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目的:克隆并验证内皮细胞(Endothelial Cells,ECs)特异性启动子,为转染人胚胎干细胞(h ESC)后实时监测ECs的定向分化情况以及利用干细胞实施血友病A的基因治疗研究提供基础。方法:通过酶消化法原代分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs),结合RT-PCR和免疫荧光验证分离后的HUVECs表达内皮细胞特异性标志基因血管性血友病因子(v WF)和血管内皮钙粘素(VE-cadherin/CDH5)。抽提HUVECs的g DNA,通过PCR扩增内皮细胞特异性表达基因v WF和VE-cadherin转录起始位点上游不同大小的启动子片段,将其取代报告基因载体p EGFP-N1中的广谱启动子CMV,构建4个质粒,即pv WF-1、pv WF-2、p VE-1、p VE-2,分别转染HUVECs和h ESCs,48 h后观察并比较各启动子片段启动绿色荧光蛋白GFP表达情况,筛选最具特异性及转录活性的启动子片段。结果:通过酶消化法,本研究成功分离出具有典型上皮样细胞的HUVECs。RT-PCR和免疫荧光结果表明HUVECs特异性表达v WF和VE-cadherin。酶切及测序证实所构建的4个含ECs特异性启动子片段的质粒与理论序列相符,通过核转染至HUVECs及h ESCs后,48 h后观察到所克隆的VE-cadherin 2105bp启动子片段具有内皮细胞表达的特异性和较强的转录活性。结论:本研究成功筛选出具有内皮细胞表达特异性及较强转录活性的启动子片段。 相似文献
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植物果实的特异型启动子 总被引:4,自引:0,他引:4
植物果实特异型启动子能控制外源基因在果实中特异表达。目前已获得的果实特异型启动子主要包括E8、2A11/2A12、PG、MCPI、B33和ACC氧化酶启动子等。该文主要对这些果实特异性启动子及其存在的问题进行了总结,并对该领域今后的发展趋势进行了展望。 相似文献
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启动子克隆方法研究进展 总被引:15,自引:0,他引:15
启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR法的克隆启动子技术,像I-PCR、P-PCR、SSP-PCR、YADE、TAIL-PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。对这几种方法进行了简要综述,比较了不同方法的优缺点,并展望了今后的研究前景。 相似文献
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Promoter usage and alternative splicing 总被引:1,自引:0,他引:1
Kornblihtt AR 《Current opinion in cell biology》2005,17(3):262-268
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人类polⅡ启动子的识别 总被引:14,自引:2,他引:12
依据基因启动子区和非启动子区碱基分布的特征,应用基于多样性增量的二次判别分析 (IDQD),对人类polⅡ启动子进行识别,识别精度达到90%以上的水平,优于其他已发表的 (包括SVM分类器等) 识别算法. 使用IDQD算法也能对转录起始位点 (TSS) 进行较准确的预测,10-fold交叉检验结果的敏感性和特异性分别为86%和91%. 这些结果表明IDQD是一个有效的分类器. 相似文献
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真核生物中蛋白质编码基因的核心启动子元件有4类:传统的TATA盒,上游核心启动子元件BRE,下游启动子元件DPE起始子(initiator,Inr).Initiator元件指的是一段富含嘧啶的序列-PyPyA 1NT/ApyPy,转录起始点位于其中的+1位。研究表明它被多种转录因子识别和结合,包括TAFⅡ250,TAFⅡ150,TFⅡ-I,YY1和RNA聚合酶Ⅱ等,反映出initiator调控的复杂性。Initiator多存在于人类的管家基础,癌基因,生长因子基因和转录因子基因中,在这些基因的转录起始过程中有发挥着关键作用。 相似文献
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Ariadna Peremarti Richard M. Twyman Sonia Gómez-Galera Shaista Naqvi Gemma Farré Maite Sabalza Bruna Miralpeix Svetlana Dashevskaya Dawei Yuan Koreen Ramessar Paul Christou Changfu Zhu Ludovic Bassie Teresa Capell 《Plant molecular biology》2010,73(4-5):363-378
Multigene transformation (MGT) is becoming routine in plant biotechnology as researchers seek to generate more complex and ambitious phenotypes in transgenic plants. Every nuclear transgene requires its own promoter, so when coordinated expression is required, the introduction of multiple genes leads inevitably to two opposing strategies: different promoters may be used for each transgene, or the same promoter may be used over and over again. In the former case, there may be a shortage of different promoters with matching activities, but repetitious promoter use may in some cases have a negative impact on transgene stability and expression. Using illustrative case studies, we discuss promoter deployment strategies in transgenic plants that increase the likelihood of successful and stable multiple transgene expression. 相似文献
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目的:MAL1基因启动子区在原核生物大肠杆菌中是否有双向启动外源基因的功能。方法:利用PCR扩增MAL1基因启动子区,将不同方向的MAL1基因启动子区后接上Zeocin基因,构建成重组报告质粒,转化大肠杆菌DH5α,验证该启动子区是否双向都具有启动外源基因的功能。结果:将含不同方向启动子区的重组质粒PUCMZ1和PUCMZ2,转化大肠杆菌,转化子均有Zeoein抗性。结论:证明了MAL1结构基因上游启动子区在原核生物大肠杆菌中具有双向启动的功能,且3′-5′方向的启动能力强于5′-3′方向。 相似文献
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原核启动子识别研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
原核启动子识别是研究原核基因转录调控的重要环节。该文以大肠杆菌为例,首先介绍原核启动子的基本特征,再对已有的各种识别方法进行具体分析,最后探讨可能的改进方向。 相似文献