绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达

将改良的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因,插入到植物表达载体中,构建双ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的植物表达载体ｐＢＩＧＦＰ,在Ｋａｍ浓度为２０ｍｇ／Ｌ的筛选培养基上,用含有ｐＢＩＦＰ质粒的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４感染青蒿叶片,获得５个抗Ｋａｎ阳性丛生芽系。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,外源ＧＦＰ基因已整合到青蒿转基因芽Ｇ－１系的基因组中。在ＯＬＹＭＰＵＳ－ＢＨ２型荧光显微镜下,观察到转基因     

含人TNF-α、IL-2及NeoR基因多顺反子逆转录病毒载体的构建及表达

利用脑炎心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点,连接人ＴＮＦ－α及ＩＬ－２ｃＤＮＡ和选择基因新霉素磷酸转移酶基因（ＮｅｏＲ）,使ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒ＬＴＲ启动子,将这３个基因转录至同一ｍＲＮＡ,从而构建成含人ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因多顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＲＩ。在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选得单克隆,病毒滴度为５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ重组病毒分泌的细胞株,经ＰＣＲ证明外源基因已整合至基因组,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹显示出单一转录本。用重组病毒上清感染不同的细胞,Ｇ４１８筛选所获得的抗性克隆能不同程度地表达ＴＮＦ－α及ＩＬ－２。实验结果表明,含ＩＲＥＳ的多顺反子逆转录病毒载体能很好地在同一靶细胞中表达多个外源基因。     

人G-CSF转基因鼠的稳定遗传与表达

利用人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因组基因作为目的片段,将其受控于２．６ｋｂ的小鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的调控区下,通过显微注射法获得了两只整合有人Ｇ－ＣＳＦ转基因小鼠,通过繁殖建立了稳定的转基因系．一些表型参数测定表明转基因鼠与正常鼠无明显差别．通过ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测,在乳腺表达出人Ｇ－ＣＳＦ,为乳腺表达外源蛋白质及今后大动物研究奠定了基础．     

erbB-2与胃癌细胞恶性表型及其增殖调控的关系

应用基因重组、基因转染、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、细胞生长曲线测定及裸鼠成瘤观察了反义ｅｒｂＢ－２逆转录病毒重组载体的转染对人胃癌细胞中ｅｒｂＢ－２过度表达的影响及其对ＥＧＦ的反应性．研究结果显示,ｅｒｂＢ－２的表达被其反义重组子特异抑制,伴有细胞增殖能力的下降及致瘤性的下降;在ＥＧＦ的刺激下,ｅｒｂＢ－２高表达肿瘤细胞生长速度提高的幅度显著大于ｅｒｂＢ－２反义重组载体转染细胞;ＥＧＦ促细胞增殖及促基因表达的功能在ｅｒｂＢ－２反义重组子转染后受到抑制,提示ｅｒｂＢ－２在细胞增殖调控中具有重要功能．     

用逆转录病毒载体表达人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子

应用基因工程的方法,将含有巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的基因片段和人粒细胞－茂噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＧＳＦ）的ｃＤＮＡ,克隆进逆转录病毒载体Ｎ２Ａ,得到重组质粒Ｎ２ＱＡ／ＣＭＶ／ｈＧＭ－ＣＳＦ。经脂质体包装并转染包装细胞,通过Ｇ４１８药物筛选,得到抗生克隆。经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测证实,ＧＭ－ＣＳＦ基因已整合到该克隆细胞的染色体上,获得的逆转录病毒滴度达１０＾４ＣＦＵ／ｍｌ,克     

牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究

牛泡沫病毒（ＢＦＶ）具有复杂的基因组结构,其基因组除编码反转录病毒共有的ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ三个结构基因之外,在其ｅｎｖ和３’ＬＴＲ之间有两个重叠的读码框（ＯＲＦ－１和ＯＲＦ－２）,编码Ｂｏｒｆ－１、Ｂｏｒｆ－２、Ｂｅｔ等多种调节蛋白,其中Ｂｏｒｆ－１（２４９ａａ）为ＢＦＶ反式激活因子（Ｔａｓ）。为研究Ｂｏｒｆ－１的结构与功能,Ｂｏｒｆ－１在ＬＴＲ上的应答元件及作用机制,Ｂｏｒｆ－２、Ｂｅｔ等调     

N42－A对神经生长因子诱导PC12细胞分化的抑制作用

研究表明,缺乏神经生长因子（ＮＧＦ）的营养支持是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ等神经元退行性疾病发生发展的重要原因,而ＮＧＦ和／或ＮＧＦ受体的过度表达则与一些神经系统肿瘤的发生发展有着十分密切的因果关系。采用（１２５）Ⅰ－ＮＧＦ受体特异结合实验作为ＮＧＦ受体活性物质筛选实验模型从中药牛膝中筛选出了能强烈地抑制（１２５）Ⅰ－ＮＧＦ受体结合的活性成分Ｎ４２－Ａ（ⅠＣ（５０）＝６．１８±３．４３,ｎ＝４）;细胞培养实验表明,Ｎ４２－Ａ对ＮＧＦ诱导大鼠嗜铬神经瘤ＰＣｌ２细胞的分化也具有很强的剂量依赖性抑制作用（对０．１ｎｍｏｌ／Ｌ和０．２ｎｍｏｌ／ＬＮＧＦ诱导的大鼠嗜铬神经病ＰＣ１２细胞轴突生长的半数抑制浓度分别为６μｇ／ｍＬ和２１μｇ／ｍＬ）。这表明,Ｎ４２－Ａ是神经元上介导ＮＧＦ诱导轴突生长的特异受体抑制剂,不仅对ＮＧＦ及其受体过度表达所致的神经系统肿瘤的防治具有潜在的应用价值,而且对Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ等神经元退行性疾病防治药物的开发研究具有十分重要的意义。     

造血生长因子结构与功能的相关性研究

概述了多系（ｍｕｌｔｉ）－集落刺激因子（ＣＳＦ）中性粒系－巨噬系（ＧＭ）－ＣＳＦ,Ｇ－ＣＳＦ,Ｍ－ＣＳＦ,红细胞生成素,白介素－１、２、５、６等９种造血生长因子结构－功能相关性研究的主要进展。     

TGF—β的结构,受体及信号转导

转化生长因子β（ＴＧＦ－β）是一种多功能细胞因子。人、鼠等哺乳动物的ＴＧＦ－β已克隆出β１、β２、β３３种亚单位。活性ＴＧＦ－β是分子量的２５ｋＤ的同源二聚体,每个单体由１１２个氨基酸组成。ＴＧＦ－β受体有ＴβＲⅠ￣Ⅴ、Ｅｎｄｏｇｌｉｎ等。其中ＴβＲⅠ、ＴβＲⅡ属丝氨酸／苏氨酸激酶家族,在ＴＧＦ－β信号转导中起主导作用。ＴＧＦ－β与ＴβＲⅡ结合后,再结合ＴβＲⅠ,然后ＴβＲⅡ磷酸化ＴβＲⅠ,后作     

血管内皮生长因子C的研究进展

血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦ－Ｃ）是一种特异性血管、淋巴管内皮细胞调节因子,其结构与ＶＥＧＦ具有同源性。ＶＥＧＦ－Ｃ通过受体ＣＥＧＦＲ－２和ＶＥＧＦＲ－３发挥作用,其ｍＲＮＡ的表达具有一定的组织特点,并受多种因素的调节。ＶＥＧＦ－Ｃ对于胚胎发育,细胞分化、活体内外血管、淋巴管内皮细胞均有重要的调节作用。