贵阳地区菜地内中华大蟾蜍食性分析及捕食观察

中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)的食性已有不少学者(邹寿昌,1966;胡淼,1979)作过分析和观察,但对菜地内中华大蟾蜍的食性问题未见报道。我们于1982年8—10月对     

乙草胺对中华大蟾蜍(Bu fo bu fo gar garizans)早期胚胎发育的影响

用不同浓度的乙草胺分别对中华大蟾蜍 4个不同发育时期的早期胚胎作用 5小时 ,结果发现 ,不同浓度的乙草胺可以导致中华大蟾蜍早期胚胎不同程度的发育成原肠外突和畸胎。不同发育时期的中华大蟾蜍早期胚胎对乙草胺的敏感程度和耐受程度都有所不同 ,其中 ,原肠胚期的胚胎对乙草胺最为敏感。实验表明乙草胺对中华大蟾蜍早期胚胎发育具有明显的致畸致死效应。     

中华大蟾蜍染色体标本制备的简便方法

中华大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans)是我国特有的无尾两栖类动物该动物分布广、易捕捉,其循环系统和神经系统以及胚胎发育过程较为独特,故一直是医学生理学和发育生物学研究的重要实验动物,同时,中华大蟾蜍的染色体具有体积大、数目少、形态典型等细胞遗传学特点,是遗传学上进行染色体观察和研究的好材料,非常适于进行染色体的显微分离和单染色体文库构建等方面的研究。     

中华大蟾蜍和花背蟾蜍染色体同源性研究

本文以培养 扣华大蟾蜍、花背蟾蜍的外周血淋巴细胞为实验材料,采用ＢｒｄＵ南极洲民法和胸苷标记的方法,获得了中华大蟾蜍与花背蟾蜍析搞分辨晚复制带,确定了中华大蟾蜍每一染色体的特征性晚复制区,并就中华大蟾蜍与花背蟾蜍的晚复纹带进行了精确比较,发现中华大蟾蜍与花背蟾蜍的染色体之间具有极高同源性,该结果说明,在相同的培养条件下,只要ＢｒｄＵ掺入Ｓ期的时间较为统一,显示复制带的条件基本一致的情况下,利用复     

中华大蟾蜍EDF-1重组蛋白的原核表达、纯化及抗血清的制备

通过实验获得中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)内皮分化相关因子-1(Endothelial differentiation related factor-1,EDF-1)重组蛋白及高效价抗血清。在前期研究工作中已克隆中华大蟾蜍EDF-1的开放阅读框(Open reading frame,ORF)(GenBank登录号K F769459),但因密码子的偏好性使中华大蟾蜍原有密码子在原核细胞中发生识别困难,重组蛋白原核表达未能成功。本文对中华大蟾蜍的EDF-1的ORF进行密码子优化,委托公司合成并插入原核表达载体,构建重组质粒pET-28b-EDF-1-Bufo。将重组质粒转入大肠杆菌(E. coli)感受态细胞BL21(DE3),使用IPTG诱导重组蛋白表达,钴胶纯化重组蛋白,纯化的重组蛋白免疫小鼠制备鼠抗重组中华大蟾蜍EDF-1的抗血清,然后通过Western-blot和ELISA检测抗血清的特异性及其效价。重组中华大蟾蜍EDF-1得到良好表达,抗血清特异性良好,效价为1∶8 000。为进一步研究EDF-1的生物学功能奠定基础,同时为研发抑制内皮细胞分化相关的抗肿瘤药物提供重要参考。     

温度对中华大蟾蜍和中华鳖冬眠前离体红细胞免疫功能及其大小的影响

为了探讨温度变化对中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)和中华鳖(Trionyx sinensis)离体红细胞免疫功能及细胞大小的影响,我们设计了10℃、20℃、30℃、37℃ 4个温度组,通过红细胞C3b受体花环试验和红细胞免疫复合物花环试验检测红细胞免疫活性,同时测量其红细胞大小.结果表明,温度对中华大蟾蜍离体红细胞C3b受体花环率影响显著,随着温度的升高,中华大蟾蜍离体红细胞C3b受体花环率逐渐降低,在30℃和37℃时,其红细胞C3b受体花环率明显比10℃时低;而温度对其离体红细胞免疫复合物花环率和红细胞大小却没有显著影响.温度对中华鳖离体红细胞C3b受体花环率、免疫复合物花环率及其大小亦没有显著影响.除了10℃时中华鳖离体红细胞免疫复合物花环率与中华大蟾蜍没有明显差别外,其余各温度下中华鳖离体红细胞C3b受体花环率和免疫复合物花环率均明显比中华大蟾蜍的高,而其红细胞的长径和短径却明显比中华大蟾蜍红细胞的小.这说明,温度能明显影响中华大蟾蜍离体红细胞免疫功能,而对中华鳖离体红细胞的免疫活性影响不明显,随着动物进化程度的提高,中华鳖红细胞对温度变化的适应能力和免疫活性比中华大蟾蜍明显增强.     

中华大蟾蜍某些生物学参数的测定

中华大蟾蜍某些生物学参数的测定艾晓杰,陈燕,范佳佑１．南京农业大学动物医学院南京２１００９５２．贵州农学院牧医系蟾蜍在医学和生物学的实验上应用较多,其耳后腺的分泌物－蟾酥为重要的动物药资源￣［１,２］．本文对中华大蟾蜍（Ｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓ...     

蟾蜍血液淋巴细胞姐妹染色单体互换及细胞周期动力学研究

本文对中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans血液淋巴细胞在植物血球凝集素(PHA)刺激条件下的细胞周期动力学及丝裂霉素C(MMC)诱发姐妹染色单体互换(SCE)的敏感性进行了研究。用姐妹染色单体差别染色方法确定细胞的分裂次数。实验结果表明,中华大蟾蜍血液淋巴细胞在体外培养2天后出现第二次分裂细胞,3天后达峰值(占分裂细胞中期相的38.9％),此后,其百分比逐日下降,培养后4天出现第三次分裂细胞,第5天出现第四次分裂细胞。Brdu浓度在8—24μg/ml范围内对SCE本底无影响。6ng/ml MMC所诱发的SCEs比对照组高3倍以上,说明中华大蟾蜍对MMC的诱变作用相当敏感。     

中华大蟾蜍蝌蚪后肢骨的发育及骨化顺序研究

本研究对中华大蟾蜍Bufo gargarizans不同发育时期蝌蚪的腰带和后肢骨进行双染色。结果显示,在中华大蟾蜍蝌蚪中,后肢软骨化和骨化顺序都是由近端到远端,但在远端肢体的发育模式则呈轴后支配的特征。中华大蟾蜍蝌蚪Gosner 40期,两侧髂骨作合掌式对接融合,提示髂骨融合为无尾类由水生到陆生栖息环境的转换做准备。     

蟾蜍血压及其影响因素

血压是反映心血管系统机能的生理指标。过去虽然对蟾蜍的血压进行过研究报道,但对影响血压的因素缺乏探讨,对血压值还需要进行观察。本文主要报道我们的实验结果。 方法与结果 (一)蟾蜍的血压与心率 实验动物为中华大蟾蜍(Bufo bufo asiaticus),共73只,体重46—102克,年龄和雌雄不限。实验时间为4—5月,室温为14—18℃。动物仰卧固定于蛙板上,剪开前肢带,暴露心脏与主动脉血管,将装有5％柠檬酸钠溶液的内     

中华大蟾蜍重组Gal-3C的原核表达、纯化及抗血清制备

半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)与肿瘤的发生发展密切相关,已有文献表明其羧基端galectin-3C(Gal-3C)具有一定的肿瘤抑制作用。为了获得Gal-3C的抗血清,实验以已有的重组质粒pGM-Gal-3为模板,利用PCR方法扩增中华大蟾蜍Gal-3C基因片段,并将其插入到表达载体pET28b上,构建中华大蟾蜍Gal-3C的原核表达载体pET28b-Gal-3C;将构建好的重组质粒pET28b-Gal-3C转入感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导蛋白质表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot检测目的蛋白Gal-3C的表达;以纯化的重组蛋白Gal-3C免疫小白鼠,制备鼠抗中华大蟾蜍Gal-3C的抗血清,用Western-blot检测抗血清的特异性及其效价。结果显示成功构建了中华大蟾蜍pET28b-Gal-3C重组质粒,并诱导得到了目的蛋白的表达,而且将表达产物免疫小鼠后获得了特异性良好的抗中华大蟾蜍Gal-3C的抗血清。以上结果为抗肿瘤药物的研究和发展奠定了基础。     

中华大蟾蜍的捕食习性和防治麦粘虫的初步观察

中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizana)是赣榆地区两栖类中最习见的优势种之一。它消灭多种农林害虫,是各种地下害虫和粘虫的最大天敌之一。1962—1977年我们对它的捕食习性作了一些观察,并在田间作了小规模蟾蜍防治粘虫的试验,现将结果报告如下。     

中华大蟾蜍染色体分带和姐妹染色单体互换的研究

本文报道了中华大蟾蜍(Bufo bufo gargartzans)的C带和BrdUrd-Hoechst-Giemsa复制带,并以中华大蟾蜍为代表确立了两栖类体细胞的姐妹染色单体差别染色(SCD)方法。BrdUrd-Hoechst-Giemsa技术在两栖类的中期染色体上能显示可重复的复合带型。用这种方法我们鉴定中华大蟾蜍第10对同型染色体为ZZ/ZW型性染色体,所有雄性动物两个Z染色体的复制型是完全相同的(同步复制的),而雌性动物的Z和W染色体显示出异型复制型(不同步复制的)。在W染色体长臂近着丝粒处有一个较早的复制带,Z染色体则缺乏这个复制带。这些性染色体用C带和其他方法不能区分。此外,我们还测定了中华大蟾蜍淋巴细胞的SCE频率,发现其SCE频率比哺乳动物高,为7.83±0.49(m±S.E.)。     

中华大蟾蜍斯钙素基因的组织表达及其在肾脏中的细胞定位

斯钙素(Stanniocalcin, STC)是一类首先在鱼类特有的内分泌腺--斯坦尼氏小体(Corpuscles of Stannius, CS)、随后又在人和哺乳动物中发现的同型二聚体糖蛋白激素,具有广泛的组织表达模式和多种生物学效应.为阐明两栖类动物是否存在STC1基因的表达及其表达模式,本研究基于部分已知鱼类和哺乳动物的STC1基因序列,从中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)卵巢获得了STC1基因的部分序列(GenBank注册号为EF586886).同源性分析显示,所获得的中华大蟾蜍STC1基因部分序列与鱼类STC1基因相应序列的同源性在40%-48%,而与小鼠和人STC1基因相应序列的同源性分别为41.89%和37.95%.RT-PCR分析显示STC1基因可在肾脏、性腺等多种组织中表达;原位杂交(in situ hybridization, ISH)技术表明中华大蟾蜍肾脏的近端小管、远端小管和集合管细胞内表达STC1 mRNA.这些结果首次证实两栖类动物中华大蟾蜍组织中存在STC1基因的表达     

除草剂草甘膦对中华大蟾蜍的慢性毒性

为揭示除草剂对农林生态系统中脊椎动物天敌潜在的、长期的慢性毒性,测定了草甘膦对中华大蟾蜍（Bufo gargarizans Cantor）蝌蚪生长发育和运动频率的影响以及对中华大蟾蜍成体空胃率的影响。结果表明,亚致死剂量的草甘膦溶液对中华大蟾蜍蝌蚪的生长发育和运动频率具有明显的抑制作用,蝌蚪体长、体宽、尾长、尾宽和体质量的增长率均与草甘膦浓度呈极显著负相关;蝌蚪的运动频率亦与草甘膦浓度显著负相关。同时,草甘膦的喷施对中华大蟾蜍成体的捕食造成负面影响,其空胃率与草甘膦浓度呈极显著正相关,即使在草甘膦的推荐使用浓度范围之内．中华大蟾蜍（成体）处理组亦出现30％～60％的空胃率。     

长白山两栖类繁殖期路域水生境选择性分析

2012—2014年,在长白山自然保护区道路上选取3条长10 km的样带,样带两侧出现的每个水体为小样方,测量水体类型、郁闭度、水体面积、水体深度、水质、集水池形状、离道路距离、集水池形成时间等8个生境因子,对中国林蛙Rana chensinensis、极北鲵Salamandrella keyserlingii和中华大蟾蜍Bufo gargarizans繁殖期的生境选择进行了研究。结果表明:(1)中国林蛙对排水沟和水塘2种类型的选择不具有统计学意义(P>0.05),极北鲵对水塘的选择极显著高于排水沟(P≤0.01),而中华大蟾蜍则显著选择水塘。(2)极北鲵选择大于120 m2的集水池,中华大蟾蜍在120~180 m2的集水池出现率高。(3)极北鲵对水体深度选择具有高度统计学意义(P≤0.01),而中国林蛙对水体深度的选择不具有统计学意义(P>0.05),中华大蟾蜍产卵主要选择在水体深度80 cm以上的集水池,(4)中国林蛙和中华大蟾蜍对集水池离道路距离的选择不具有统计学意义,极北鲵对离道路不同距离的集水池的选择有高度统计学意义。     

东方铃蟾与中华大蟾蜍肌组织钙激活ATP酶活性的比较研究

本文对东主铃蟾与中华大蟾蜍的心肌，腓肠肌和小肠平滑肌肌球蛋白钙激活ＡＴＰ酶活性进行了比较研究。实验结果表明东方铃蟾与中华大蟾无理蜍均显示出Ｃａ＋＋－ＡＴＰ酶活性的组织特异性。此外，东方铃蟾的心肌和腓肠肌中的Ｃａ＋＋ＡＴＰ酶活性低于中华大蟾蜍中相组织的酸活性；而东方铃蟾的小肠平滑肌中Ｃａ＋＋ＡＴＰ酶活性却高于中华大蟾蜍小肠平滑肌中酶活性。上术Ｃａ＋＋－ＡＴＰ酶活性的差异均具有一定的生理意义。     

中华大蟾蜍γ-肌动蛋白基因Bbgγ-Actin的克隆与生物信息学分析

旨在获得中华大蟾蜍肌动蛋白序列全长。以中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)耳后腺为材料,提取总RNA,通过转录组高通量测序快速得到中华大蟾蜍肌动蛋白基因(Bbg Actin)cDNA全长2 055 bp,通过RT-PCR技术对其ORF序列进行验证,并对Bbg Actin基因进行分析。序列分析表明,Bbg Actin基因开放阅读框长1 131 bp,编码376个氨基酸。通过BLAST P程序分析,所得序列与Gen Bank数据库中肌动蛋白基因序列相似度均在89%以上,氨基酸序列的相似性达90%以上。系统进化分析表明,Bbg Actin与γ-Actin聚为一类,所得中华大蟾蜍肌动蛋白属于γ-Actin。首次获得了中华大蟾蜍γ-Actin cDNA全长序列。     

草甘膦胁迫对中华大蟾蜍（Bufo gargarizans）神经冲动产生和传导的影响

应用电生理方法研究了除草剂草甘膦对中华大蟾蜍（Bufo gargarizans Cantor）坐骨神经干冲动产生和传导的影响。用不同浓度的草甘膦溶液对中华大蟾蜍进行胁迫处理,草甘膦有效成分经由皮肤进入蟾蜍体内而作用于神经系统,利用生物信号采集处理系统测定草甘膦胁迫下中华大蟾蜍离体坐骨神经干的应激反应时间、动作电位幅度和冲动传导速度,结果表明：随着草甘膦溶液浓度的升高,中华大蟾蜍坐骨神经干接受刺激后产生冲动所需的时间逐渐延长,动作电位峰值降低,神经冲动传导速度亦逐渐减慢。草甘膦施用后,中华大蟾蜍7d内的平均应激反应时间与草甘膦浓度呈正相关,而动作电位幅度及传导速度均与草甘膦浓度呈负相关。草甘膦溶液浓度达到推荐农田使用浓度1.64~2.87ml/L时,各处理组蟾蜍的应激反应时间、动作电位幅度和冲动传导速度均与对照组差异极显著（P〈0.01）。同时,随着试验处理时间的延长,中华大蟾蜍神经干对刺激的反应变得更为迟钝,神经冲动的传导速度也进一步减慢。回归分析可知,中华大蟾蜍坐骨神经干的应激反应时间与草甘膦施用后天数呈正相关,而神经传导速度与药后天数呈负相关。由此可以说明,草甘膦胁迫条件下,中华大蟾蜍神经细胞对刺激反应的灵敏性降低,动作电位的产生及传导受到一定程度的抑制和阻碍。     

激光照射对中华大蟾蜍早期胚胎染色体的影响

应用YAG倍频激光器对中华大蟾蜍四细胞期胚胎进行照射,观察胚胎的生长、发育,并对激光照射致畸的胚胎在尾芽期用压片法进行染色体分析。实验结果表明：激光照射后正常的胚胎其染色体无变化,激光照射致畸的胚胎其染色体有丢失和加倍等变化。