美国开始重组IL1ra的临床试验

美国Synergen公司(科罗拉多州Boulder)公布8月向美国食品与药物管理局(FDA)申请在美国进行白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL1ra)的临床试验.IL1ra是诱发炎症反应的淋巴因子IL1的阻抑物质.仅在美国风湿性关节炎患者就有约200万人以上.此外,该公司为了将IL1ra的适应范围扩大到革兰氏阴性细菌的感染性休克、炎症性大肠炎等,预定最近向食品与药物管理局申请临床试验.原来是与瑞士Roche公司开发IL1ra.但是1990年废除了合同,现在由Synergen公司单独开发.     

重组风疹病毒抗原的分离纯化

为了制备临床诊断用的风疹病毒抗原,建立了亲合色谱分离纯化的方法.风疹抗原以可溶性形式在大肠杆菌工程菌中获得高效表达,用GST亲合色谱在不变性的条件下直接从细菌裂解液中分离纯化.纯化的目的蛋白电泳为单一条带,EUISA试验表明,重组抗原与风疹病毒IgM阳性血清能特异反应,而与IgM阴性血清不反应,表明重组蛋白具有良好的抗原性,能满足临床检验要求.     

开发抑制HIV整合酶的抗艾滋病药“AR-177”

美国Aronex Pharmaceuticals公司(得克萨斯州,Woodlands)开发了通过阻碍AIDS病毒(HIV)整合酶抑制病毒增殖的寡核苷酸制剂“AR-177”。目前还处于初步阶段。 迄今为止接受美国食品医药品局(FDA)认可的抗HIV药都是以逆转录酶或HIV蛋白分解酶为标记。但是,“AR-177”作用于与上述不同的标记。整合酶具有把HIV的DNA整合到宿主细胞的染色体中的机能。另外,逆转录酶进行病毒基因的复制,病毒粒子形成需要HIV蛋白分解酵。“AR-177”与这些现有药     

与Incyte公司合作开发败血症治疗药

美国Genentech公司9月23日向美国Incyte Pharmaceuticals公司投资1400万美元,与一家公司签订了共同开发败血症治疗药BPI。该公司获得BPI的全世界销售权(除日本和远东)。 BPI是美国New York大学的研究者和Genentech公司共同克隆的蛋白。Incyte公司开发的BPI是灭活革兰氏阴性细菌释放的外毒素的内因性的解毒蛋白。外毒素是引起败血症的致病物质。BPI产生免疫细胞,存在于某种粒性白细胞中。确认它与单克隆抗体不同,广泛地结合多种细菌所产生的外毒素,并无毒化。用动物实验挽救注射致死量外毒素的动物获得成功。     

细菌脲酶蛋白复合物及其活化机制

脲酶能够催化尿素分解生成氨,在农业和医学领域中具有重要的意义。细菌脲酶蛋白包括结构蛋白(UreA、UreB和UreC)和辅助蛋白(UreD/UreH、UreE、UreF和UreG),它们在脲酶活化过程中各自具有独特的作用,结构蛋白形成脲酶活性中心,而辅助蛋白主要负责镍离子的传递。文中综述了细菌脲酶蛋白复合物的结构和功能,以及各蛋白之间如何相互作用完成其活化过程,以期为脲酶活性调控研究及脲酶抑制剂开发等提供理论指导。     

G145R突变后乙型肝炎病毒表面抗原在酵母系统的表达及其免疫学特性分析

为了研究乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)发生G145R突变后的免疫学特性改变情况,首先利用Pichia pastoris酵母表达系统分泌表达G145R突变后的HBsAg的preS2 S(中蛋白),用重组表达产物免疫小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot实验等研究其抗原性和免疫原性与野毒型HBsAg的异同。从150个阳性表达克隆中筛选出一株表达量最高的克隆株MC23,Western blot检测显示,表达的HBsAg中蛋白单体主带分子量在34kD、37kD左右,表达量约为200μg／L。用不同的HBsAg检测试剂检测其抗原性发现,G145R突变后的HBsAg,用绝大多数试剂都不能很好地检出,检出能力只有野毒型HBsAg的50％或更低,但用美国雅培公司的试剂检出能力可达野毒的98％。G145R突变后的HBsAg中蛋白免疫小鼠后,血清中可检测到1：1600的特异性表面抗体,该抗体与G145R突变后的HBsAg“a”决定簇合成肽P2—145R也能发生交叉反应,反应滴度为1：80。但该抗体和野毒型HBsAg蛋白以及野毒“a”决定簇合成肽P1-wt均不反应。上述结果表明,G145R突变后的HBsAg中蛋白在Pichia pastoris酵母系统得到了分泌表达,表达产物仍具有较好的免疫原性,但和野毒HBsAg相比,其抗原性和免疫原性发生了明显改变。     

丙肝病毒核心蛋白与乙肝病毒核心抗原的融合表达及其性质研究

构建了丙肝病毒核心蛋白 ( 1～ 191)及其N端 ( 1～ 69)和 ( 1～ 40 )与乙肝病毒核心抗原 ( 1～ 14 4 )羧端的融合克隆 ,在大肠杆菌中进行了表达 .其表达产物B14 4C191,B14 4C69和B14 4C40同时具有乙肝核心抗原 (HBc)和丙肝核心蛋白 (HCc)的双重抗原性和免疫原性 .CsCl密度梯度超离心和电镜观察表明 ,融合蛋白能组装成颗粒 .比较等量的融合蛋白的抗原性和免疫原性后发现 ,融合的HCc长度对HBc的抗原性和免疫原性影响不大 .而B14 4C69和B14 4C40比B14 4C191免疫小鼠能产生更高的抗HCc抗体 .利用表达的融合蛋白建立了ELISA法 ,对人血清中抗HBc抗体和抗HCc抗体进行了检测 .     

日销售美制利用虫萤光素酶的微生物检测装置

日本丸红公司销售了美国IMSCO公司开发的商品名为MICROSURE的微生物检测装置。每台650万日元。这种装置利用萤火虫的虫萤光素酶,测定活微生物的ATP。可省去以前活菌检查所需的培养操作,15分钟就能检出微生物(细菌、酵母、霉菌)。根据说明书,其检测灵敏度是每100毫升中,酵母为1～3个,细菌为30～50个。以吸引人的字句说它具有超高灵敏度。至于其用途,举出了两方面:一是食品和饮料制造过程中的品质管理,二是IC(集成电     

人R_O蛋白(60kD)编码序列的PCR产物在E.coli中的克隆与表达

通过聚合酶链反应 ( PCR)自人脾 c DNA扩增 RO 蛋白 ( 60 k D)编码 DNA片段 .将该片段定向插入麦芽糖结合蛋白 ( MBP)融合系统的 p MALTM- c载体中并转化 E.coli ( DH5α) ,通过酶联免疫印迹 ( IBT)筛选出具有 RO 抗原性的阳性克隆 .绝大部分阳性克隆表达完整的 RO 融合蛋白 ( 1 0 0k D) .但在传代过程中表达水平很快降低 ;少数阳性克隆虽然表达非完整 RO 融合蛋白 (分子量 <80k D) ,但表达水平却高而且稳定 .同时保留了很强的 RO 抗原性 .产生非完整融合蛋白的一个原因是 ,PCR碱基错配引起 RO 编码 DNA的序列缺失 ;另一原因是融合蛋白在表达过程中被降解     

猿猴疱疹病毒B糖蛋白D的表达及抗原性的探讨

目的表达猴B病毒糖蛋白D(BVgD)并对其抗原性进行初步研究。方法应用体外原核表达BVgD,继而进行Ni离子亲和层析纯化。采用Western blotting对蛋白抗原性进行分析,评估其抗原潜力。结果完成了对BVgD的小量表达和纯化。Western blotting结果表明表达出的重组蛋白BVgD具有特异性结合猴B病毒抗体的能力。结论BVgD重组蛋白具有良好的抗原性,与HSV-1抗体无交叉反应。具有进一步开发的潜力,也为BVgD免疫原性等方面的进一步研究提供了条件。     

高温暴露对黑线仓鼠能量代谢和组织氧化应激的影响

动物能量代谢的适应性调节影响动物生长、发育、繁殖、衰老等生活史特征。代谢率和组织线粒体呼吸率与自由基水平有关，是影响机体衰老的重要因素。为了探讨高温环境下能量代谢、主要代谢活性器官组织呼吸率、自由基水平和抗氧化能力的内在联系，我们将室温(21℃)和暖温(32.5℃)驯化4周的黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)分别进行急性高温暴露(37℃) 48 h，分别测定摄入能、代谢率，以及褐色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)、肝脏和肌肉的线粒体呼吸率，解偶联蛋白(uncoupling protein, UCP)基因(ucp)表达，蛋白羰基和丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平，以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性。结果显示，暖温驯化和急性高温暴露使摄入能、消化能、基础代谢率和非颤抖性产热显著降低。暖温驯化后BAT、肝脏和肌肉的细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase, COX)活性分别降低了...     

巨噬细胞集落刺激因子克隆化成功

日本森永乳业公司和美国 Genetics Institute(GI)公司都宣布成功地克隆化了有待查明其机理的血液增殖分化因子——人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF,CSF-1)的基因。M-CSF 是刺激巨噬细胞的前驱细胞,促进巨噬细胞增殖分化的因子。巨噬细胞是能吞食细菌和癌细胞等,并从体内排出的非特异性的免疫系统的主力,是活体防御的重要细胞。GI 公司开发 M-CSF 的目的是为了制造肺炎等感染症的治疗药,现在正进行临证前期试验,计划在1987年内进入临床试验。森永乳业公司是否要开发重组 M-CSF,现在似乎还没有决     

单纯疱疹病毒I型糖蛋白D胞外区的真核表达及生物学活性分析

单纯疱疹病毒 (Herpes simplex virus,HSV) 包膜糖蛋白D (glycoprotein D,gD) 是HSV的结构蛋白之一,具有重要抗原表位,是目前疫苗研究的热点。为了分离纯化HSV gD1糖蛋白胞外区片段并对其生物学活性进行分析,本研究将化学合成的gD1胞外区基因片段克隆至真核表达载体pCEP4,重组质粒转染HEK293细胞进行瞬时表达,产物经Western blotting检测后用亲和层析法进行分离纯化,ELISA检测其抗原性。以纯化的重组蛋白作为抗原免疫小鼠,ELISA测血清特异性抗体效价以评价其免疫原性。构建的重组质粒经测序显示基因序列完全正确。表达产物的Western blotting分析发现,在相对分子量约46 kDa处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。用Ni柱得到了纯化的重组gD1蛋白,ELISA检测显示其具有良好的抗原性,免疫小鼠7周后血清中抗体效价达到5×103。重组gD1蛋白的抗原性及免疫原性分析为HSV检测试剂和基因重组亚单位疫苗的研制提供了实验依据。     

美开发麻疯病和结核病疫苗

美国马萨诸塞州坎布里奇的(Applied bioTechnology公司,AbT)利用痘苗病毒开发了用于麻疯病和结核病的原型rDNA疫苗。由于痘苗病毒易于用培养基培养,所以公司认为自己生产的疫苗成本会相当低,能在第三世界应用。这两种病在第三世界发生最多。 AbT公司为生产这两种疫苗从麻疯病细菌和结核病细菌转移了产生抗原的基因。试验证明,痘苗病毒表达了上述基因,目前正在进行动物试验。     

切胶纯化表达蛋白包涵体的可行性分析

目的:高效率地纯化以包涵体形式表达的蛋白。方法:将SDS-PAGE电泳后的目的蛋白用4mol/L的乙酸钠显现出来,切割下来的目的蛋白可直接用于免疫,将切割下来的目的蛋白装在透析袋中,在电场中将游离的目的蛋白洗脱下来可用于ELISA检测。结果:用该法得到的蛋白经ELISA和Western blot检测均能保持其原有的抗原性,并用该法纯化的蛋白成功制备了相应的多抗和单抗。结论:证实了回收的蛋白仍能保留原有的抗原性,与传统的方法比较,方法简单且比较经济实用特别是包涵体,为切胶纯化蛋白提供了一个新的方法。     

大肠杆菌耐热肠毒素在细菌表面的呈现

为了探讨CS3菌毛呈现载体用于呈现立体表位的可行性,选择大肠杆菌耐热肠毒素（ST）作为靶蛋白,通过全细胞ELISA,电镜技术来检测重组蛋白的表达,结果显示重组蛋白以杂合菌毛的形式得到了表达,并保持有CS3载体蛋白的抗原性,初步表明ST在细菌表面得到呈现,CS3菌毛呈现载体可用于立体表位的呈现。     

用基因克隆技术制造A蛋白

A蛋白(Protein A)原来是从致命性金黄色葡萄球菌的细胞外壳提取的。由于细菌的致病性,A蛋白的生产过程很不安全。最近,Repligen公司成功地用大肠杆菌表达了A蛋白的基因,并在该基因上接加了一个启动子,使产量提高。     

统合生物工艺与纤维素分解性高温菌乙醇转化的研究进展

生物乙醇是可再生的绿色能源,作为可以完全或部分替代化石能源的新型能源,近年来受到了世界各国的关注.木质纤维素作为生物乙醇的生产原料具有巨大的市场潜力,而统合生物工艺(CBP)能有效降低木质纤维素乙醇的生产成本,为纤维素乙醇的工业化生产提供了新的工艺思路.主要介绍利用高温纤维素分解菌的统合生物工艺策略以及国内外对高温纤维素分解茵代谢工程研究的最新进展.     

艾滋病的尿液检测手段

美国食品药物管理局(FDA)于今年4月决定考虑批准家用艾滋病检测药盒打入市场,这一决定偶然地促成了一家公司,即Calypte Biomedical Corp.(Berkeley,CA)的发展.该公司在艾滋病尿测法的开发中走在前沿,它宣称已拥有一套检测药物(CBC EI HIV EIA),与常规血检法一样精确.是根据重组型HIV-I外壳蛋白制备的.尽管当初开发这     

利用新酵母开发效率高的人蛋白的分泌系

日本一公司宣布利用分泌能力强于传统的酿酒酵母力的酵母克鲁维酵母,着手开发人蛋白的分泌系。该公司的母公司西德 Hoechst 公司用酿洒酵母的分泌系生产粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。如果能开发有望的系,将来该公司的生物药品生产系也有可能采用新开的有望系。