溶血磷脂酸对离体培养的大鼠胚胎神经干细胞向神经胶质细胞分化的影响

本研究用免疫细胞化学荧光双标技术观察了溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对大鼠胚胎神经干细胞（neural stem cells,NSCs）分化为少突胶质细胞（galactocerebroside—positive,Gal-C阳性）和星形胶质细胞（grim fibrillary acidic protein-positive,GFAP阳性）的影响,并且用RT-PCR技术对NSCs可能表达的LPA受体进行分析。结果显示：（1）加入不同浓度（0．010．0μmol／L）LPA,第7天进行检测时,少突胶质细胞数量呈明显的剂量依赖性增加,峰值出现在1．0μmol／LLPA组,少突胶质细胞所占百分比从对照组的8．5％增加到32．6％;（2）星形胶质细胞的分化几乎不受LPA的影响,第7天时各LPA处理组星形胶质细胞百分比与对照组相比均无显著性差异;（3）RT-PCR结果显示,大鼠胚胎NSCs的LPA1和LPA3受体表达明显,而LPA3受体表达很弱。以上结果表明,较低浓度的LPA可能作为细胞外信号,通过LPA1和LPA3受体促进大鼠胚胎NSCs向少突胶质细胞分化和生成,但对星形胶质细胞的分化过程无明显影响。     

蛋白聚糖和溶血磷脂酸对不同细胞周期心脏成纤维细胞生长的影响

本文研究了蛋白聚糖（pG和）和溶血磷酸（LGA）对培养的处于不同细胞周期的SD乳鼠心脏成纤维细胞生长的影响及PG对LPA生物学活性的调节食用。采用流式细胞术测定细胞所处的周期;3H-TdR参人法测定细胞的DNA合成。研究结果表明（1）培养至次融汇状态的乳鼠心脏成纤维细胞经低血清（0.4%FBS）饥饿培养48小时,G0/G1期细胞占88.5%;G0/G1期细胞经2%FBS刺激24小时,G2期细胞占91。7%。（2）PGs对G0/G1期和G2期的心脏成纤维细胞的DNA合成均有摄制作用。2.94-47.04μg/ml PGs对G0/G1期细胞DNA合成的摄制率为80%-93%对G2期的抑制率为13%-94%.(3)1-80μmol/L范围内,LPA以浓度依赖方式促进不同细胞周期的心脏成纤维细胞DNA合成增加,50μmol/L LPA诱导G0/G1期和G2期细胞DNA合成的增加分别为78%±和122%±21%。（4）10μmol/L LPA存在下,2.94%-47.04μg/ml PGs使G0/G1期细胞和G2期细胞的DNA合成分别下降为对照的36%±11%-15%±10%和91%±13%-3%±1%,说明PGs可以抑制LPA诱导的心脏成纤维细胞DNA合成.上述研究结果提示PGs和LPA对乳鼠心脏成纤维细胞G1期至S期的转换有重要的调节作用,并可能通过调节心脏成纤维细胞的生长影响心肌肥厚的形成和发展.     

白细胞介素-2对心脏节律的作用及其机制的研究

目的：探讨白细胞介素－2（1L－2）对心脏节律作用及其可能机制。方法：采用体外培养乳鼠心肌细胞模型和离体人鼠灌流心脏模型,观察培养的心肌细胞搏动频率和离体心脏心率及节律。结果：①2.5-200u/ml的IL－2呈浓度依赖性地降低心肌细胞的搏动频率。②50u/ml的IL-2明显增加离体心脏心率和室性早搏个数。③propranolol预处理可取消50u/mlIL-2的离体心脏作用。④热失活IL－2对培养的心肌细胞搏动频率和离体心脏心率和心律都无显著作用。结论：IL－2可直接制培养心肌自律性,其对离体心脏的正性变时和致心律失常作用可能由内源性作茶酚胺介导。     

牛磺酸对蟾蜍离体心脏活动及蝌蚪抗缺氧能力的影响

研究牛磺酸对蟾蜍离体心脏活动及蝌蚪抗缺氧能力的影响。结果表明 :在气温为 (2 0± 1)℃时 ,浓度为 5g·L- 1 ,10g·L- 1 的牛磺酸任氏液使离体心脏跳动时间明显延长 (p <0 .0 5 ) ,浓度为 1g·L- 1 、5g·L- 1 的牛磺酸水溶液对蝌蚪抗缺氧能力有极显著 (p <0 .0 1)、显著 (p <0 .0 5 )改善     

牛磺酸镁抗豚鼠尖端扭转型室速的作用研究

目的：研究牛磺酸镁配位化合物（TMCC）抗豚鼠心脏尖端扭转型室速（TdP）的作用。方法：取健康、体重250~300 g的成年雄性豚鼠,随机分为4组：① TdP模型组（n=7）：离体心脏以K-H灌流液灌流20 min,然后使用IKs阻滞剂10μmol/L Chromanol 293B合并低钾（钾离子浓度为1.8 mmol/L）进行灌流,建立TdP模型。②~④ TdP模型+TMCC低中高浓度组（n=6）：正常灌流稳定20 min后,在建立TdP模型的同时分别给予1、2、4 mmol/L TMCC。采用Langendorff逆行主动脉灌流法灌流豚鼠离体心脏,利用Biopac电生理记录仪采集并记录豚鼠离体心脏表面心电图。从心电图第Ⅱ导联图形获取各组豚鼠离体心脏TdP发生率、跨室壁复极离散度、QT间期不稳定性,以观察TMCC对TdP的影响。观测指标量取时间分别为：豚鼠离体心脏正常灌流20 min时、TdP发生前及给药60 min时。结果：TdP模型组的TdP发生率为6/7。1、2、4mmol/L TMCC可降低TdP发生率,三组TdP发生率分别为5/6、1/6、0/6。与给药前相比,TdP模型组中Chromanol 293 B合并低钾可使豚鼠离体心脏校正后的跨室壁复极离散度显著增大（P<0.01）;与TdP模型组相比,TdP模型+1、2、4mmol/L TMCC组可明显减弱Chromanol 293B合并低钾导致的豚鼠离体心脏校正后的跨室壁复极离散度增大（P>0.05）。与模型组相比,2、4mmol/L TMCC明显降低Chromanol 293B合并低钾导致的QT间期不稳定增大（P<0.05）。在TdP模型建立过程中,从心电图中可观察到连续多个心动周期的P波消失,而在TdP模型+TMCC组中,心电图始终拥有独立P波。结论：TMCC可通过降低离体心脏跨室壁复极离散度和QT间期不稳定性以及抑制早后除极的发生而发挥抗TdP作用,降低TdP发生率。     

溶血磷脂酸对培养小鼠大脑皮层神经元的双重作用:抗凋亡和促凋亡

应用DNA电泳分析、HO33342和TUNEL染色法、以及部分地使用透射电镜技术,检测了不同浓度的溶血磷脂酸(1ysophosphatidic acid,LPA)对离体培养的小鼠大脑皮层神经元存活情况的影响.结果显示,低浓度的LPA(0.1～30μmol/L)对去血清培养所致的皮层神经元凋亡有浓度依赖性的保护作用,而较高浓度的LPA(＞50 μmol/L)不仅不表现这种保护作用,而且可引致培养在含血清的完全培养基中的皮层神经元出现凋亡.以上结果表明,适当浓度的LPA对凋亡的皮层神经元起着保护因子或抗凋亡因子的作用,而较高浓度的LPA则起着促凋亡因子的作用.     

E4031对慢性心衰大鼠离体心脏功能和心肌细胞内静息Ca^2＋水平的影响

目的：研究具有钠钙交换（NCX）激动作用的药物E 4031对慢性心衰大鼠离体心脏功能和心肌细胞内静息Ca2＋水平的影响。方法：通过腹主动脉缩窄建立大鼠慢性心力衰竭模型;利用Langendorff装置进行离体心脏灌流,检测大鼠心功能及E 4031对血流动力学指标的影响;急性分离心衰大鼠心肌细胞,与钙荧光指示剂fluo3/AM共同孵育后,用激光共聚焦显微镜系统观察E 4031对心肌细胞内荧光强度的影响。结果：缩窄大鼠腹主动脉12周后,langendorff离体灌流检测显示大鼠心功能明显降低;在灌流液中加入10μmol/L E 4031可以使心衰大鼠心脏左室发展压（LVDP）和左室收缩/舒张最大速率（±dp/dtmax）提高;与正常组和伪手术组相比,心衰大鼠心肌细胞内静息钙荧光强度明显升高,和10μmol/L E 4031共孵育后,心衰大鼠心肌细胞静息钙荧光强度呈现短期先升后降过程,然后在较低的水平保持稳定。结论：E 4031可以增强慢性心衰大鼠离体心功能,可能与其增强心肌细胞膜NCX活动,稳定细胞内Ca2＋水平有关。     

溶血磷脂酸受体及下游信号通路在心脏细胞生长中的调节作用

溶血磷脂酸（1ysophosphatidic acid,LPA）是一种十分活跃的磷脂信号分子,具有广泛的生物学效应,包括诱导神经轴突回缩、应力纤维形成、促进血小板凝集、诱导平滑肌收缩、刺激血管平滑肌细胞增殖等。LPA通过其受体及耦联的G蛋白调节细胞内信号途径,介导各种生物学效应。心脏组织中存在多种LPA受体亚型,尤其受体LPAl亚型在心脏组织中的含量仅次于脑,位居第二,暗示LPA在心脏中有重要的生物学功能。本文着重对LPA的5种受体亚型的组织分布、与G蛋白的耦联和对第二信使的活性调节,以及LPA及其受体亚型对心脏细胞的生长调节作一综述。     

适用于Langendorff离体心脏灌流大鼠心肌梗死动物模型的建立

目的建立适用于Lansendorff离体心脏灌流大鼠心肌梗死的动物模型,为评价干细胞移植对急性心肌梗死后的心功能变化提供基础。方法选用Sprague-Dawley（SD）大鼠16只,结扎其左冠状动脉前降支中远1/3处,在结扎前后通过MPA多导生理记录仪连续描记心电图;4周后再次开胸进行Langendorff离体心脏灌流测定左室心功能和心肌组织病理学检查;另选仅开关胸后存活的10只SD大鼠作为对照组。结果造模成功率为62．50％（10／16）;心电图动态监测在冠脉结扎后出现ST-T抬高的融合波,30min后可见病理性Q波;4周后Langendorff离体心脏灌流装置系统检测显示左室收缩压峰值（LVSP）、左室内压等容相最大上升及下降速率（＋dp／dtmax,-dp/dtmax）等指标较对照组降低,左室舒张末压峰值（LVEDP）则反之;病理组织切片可见结扎区域心肌纤维排列紊乱、坏死心肌被纤维组织取代。结论通过结扎左冠脉前降支的方法,4周后能够形成稳定的适用于Langendorff离体心脏灌流的心肌梗死动物模型,该模型能应用于干细胞移植对心脏功能影响的研究。     

线粒体钙单向转运体参予肿瘤坏死因子α抗心肌缺血/复灌损伤的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）诱导的抗心肌缺血／复灌损伤的保护作用是否与线粒体钙单向转运体以及相关成分有关。方法：采用离体大鼠心脏灌流方法,结扎冠状动脉左前降支30min和复灌120min复制局部缺血／复灌损伤模型,测定心肌梗死面积、冠脉流量和冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。提取大鼠心肌线粒体,分光光度法测啶,520nm吸光度。结果：与单纯缺血／复灌组相比,10U／ml TNFα预处理明显降低心脏缺血／复灌后的梗死面积和复灌期冠脉流出液中LDH含量,促进冠脉流量的恢复;复灌开始用线粒体钙单向转运体激动剂精胺（20μmol／L）灌流10min减弱了TNFα降低梗死面积和LDH含量的作用。10u／ml TNFα预处理离体大鼠心脏后分离线粒体,520nm处吸光度的下降明显低于对照组;精胺（50μmol／L）减弱了TNFα对520nm处吸光度的影响。结论：TNFα诱导的抗心肌缺血／复灌损伤的保护作用可能与其抑制线粒体钙单向转运体的开放和抑制线粒体通透性转变孔道开放有关。     

葛根素对离体大鼠缺血/复灌心脏的保护作用及其作用机制

目的：探讨葛根素（puerarin,Pue）预处理抗心肌缺血／复灌（ischemia／reperfusion,I／R）损伤是否与线粒体渗透性转换孔和／或线粒体ATP敏感性钾通道有关。方法：采用离体大鼠心脏Leangendorff灌流方法,全心停灌30min,复灌120min复制I／R模型。测定心室力学指标和复灌各时间点冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。实验结束测定心肌组织formazan量的变化。结果：与单纯I／R组相比,Pue（0．24mmol／L,5min）预处理明显提高心肌细胞的formazan含量,降低复灌期间冠脉流出液中LDH含量,明显促进左室发展压、左心室内压最大上升和下降速率、心率与发展压乘积和左室舒张末压力的恢复,缓解冠脉流量的减少。线粒体渗透性转换孔开放剂苍术苷（20μmol／L。复灌前给药20min）和线粒体ATP敏感性钾通道抑制剂5-羟基癸酸（100μmol／L,缺血前给药20min）能明显减弱Pue的保护作用。结论：在大鼠离体心脏灌流模型上,Pue预处理具有抗心脏缺血／复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其抑制线粒体渗透性转换孔的开放和促进线粒体ATP敏感性钾通道的开放有关。     

内源性儿茶酚胺参与白细胞介素-2对大鼠离体心脏的作用

目的: 研究内源性儿茶酚胺是否参与白细胞介素-2(IL-2)的心脏作用.方法: 采用Langendorff离体心脏灌流模型,观察室性早搏次数、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心率(HR)和冠脉流量(CF)的变化.结果: ①50 U/ml IL-2增加离体心脏的室性早搏次数,增加LVDP、LVEDP、HR和CF.②利舍平(reserpine)或普萘洛尔(propranolol)预处理后,50 U/ml IL-2对离体心脏的作用消失;phentolamine预处理后,不改变50U/ml IL-2的离体心脏作用.③200 U/ml IL-2增加离体心脏的室性早搏次数,对LVDP、LVEDP、HR和CF无显著增加作用.④reserpine或propranolol预处理后,200 U/ml IL-2增加离体心脏的室性早搏次数作用不明显,LVDP、HR和CF降低、LVEDP增高.结论: 内源性儿茶酚胺介导了IL-2的致离体心脏心律失常、正性变时和变力作用,较高浓度的IL-2抑制离体心脏的功能.     

菊米提取液抗实验性心律失常作用的研究

目的：观察菊米提取液对氯仿、乌头碱和缺血诱发的心律失常的作用：方法：采用氯仿诱导小鼠心律失常,静脉注射乌头碱和冠脉结扎法诱导大鼠心律失常,术前5d给予菊米提取液,记录心电图曲线、结果：菊米提取液能剂量依赖性地明显降低氯仿诱导的小鼠室颤发生率与对照组相比,奎尼丁可明显减少乌头碱（30μg／kg）诱导的大鼠室性早搏和室性心动过速的发生次数,缩短心律失常的持续时间=但菊米提取液组对乌头碱诱导的大鼠心律失常无明显作用：高浓度菊米提取液（2．0g／kg）可明显降低缺血复灌性心律失常评分。但低、中浓度菊米提取液（0．5g／kg和1．0g／kg）对缺血心脏心律失常评分无明显作用.结论：菊米提取液可对抗氯仿和缺血诱导的实验性心律失常,但对乌头碱引发的心律失常无影响.     

丹酚酸B对大鼠离体工作心脏血流动力学的影响

目的 研究丹酚酸B对离体大鼠工作心脏血流动力学的影响.方法 采用Langendorff离体心脏灌流的方法,以左室内压( LVSP)、左室舒末压(LVEDP)、室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、室内压最大下降速率(- dp/dtmax)、心率(HR)等血流动力学参数为指标,观察丹酚酸B对心肌收缩性能的影响.结果 不同剂量(10、5、2.5 mg/L)的丹酚酸B可使LVSP、±dp/dtmax明显升高,同时使HR减慢,并呈剂量依赖性,但对LVEDP无明显作用.结论 丹酚酸B对离体工作心脏有剂量依赖性正性肌力作用.     

LPA-LPA3信号参与调控出生后小鼠的心脏发育

溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)是一类结构最简单的生物活性小分子,参与多种细胞的增殖、存活及组织器官的发育.我们前期研究发现,LPA可促进原代大鼠心肌细胞增殖.然而,LPA信号及其受体在心脏发育中的作用仍尚不清晰.为此,首先利用生物信息数据库和实时荧光定量PCR分析了 6种LPA受体(L...     

异丙酚对离体大鼠心肌缺血、再灌注损伤后细胞凋亡及其机制研究

目的：观察异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响并从氧化应激和线粒体介导的凋亡方面探讨其作用机制。方法：应用Langendorff离体心脏灌注系统建立心肌缺血/再灌注损伤模型。40只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血/再灌注模型（I/R）组、异丙酚15、30、60μmol.L-1组。除正常对照组外,各组分别平衡灌注20 min后,常温全心停灌25 min,再灌注30 min。Powerlab/8s仪记录各组平衡末、缺血前及再灌30 min时的各项心功能指标并测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性;检测心肌线粒体活力、膜肿胀度、锰超氧化物岐化酶（Mn-SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;流式细胞术检测Bcl-2和Bax的表达,免疫组化法测定天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3,9,8蛋白的表达。结果：与I/R组相比,异丙酚30、60μmol.L-1能明显改善缺血/再灌注后的心功能,减弱冠脉流出液中LDH、CK的活性（P〈0.05）;心肌线粒体活力有所恢复,膜肿胀度减轻,Mn-SOD活性升高,MDA生成明显减少（P〈0.05）,心肌细胞凋亡明显减少,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,caspase-3,9阳性表达细胞数明显减少（P〈0.05）。结论：异丙酚明显减轻缺血/再灌注所致的心肌线粒体的过氧化损伤,抑制线粒体途径的凋亡,可能是其心肌保护作用机制之一。     

溶血磷脂酸促进离体大鼠胚胎神经干细胞的增殖及其向胆碱能神经元分化

溶血磷脂酸（1ysophosphatidic acid,LPA）是一种细胞外磷脂信号。本研究用[^3H]-胸腺嘧啶掺入法、免疫细胞化学和Western blot等技术,观察了LPA对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的增殖以及向MAF2标记的一般神经元和ChAT标记的胆碱能神经元的分化的影响。结果显示：（1）在特殊的无血清培养基中加入低浓度的LPA（0．01-1．0μmol/L）后,NSCs对【^3H】-胸腺嘧啶的摄入呈剂量依赖性增加,表明LPA对NSCs有显著的促增殖作用;（2）在培养基中加入胎牛血清以诱导NSCs的分化,发现低浓度的LPA增加MAF2阳性和ChAT阳性神经元的比例,0．1μmol／L LPA引起的增加达到峰值;（3）Western blot分析显示LPA促进了MAP2和ChAT的表达;（4）在诱导NSCs出现分化早期,用倒置显微镜观察到低浓度的LPA明显促进细胞突起的生长和细胞的迁移。以上结果表明,低浓度LPA在一定范围内可以促进NSCs的增殖、并分化为一般的MAP2阳性神经元和特殊的胆碱能神经元,而且LPA可以促进在分化早期出现的神经元或神经胶质细胞前体细胞的迁移和突起生长。     

急性冠状动脉综合症患者血浆溶血磷脂酸及基质金属蛋白酶-9水平的检测及意义

目的：探讨急性冠状动脉综合症（acute coronary syndromes,ACS）患者血浆溶血磷脂酸（lysophatidic acid,LPA）及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP．9）水平的变化,探讨其在ACS中可能的临床意义。方法：入选100例ACS患者,根据病情将其分为怠性心肌梗死（AMI）组50例,不稳定型心绞痛（UAP）组50例,并入选40例健康者作为对照组,分别用无机磷定量法和酶联免疫吸附测定法测定血浆LPA、MMP-9水平。结果：AMI组血浆LPA、MMP-9水平显著高于UAP组（LPA：3．29±0．42vs2．67±0．37;MMP-9：481．7±86．5VS237．85±65．34,P〈0．01）并且两组均显著高于对照组（LPA：1．82±0．31;MMP-9：87．42±23．85P〈0．01）;LPA与MMP-9水平呈正相关（r=O．224,P〈0．05）。结论：UIA与MMP-9可能是提示不稳定斑块的形成、破裂,进而导致急性冠状动脉综合征的危险信号。     

不同pH条件下离体大鼠胸主动脉对多巴胺反应性的变化

目的：观察不同pH值条件下大鼠胸主动脉对多巴胺反应性的变化。方法：采用离体血管灌流方法,观察①胸主动脉对不同浓度多巴胺的反应。②检测不同pH值备件下血管对多巴胺反应性的变化。结果：①不同浓度多巴胺（10^-6mol·L-1,10^-5mol·L^-1,10^-4mol·L^-1）均能增加正常大鼠胸主动脉收缩力。②pH值依次降低（7．4,7．3,7．2,7．1,7．0,6．9,618,6．7）,大鼠离体胸主动脉对多巴胺10^-5mol／L反应性下降,血管在pH6．6时完全失去对多巴胺的反应性。结论：大鼠胸主动脉对多巴胺刺激的反应性随环境pH值的变化而变化,表现为随着环境pH值的下降,离体动脉对多巴胺刺激的反应性也随之下降。     

用于核磁共振检测的离体心脏灌流模型

本报告是关于核磁共振研究生理学问题的灌流模型。我们解决了Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流装置用于核磁共振研究时存在的问题,如远距离灌流、保温、保氧和灌流液回收等,建立了稳定的可供核磁共振测量用的灌流模型。在这个装置中离体大鼠心脏的节律性活动可维持９０ｍｉｎ以上。