲤鱼垂体,从中提取生长激素,经层析纯化后,以变性聚丙烯凝胶电泳判断其分子量和纯度,并利用抗草鱼生长激素多克隆抗体以Western blot验证．纯化并经鉴定的鲤鱼生长激素作为免疫原被用于B淋巴细胞杂交瘤技术．共建立14株能够稳定分泌抗鲤鱼生长激素单克隆抗体的杂交瘤细胞系（FMU-cGH1-FMU-cGH14）,其中8个克隆（FMU．cGH1～FMU-cGH6,FMU-cGH12和FMU-cGH13）成功用于Western blot分析,9个克隆（FMU-cGHl-FMU-cGH7,FMU-cGH9和FMU-cGH10）可用于荧光标记和免疫组织化学分析．利用竞争性ELISA进行表位分析,结果表明这些单克隆抗体能够识别5个不同的表位．利用其中的FMU-cGH12作为包被抗体,FMU-cGH6作酶标抗体,建立了能够检测鲤鱼生长激素含量的ELISA技术．这一检测系统被证明具有高度的稳定性和灵敏度,能够检测并定量低至70pg／mL的生长激素．利用这一检测技术,发现限制进食和网箱养殖的鲤鱼其生长激素含量都有明显提高,分别为对照的6．9和5．8倍,显示不同生长环境下鲤鱼生长激素水平具有不同的反应．     

儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素分泌的影响

本文研究了儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素水平的影响。腹腔注射儿茶酚胺合成抑制剂α－甲基－对－酪氨酸（α－ＭＰＴ,５μｇ／ｇｂ·ｗ和５０μｇ／ｇｂ·ｗ）显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平,腹腔注射儿茶酚胺能神经毒素６－羟多巴胺（６－ＨＯＤＡ,５μｇ／ｇｂ·ｗ和５０μｇ／ｇｂ·ｗ）也显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平。阿卟吗啡（ＡＰＯ,７．１ｍｇ／Ｋｇｂ·ｗ和１２．５ｍｇ／Ｋｇｂ·ｗ）通过背大动脉插管注入草     

草鱼生长激素单抗免疫亲和柱的制备及初步应用

用纯化的草鱼生长激素单克隆抗体联剂ＣＮＢｒ活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶上制成约１０ｍｌ的亲和层析柱,用该柱一步纯化了重组鲤鱼生长激素基因的表达产物。偶联有１３．６５ｍｇ单克隆抗体的亲和柱一次强纯化得到约０．７ｍｇ重组鲤鱼生长激素。酶联免疫受体测定表明它具有强烈的生物学活性,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明它为一蛋白带,分子量约为２２０００。     

草鱼生长激素单抗免疫亲和柱的制备及初步应用

用纯化的草鱼生长激素单克隆抗体偶联到CNBr活化的Sepharose4B凝胶上,制成约10ml的亲和层析柱．用该柱一步纯化了重组鲤鱼生长激素基因的表达产物．偶联有13．65mg单克隆抗体的亲和柱一次可纯化得到约0．7mg重组鲤鱼生长激素．酶联免疫受体测定表明它具有强烈的生物学活性,SDS－PAGE表明它为单一蛋白带,分子量约为22000．     

饥饿状态下草鱼生长激素的分泌

以两种规模草鱼为对象,研究了饥饿对其生长激素的影响。检测由背大动脉导管抽取的连续血样的结果表明;饥饿状态下草鱼（体重为0．5－1．0kg）生长激素分泌仍是间歇性的,但饥饿明显提高其总体生长激素平均值、基础生长激素平均值和其最大峰值。对于草鱼鱼种（体重为25．30g）,饥饿也明显提高其血液中生长激素水平,但草鱼种的肥满度系数和血糖浓度却。在体外灌流实验中,饥饿的草鱼种脑垂体碎片生长激素基础分泌值明显高于正常投喂的对照组。这些结果表明：饥饿状态下草鱼生长激素分泌增强。     

草鱼垂体生长激素分离纯化及其抗体制备的研究

应用碱性抽提,亲和层析,凝胶过滤和离子交换层析等技术从草鱼垂体中分离提纯出纯度高的草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测表明草鱼ＧＨ与大马哈鱼ＧＨ抗血清具有明显的免疫交叉反应,而与大马哈鱼催乳素（ＰＲＬ）抗血清没有交叉反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳表明草鱼ＧＨ为单一蛋白带,其分子量约为２２５００道尔顿,等电聚焦揭示出草鱼ＧＨ主要由等电点为４．７和５．０的两条蛋白带组成,用纯化的草     

酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立

以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性.     

生长激素和催乳素放射免疫测定法的建立与应用

目的：建立测定大鼠垂体和血浆中生长激素（GH）和催乳素（PRL）含量的高特异性、高灵敏度的双抗放射免疫测定（RIA）法;研究急性低氧对垂体激素GH和PRL的作用。方法：用氯胺－T法进行抗原放射性碘标记;采用平衡饱和加样程序的双抗RIA法测定。结果：用该方法测定急性低氧（0．5h）时血浆和垂体GH和PRL含量,7km低氧,垂体GH含量明显升高（P＜0．05）,血浆则相反;7km低氧,明显降低垂体和血浆PRL含量（P＜0．01）;而5km低氧对GH和PRL的作用与对照组比无统计学差异。结论：本双抗RIA法具有高特异性、高灵敏度及简便易行等特性;用该法测定提示急性低氧可抑制大鼠GH和PRL的分泌。     

草鱼生长与台湾棘带吸虫囊蚴内种群的关系

通过对草鱼鳃上台湾棘带吸虫囊蚴内种群的研究发现,随着草鱼的生长。其感染率,下蚴的平均密度都下降,其感染强度也呈下降的的趋势;草鱼鳃上囊蚴的频率分布,表明有大量的囊蚴寄生于少数草鱼鳃上,多数草鱼感染少量的囊蚴;囊蚴在草鱼不同组鳃片上的分布具有相同的变化规律;     

草鱼同工酶基因座位多态性的初步研究

采用垂直淀粉凝胶电泳及特异性组织化学染色技术研究了25尾草鱼的6种同工酶系统(LDH,MDH,ADH,GDH,IDH,EST)约18—23个基因座位的遗传变异型。有7个基因座位(s-Mdh-A,Adh—B,Gdh-1,Gdh-2,Est-1,Est-6,Est-14)具有多态性,在其中4个基因座位(s-Mdh—A,Adh-B,Gdh-1,Est-1)上观察到的基因型频率与Hardy-Weinberg定律相符．实验表明草鱼的同工酶基因座位具有明显的多态性。这一结果为草鱼的人工选种和定向育种的可能性提供了依据。对草鱼GDH,EST同工酶的遗传基础、亚基组成以及酶变异的机理等问题进行了讨论。     

草鱼肠道酸碱度的研究

胃肠道是一个复杂的消化系统, 每一部分都具有独特的生理特征。酸碱度(pH)是消化道重要的生理指标之一, 其对营养物质的消化、吸收和肠道微生物的生长等具有重要影响。为了研究草鱼在食物消化过程中, 肠道的酸碱度变化, 测定了草鱼肠道食物糜、肠液和黏膜的pH。结果显示, 随着食物的消化, 它们的pH都有下降的趋势。肠道食物糜pH在6.86±0.24到8.43±0.10之间, 肠液pH在7.14±0.22到8.63±0.02之间, 相同时间点相同肠段两者之间的pH差异很小, 并且在实验期间两者的pH变化趋势相同。黏膜pH在6.23±0.04到6.7±0.13之间, 为弱酸性。除了时间点12h外, 相同时间点和相同肠道部位黏膜的pH与食物糜、肠液的pH相比均有显著性差异(P<0.05)。分析发现草鱼摄食食物的pH与上述三相的pH之间均有显著性差异(P<0.05), 研究结果为草鱼消化生理及营养学研究提供了基础资料。     

人工饲养和野生草鱼幼鱼耳石微结构的比较研究

分别检测了人工饲养和野生草鱼幼鱼的耳石微结构特征,根据耳石透明性的差异。可将微耳石划分出中央暗区和外部亮区两部分,饲养种群的耳石暗区大小和生长轮数目均大于野生种群,暗区和亮区的特征比较稳定。生长轮清晰,对比度好,宽度比较均匀;野生种群的耳石暗区和亮区表现形式多变。暗区的生长轮清晰或不清晰,亮区的生长轮清晰,但宽度波动较大,依据耳石微结构特征。可以对饲养和野生草鱼种群进行识别。     

性成熟草鱼卵巢发育的年周期变化

产卵前的卵巢同时含有大量4时相卵母细胞及少量2时相和3时相卵母细胞。产后2时相及3时相卵母细胞增多而4时相卵母细胞骤减,8月份4时相卵母细胞的数量又增多,约占卵巢体积的80％,及至11月份其数量又下降。自11月至翌年1月,卵巢中3时相卵母细胞增多而4时相卵母细胞则消失不见。至2月份,新的4时相卵母细胞又开始出现并逐渐增多。性成熟草鱼的卵巢以如此规律周而复始地产生成熟的卵子。卵巢中卵母细胞的发育是不同步的。但在产卵前有大量的3时相卵母细胞向4时相演化,同时有为数不少的发育中的2时相卵母细胞存在。产后卵巢中亦同时存在不同发育时期的卵母细胞。     

离体草鱼肠道对亮氨酸和酪氨酸的吸收与利用

采用同位素示踪和肠道离体灌流方法,研究了草鱼离体肠道对亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)的吸收转运与利用。实验结果表明:当Leu浓度从1.0mmol/L增加到5.0mmol/L、10mmol/L时,肠道吸收转运的速度表现出“高浓度抑制”效应,运输到肠道外的比例为83%、66%和35%;合成肠道蛋白质的比例为2%、5%和13%;肠道组织内游离形式的比例为9%、28%和49%;其他形式的比例为6%、1%和3%。Tyr浓度从0.5mmol/L增加到1.5mmol/L、2.5mmol/L时,肠道对Tyr的吸收转运速度也随之增加,运输到肠道外的比例为52%、55%和55%;合成肠道蛋白质的比例为17%、15%和16%:肠道组织内游离形式的比例为7%、10%和16%;其他形式的比例为24%、20%和13%。肠道在吸收转运Leu和Tyr的同时,也利用它们合成蛋白质的和其他方面,Leu的吸收利用受灌流试验氨基酸浓度影响较大、而Tyr受影响较小;随着肠道内灌流的试验氨基酸浓度增加,吸收转运到肠道外的比例下降、留存于肠道内的比例增加,肠道合成的蛋白质绝对量也增加。       

饥饿和再投喂对草鱼鱼种生物化学组成的影响

分析了饥饿１５天和再投喂２１天的草鱼鱼种肝脏和肌肉生物化学组成的变化，结果表明：（１）饥饿降低白肌ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，蛋白质含量和肝脏ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，使肝脏蛋白质含量升高，再投喂后，肝脏ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，蛋白质含量和白蛋白质含量均恢复至正常投喂组水平，白肌ＲＮＡ／ＤＮＡ比值升高并显著高于正常投喂组水平；（２）饥饿状态下，肝脏和肌肉的脂类含量降低，水含量升高，再投喂后，肝脏和肌肉的脂类含量升高