抑制JAK/STAT信号通路可减轻激素诱导的MRL/lpr狼疮鼠股骨头坏死

股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head, ONFH)是系统性红斑狼疮(systematic lupus erythematosus, SLE)并发症之一,其发病机制复杂,治疗棘手,是SLE致残的主要原因。已有研究证实,JAK/STAT信号通路参与SLE的病理过程,而JAK/STAT激活也被发现与ONFH的发生有关。我们推测并证实,JAK/STAT信号通路在SLE-ONFH发生发展中发挥了重要作用。30只雌性MRL/lpr小鼠随机分为3组：模型组(脂多糖/24 h, 2次+甲基强的松龙/24 h, 3次)、对照组(加等量PBS)和治疗组(模型组+JAK1/2抑制剂巴瑞替尼/d, 6周),每组各10只。比较各组小鼠抓力的结果表明,模型组小鼠在第4周与第6周时,抓力值较对照组明显减少(P<0.05);治疗组小鼠在第6周时,抓力值优于模型组(P<0.05)。造模第6周处死小鼠取双侧股骨头,观察股骨头形态及HE染色病理改变。结果表明,对照组小鼠股骨头呈球型,透亮,骨质坚硬,无软骨缺损;模型组小鼠股骨头呈不规则型,粗糙,色泽灰暗,股骨头有部分缺损;治疗组...     

四氯化碳联合二乙基亚硝胺对小鼠精巢的毒性作用

为了研究四氯化碳(CCL4)联合二乙基亚硝胺(DEN)对小鼠(Mus musculus domesticus)精巢的毒性作用。将昆明小鼠随机分为对照组与实验组,各12只个体。实验组每周2次腹腔注射含有15%CCl4的花生油溶液,同时自由饮用0.07‰的DEN溶液,连续诱导8周。对照组每周2次注射花生油,饮用蒸馏水。分别于第3、6、8周处死实验组及对照组小鼠各4只,对其精巢组织进行常规固定、包埋、切片、H.E染色,观察精巢的形态及精子数量的变化。与实验组比较,对照组小鼠体重明显增加,且实验组与对照组差异显著;与对照组相比,实验组睾丸系数以及精子存活率均显著减少。对照组小鼠精巢都具有正常的生精小管结构,管腔中存在大量精子;第3周,实验组小鼠的精巢与对照组类似,生精小管较为完整,生精细胞稍有散乱;第6周,实验组生精小管变形,生精细胞排列疏松,精子数目减少且畸形;第8周,实验组生精小管残缺不全,生精细胞和精子散乱排列,精子数量大大减少且变形更为严重。实验说明,CCl4联合DEN能够造成小鼠精巢组织的损害以及精子数目的减少和畸变。     

用H—Y抗体在宫内处理植入前鼠胚对后代性比的影响

本文以C57BL/6J鼠分2组进行实验。实验组45鼠,对照组20鼠,与同品系雄鼠交配后,在3日龄胚期,通过腹部手术对实验组雌鼠每侧子宫腔内注入未稀释的H-Y抗血清与豚鼠补体(二者以1:2混合)3μl。抗血清是由C57BL/6L雌鼠用同品系雄鼠的脾细胞以2.5×10~7个/只的剂量,每周免疫一次,共免疫7次后制备。对照组的处理操作与实验组相同,但每侧子宫腔内仅注入补体3μl,未注入抗体。实验组中有42只产仔247只(每窝平均6只),雌雄比为2.7(180/67)雌性占73％;对照组20只均产仔共163只(每窝平均8只),雌雄比为0.92(78/85),雌性仔鼠占48％。实验组雌性仔鼠百分率比对照组提高了25％。据X~2检验结果表明,实验组与对照组间的差异很显著(P<0.001)。     

低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的研究低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响。方法实验组小鼠和对照组小鼠分别在15w紫外灯照射产生的低浓度臭氧环境下和正常无臭氧环境下连续饲养7周,观察其体重变化;阴道涂片镜检观察雌性小鼠的动情周期。7周后,取脑、心、肝、脾、肺、肾等组织标本,做组织病理学分析;利用全自动生化分析仪对部分血清生化指标进行测定,利用放免试剂盒对血清性激素水平进行测定。结果实验组雌性小鼠体重与对照组雌性小鼠差异无统计学意义,实验组雄性小鼠体重比对照组雄性小鼠轻;实验组雌性小鼠的动情周期与对照组雌性小鼠差异无统计学意义;实验组与对照组小鼠的组织切片均未发现异常;实验组小鼠的血清生化指标以及血清性激素水平与对照组小鼠差异无统计学意义。结论本实验中紫外灯照射产生的低浓度臭氧对昆明小鼠的生长发育基本无影响。     

乙酰基亚硝基脲(ENU)对C57BL/6J雄鼠睾丸组织的影响

目的 观察乙酰基亚硝基脲(ENU)对雄鼠睾丸及其他组织器官的影响,分析引起小鼠死亡的原因,探索ENU处理雄鼠后的最佳配种时间.方法 将8～10周龄的C57BL/6J雄鼠分为实验组和对照组.实验组腹腔注射ENU 100 mg/kg,每周1次,共3次,对照组以同样方法注射生理盐水.首次注射ENU后的第1周至12周,每周分别取4只实验组小鼠和对照组小鼠剖检及组织病理学观察;取其睾丸附睾称重及精子计数.记录死亡小鼠数量,并对其剖检及组织病理学观察.结果 对死亡小鼠剖检发现胸腔纵隔内有巨大肿块,明显压迫心脏;组织切片观察发现睾丸和肝脏有明显病变.实验组小鼠睾丸从ENU处理的第2周起开始萎缩,第9周开始恢复;精子数量第4周至第9周稀少.结论 ENU为小鼠的一种强诱变剂,纵隔肿瘤是导致雄鼠死亡的主要原因,雄鼠注射ENU后最佳配种时间应在首次注射后的第9周.     

抗IL-6抗体治疗小鼠变应性鼻炎的作用的研究

目的：探讨IL-6 抗体治疗小鼠变应性鼻炎的作用。方法：实验动物分三组：PBS 组（正常对照组）、抗IL-6 抗体组（以抗IL-6 单 克隆抗体处理）、IgG 抗体对照组（以IgG对照抗体处理）。应用卵清蛋白（OVA）致敏建立小鼠变应性鼻炎模型,给予抗IL-6 单克 隆抗体干预,计量抗原激发后小鼠搔鼻数量。应用HE染色方法检测对小鼠鼻黏膜炎症影响,应用ELISA 法检测小鼠灌洗液中 IL-4、IFN-r含量。结果：治疗后抗IL-6 抗体组小鼠搔鼻症状相对于抗体对照组明显减轻（P<0.01)。与PBS 组比较,IgG 抗体对照组 小鼠鼻腔灌洗液中总炎性细胞数,淋巴细胞数及嗜酸性粒细胞数明显升高（P<0.05);IL-6 抗体治疗后,小鼠鼻腔灌洗液中总炎性 细胞数,淋巴细胞数及嗜酸性粒细胞数明显降低（P<0.05);IgG抗体对照组小鼠鼻腔灌洗液IL-4 含量明显升高（P<0.01),而IFN-r 含量不变（P>0.05);IL-6 抗体治疗后,IL-4 含量较IgG 抗体对照组降低（P<0.05),IFN-r含量不变（P>0.05)。结论：IL-6 抗体可有效 治疗小鼠变应性鼻炎。     

四氯化碳联合二乙基亚硝胺对小鼠肾脏毒性作用的研究

为了研究四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)联合二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)对小鼠肾脏组织的毒性损伤作用,将30只雄性昆明鼠随机分为对照组和实验组,其中实验组小鼠每周2次腹腔注射15%CCl_4花生油溶液,并且自由饮用0.07%DEN溶液;而对照组小鼠注射等量的纯花生油,自由饮用纯净水,观察并记录各组小鼠的饮水、进食情况和体重变化,以及生活状态的改变。在实验过程中,分别于第3、6、8周解剖两组小鼠各4只,取其肾脏组织样本进行病理方面的组织切片观察。体重统计结果显示,与对照组相比,实验组小鼠体重明显下降。同时,实验组小鼠的肾脏系数明显高于对照组,并且具有显著差异(P0.05)。组织切片观察发现,对照组小鼠肾脏组织结构比较清晰,排列较规则,而实验组小鼠肾脏组织呈现出显著的变性和坏死;且随着处理时间的延长,肾脏组织变得散乱无规则,细胞凝集现象越来越明显,肾小管与集合小管管腔变窄,颗粒样变性。上述结果表明CCl_4联合DEN对小鼠肾脏具有损伤效应,处理时间越长,损伤作用越严重。     

肝螺杆菌感染对BALB/c小鼠免疫应答干扰的初步研究

目的探讨肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)感染对小鼠骨髓源树突状细胞(DC)表面分子形态和机体免疫应答的干扰。方法以H.hepaticus(ATCC 51450)灌饲SPF级BALB/c雄性小鼠,于末次接种后5个月体外分离培养骨髓DC,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4),刺激DC增殖、分化,流式细胞仪分析DC细胞表面分子CD11c、CD40、CD80、MHCII的表达率。此基础上,用新城疫病毒(NDV)ZJ1株人工接种实验组和对照组小鼠,每周测定NDV血清抗体效价,比较抗体产生的差异。结果实验组MHC II和CD40分子的表达率高于对照组。NDV抗体水平第1周实验组略低于对照组;第2~5周内实验组小鼠的抗体水平均高于对照组,差异有显著性;第6周两组小鼠血清抗体均呈下降趋势,差异无显著性。结论 H.hepaticus感染对小鼠骨髓DC成熟有促进作用,能提高MHC II和CD40表达水平,可促进BALB/c小鼠产生抗NDV的抗体水平。     

高半胱氨酸膳食对小鼠生长和免疫力的影响

探讨了高半胱氨酸膳食对小鼠生长及对外来抗原刺激产生抗体的免疫力的影响。实验取小白鼠32只,随机分为高半胱氮酸组(H)和对照组(C)各16只。H组每天给予含半胱氨酸质量分数为3％的饲料,分别在1、4、8周对其腹腔注射牛血清白蛋白,在第9周处死动物,取血测量血清抗体效价。结果显示实验组生长缓慢,血清抗体效价显著高于对照组,表明高半胱氨酸膳食可提高小鼠血清抗体效价,但高含量的半胱氨酸对小鼠生长有抑制作用。     

羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建、表达及其免疫原性

通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )和已插入CpG序列的pcDNA3.1-CpG中,构建pcDNA3.1-P32、pcDNA3.1-CpG-P32和pcDNA3.1-CpG-MP32质粒;用脂质体法转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)试验验证其表达效果;经肌肉免疫注射健康BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测抗体;在免疫后的第3、5周取免疫小鼠的脾细胞,用流式细胞仪检测CD4 和CD8 T细胞亚群.结果所构建的真核表达载体在BHK-21细胞中都能表达P32蛋白;免疫小鼠血清在免疫第2周后均能检测到羊痘特异性IgG抗体;免疫组小鼠脾脏CD4 T细胞数目和CD4 /CD8 T细胞比值明显高于对照组.结果提示,所构建的真核载体可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答.     

口服草原兔尾鼠卵透明带3纳米乳剂DNA疫苗免疫效果研究

用免疫不育疫苗控制有害动物的数量成为动物种群数量控制的一个有效措施,对于大多数动物来说．口服饵料发送系统是最好的选择。但是口服疫苗容易产生耐受,且生物利用度低,利用多聚物包裹口服疫苗是一种打破口服耐受．提高其生物利用度的新途径。本文以纳米乳剂作为草原兔尾鼠卵透明带3（Lugurus zone pellucida 3,LZP3）DNA疫苗的发送载体,探讨通过口服途径增强小鼠的免疫效果和抗生育率。用纳米乳剂包裹lzp3 DNA疫苗后,采用强阴离子交换色谱法测定纳米乳剂的包封率．将制备好的质粒纳米乳剂lzp3 DNA疫苗通过口服饵料免疫小鼠,检测到免疫后小鼠的体内产生了特异性的抗LZP3的IgG和IgA。对免疫后小鼠进行抗生育实验,分析生育后免疫小鼠的卵巢病理切片。研究结果表明,用质粒纳米乳剂如p3DNA疫苗通过口服途径免疫．在小鼠的血清和粘液中检测到了特异性的抗LZP3的IgG和IgA,同时也产生了相应的抗生育作用．表明纳米乳剂作为口服不育疫苗的发送载体是可行的,为草原兔尾鼠鼠害的防治提供了理论基础．     

草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3 DNA疫苗免疫不育效果的研究

为探讨不同种类小鼠卵透明带3（zp,）的免疫不育效果,并筛选高效且具有物种特异性的DNA抗生育疫苗,本研究选择草原兔尾鼠卵透明带3（Lzp3）和昆明白小鼠卵透明带3（Mzp3）构建不同的DNA抗生育疫苗表达载体,pcDNA3-mzp3（pcD-M）、pcDNA3-1zp3（pcD-L）、pcDNA3-aat-comp-mzp3（pcD-ACM）和pcDNA3-aat-comp-lzp3（pcD-ACL）分别免疫NIH小白鼠。研究中用水动力转染技术取代传统的Hela细胞真核转染检测小鼠体内真核表达情况．结果表明四种质粒均能在小鼠肝脏中进行表达;ELISA图示表明重组质粒均能使小鼠激发较高水平的特异性抗体;抗生育结果表明四种DNA疫苗均具有免疫不育的效果（P〈0．05）,其中pcDNA3-aat-comp-mzp3（pcD-ACM）的免疫效果最好（P〈0．01）;卵巢病理切片H．E染色结果显示pcD-M和pcD-L组卵巢结构与对照小鼠区别不大,而pcD-ACL和pcD-ACM组卵巢结构发生病理性变化。结果初步说明草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3对NIH小白鼠均有抗生育效果,但不具有物种特异性。     

分子佐剂C3d增强草原兔尾鼠卵透明带3 DNA疫苗的免疫应答

为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对照,体外转染HeLa细胞,RT-PCR和Westernblot分别检测到lzp3mRNA和蛋白的表达。对NIH雌性小鼠肌肉进行基因免疫注射,ELISA结果表明pcD-LC免疫诱导的特异性抗LZP3-IgG水平明显高于pcD-L对照组(P<0.05),且有长期免疫应答效应;MTT结果显示pcD-LC能够诱导淋巴细胞增殖活性的提高。抗生育实验表明pcD-LC免疫组显著降低窝产仔数(P<0.05),且卵巢切片正常。研究结果证实C3d能够增强lzp3DNA疫苗的特异性免疫应答并达到抗生育效果,为DNA疫苗控制草原兔尾鼠的深入研究提供了基础。     

Use of mucosal immunization with porcine zona pellucida (PZP) in mice and rabbits

Rabbits (Oryctolagus cuniculus) and two strains of mice (Mus musculus, one inbred and one outbred) were immunized against porcine zona pellucida (PZP) antigen. Alginate microspheres or cholera toxin B were used alone or in combination when mucosal immunization routes were used. Serum antibody responses and fertility were assessed. Neither rabbit or mouse groups immunized by mucosal routes generated significant antibody responses to PZP as compared to parenteral immunization (ANOVA, P > 0.05). The study shows that porcine zona pellucida is not an effective mucosal antigen in small mammals.     

Monoclonal antibodies to the murine zona pellucida protein with sperm receptor activity: effects on fertilization and early development

During development and maturation, mammalian oocytes are surrounded by the zona pellucida which in the mouse is comprised of three sulfated glycoproteins, ZP-1, ZP-2, and ZP-3. Previously, monoclonal antibodies to ZP-2 have been isolated. The isolation and characterization of monoclonal antibodies specific for ZP-3, the zona protein with sperm receptor activity are now reported. Following passive immunization, these monoclonal antibodies localize to the intraovarian zonae pellucidae and their presence precludes both in vivo and in vitro fertilization of subsequently ovulated eggs. Monoclonal antibodies specific for either ZP-2 or ZP-3 also completely block in vitro fertilization at relatively low concentration ranging from 0.4 to 75 micrograms/ml. The contraceptive effect requires the presence of the zona and appears to inhibit the penetration of the zona pellucida by sperm rather than by blocking the sperm binding site. Neither antibody interferes with in vitro development from the two-cell to the blastocyst stage or with subsequent hatching from the enveloping zona pellucida.     

Differences between antigenic determinants of pig and cat zona pellucida proteins

Despite many efforts, the control of reproduction in feral cat populations is still a problem in urban regions around the world. Immunocontraception is a promising approach; thus the present study examined the suitability of the widely used pig zona pellucida proteins (pZP) for contraception in feral domestic cats. Purified zona pellucida proteins obtained from pig and cat ovaries were used to produce highly specific antisera in rabbits. Antibodies against pZP raised in rabbits or lions were not effective inhibitors of either in vitro sperm binding (cat spermatozoa to cat oocytes) or in vitro fertilization in cats, whereas antibodies against feline zona pellucida proteins (fZP) raised in rabbits showed a dose-dependent inhibition of in vitro fertilization. Immunoelectrophoresis, ELISA and immunohistology of ovaries confirmed these results, showing crossreactivity of anti-fZP sera to fZP and to a lesser extent to pZP, but no interaction of anti-pZP sera with fZP. It is concluded that cat and pig zonae pellucidae express a very small number of shared antigenic determinants, making the use of pZP vaccine in cats questionable. A contraceptive vaccine based on feline zona pellucida determinants will be a better choice for the control of reproduction in feral cats if immunogenity can be achieved.     

Follicular dysfunction induced by autoimmunity to zona pellucida

The mammalian zona pellucida is an extracellular matrix that occurs in growing oocytes, ovulated eggs and pre-implantation embryos, and is known to be involved in several important events during ovarian folliculogenesis and fertilization. Since the zona pellucida is formed at an early stage of oocyte growth, circulating antibodies against zona pellucida may impair ovarian function. In this article we discuss whether anti-zona antibodies cause ovarian dysfunction and infertility. The discussion is based on clinical examination and animal experiments including the following approaches: 1/ immunological method using solubilized human zona pellucida detected anti-zona antibody with a high frequency in infertile patients, especially premature ovarian failure syndrome; 2/ in vivo experiment using hamsters showed that some, but not all, animals experienced ovarian failure after immunization with hamster recombinant zona proteins; 3/ in vitro experiment using mouse isolated ovarian follicles showed significant inhibitory effects on follicular growth and oocyte development. We concluded that anti-zona antibody may be involved in causing ovarian failure.     

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性研究

为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子在精卵结合中的情况;用抗rhZP3抗血清与阴性血清分别处理卵子,再与精子进行结合实验,观察经过不同处理后的卵子在精卵结合中的情况。rhZP3诱发顶体反应实验结果显示,rhZP3处理组与空白对照组之间差异显著(P<0.01);精卵结合实验结果显示,各实验组和对照组之间存在显著性差异(P<0.01),rhZP3、抗rhZP3抗体均能抑制精卵结合。实验结果表明,rhZP3具有天然人卵透明带蛋白相似的活性。