星形胶质细胞在MPTP帕金森小鼠脑内的变化研究

目的：研究神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dropyridine,MPTP）对小鼠脑内星形胶质细胞及肿瘤坏死因子-α（Tunlomecrosis factor alpha,TNF-α）的影响,了解MPTP致帕金森病发病机制。方法：将神经毒素MPTP注入C57BL／6小鼠腹腔内,制备帕金森病动物模型。观察注药后小鼠行为学变化,免疫组化检测各时间点多巴胺能神经元缺失和星形胶质细胞增生与激活情况,以及TNF-α表达水平的变化。结果：MPTP组黑质多巴胺（dopamine,DA）能神经元的数量随注射天数增加而持续减少,星形胶质细胞数量明显增高,GFAP及TNF-α在模型组黑质内有中强阳性表达,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MPTP可诱导星形胶质细胞的激活和增生,启动脑内炎症反应而介导DA神经元死亡。     

低分子肝素对MPTP帕金森小鼠的治疗作用及可能机制

目的：研究1．甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dropyridine,MPTP）帕金森病（PD）模型中小胶质细胞的激活情况,探讨低分子肝素对MPTP导致的小胶质细胞活化的抑制作用。方法：C57BL随机分成正常对照组、MPTP组、低分子肝素＋MPTP组。MPTP组腹腔注射MPTP（30mg／kgx7d）同时腹部皮下注射生理盐水,低分子肝素＋MPTP组在注射MPTP同时腹部皮下注射低分子肝素（1501U／kg·12hx7d）。各组于末次给药后予行为学测试,7d后免疫组化检测酪氨酸羟化酶（TyrosineHydroxylase,TH）阳性细胞。镀银染色观察小胶质细胞激活情况。结果：MPTP组较低分子肝素＋MPTP组爬竿时间明显延长,并出现更多非随意动作。低分子肝素＋MPTP组黑质部位TH阳性细胞数量高于MPTP组。MPTP组活化的小胶质细胞数量高于低分子肝素＋MPTP组。结论：低分子肝素通过抑制小胶质细胞的激活减少MPTP帕金森小鼠多巴胺能神经元的损伤,提示低分子肝素可能有延缓PD进程的作用。     

早期帕金森病大鼠胶质细胞免疫反应活性的改变及其意义

目的:观察早期帕金森病(PD)大鼠脑内胶质细胞的免疫反应活性改变。方法:采用6-羟多巴胺(6-OHDA)制备PD早期大鼠模型,实验动物分为早期PD组和对照组。实验动物进行阿朴吗啡诱发旋转运动测试后,进行迈步实验的测试。免疫组织化学观察早期PD发病大鼠脑内星形胶质细胞和小胶质细胞的免疫反应活性改变。结果:早期PD动物在30 min内旋转次数小于7r/min,迈步实验中,与对照组相比,早期PD动物在左前肢从开始迈步至返回鼠笼所需要的总时间和所迈的步数没有明显差异;PD早期大鼠脑内星形胶质细胞和小胶质细胞的免疫反应活性明显增高。结论:早期PD大鼠尽管行为学上没有明显异常改变,但其脑内星形胶质细胞和小胶质细胞出现异常改变,这可能参与早期PD大鼠发病过程。     

MPTP致空间学习记忆障碍小鼠脑内NSF表达变化

目的:观察1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致空间学习记忆障碍小鼠脑内N-乙基马来酰亚胺敏感融合蛋白(NSF)表达变化。方法:C57BL/6J小鼠随机分为2组(n=24),包括对照组和MPTP处理组,雌雄各半。MPTP处理组给予C57BL/6J小鼠MPTP(20 mg/0.2 ml/(kg·d),s.c.)连续8 d,每天一次,对照组给予等量的生理盐水用同样方法处理。第9天起采用水迷宫实验,连续4 d检测C57BL/6J小鼠空间学习记忆的改变,水迷宫实验测试结束后,采用免疫组化和Western blot方法检测小鼠脑内NSF表达改变。结果:每组选取小鼠24只进行水迷宫测试,与对照组相比,MPTP处理组小鼠出现空间学习记忆障碍;每组选取小鼠5只进行免疫组化检测,同时每组选取5只小鼠进行Western blot检测,海马CA1区NSF免疫反应活性明显减弱(P0.01),前额叶皮层NSF的免疫反应活性(P0.01)和蛋白表达(P0.05)都明显增高。结论:MPTP致空间学习记忆障碍小鼠脑内NSF表达出现异常,可能参与MPTP致空间学习记忆障碍的发病机制。     

小鼠帕金森病模型的行为学及组织病理学改变的观察分析

目的:观察1-甲基4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病小鼠模型的行为学及组织学变化.方法:C57/BL小鼠腹腔注射MPTP 25 mg/kg,每周2次,连续5周.通过旷场实验和强迫游泳实验检测小鼠的行为变化,分别使用抗酪氨酸羟化酶(TH)单克隆抗体和抗诱生型一氧化氮合酶(iN0S)单克隆抗体、抗精氨酸酶Ⅰ(Arg1)多克隆抗体作为多巴胺能神经元和小胶质细胞M1、M2两种极化表型的分子标志进行免疫荧光染色.结果:旷场实验中,模型组小鼠的活动总路程较对照组小鼠有减少趋势,但无明显统计学差异(P＞0.05),而其中央活动时间较正常对照组明显缩短(P＜0.05);强迫游泳实验中,模型组小鼠在水中的不动时间较对照组显著延长(P＜0.05).与对照组相比,模型组小鼠中脑黑质致密部TH阳性神经细胞数目减少约87％,两组TH阳性神经细胞计数比较差异显著(P＜0.01).模型组iNOS所染M1型小胶质细胞数量较对照组增加约54％,有显著性差异(P＜0.05),而Arg1标志的M2型细胞数量,虽较对照组有减少趋势,但无明显统计学差异(P＞0.05).结论:MPTP所致的C57/BL小鼠行为学及神经病理学改变与临床PD患者类似,脑内黑质区小胶质细胞两种极化表型混合存在,但M1型极化较正常有所改变,M2型变化不明显.     

Aβ1-15疫苗预防Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的研究

探讨Aβ亚单位疫苗接种后对Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的预防作用．32只5月龄Tg2576小鼠随机分成4组：对照组（只接种佐剂）,Aβ42组（接种Aβ42疫苗）,Aβ1-15小组（接种Aβ1-15疫苗）和Aβ36-42组（接种Aβ36-42疫苗）,每组8只,3组接种疫苗小鼠的血清抗Aβ42抗体滴度比对照组显著增高;脑组织匀浆内也可检测到少量抗体．Morris水迷宫实验结果显示Aβ42组、Aβ1-15小组和Aβ36-42组与对照组小鼠的行为学有明显改善．取各组2只小鼠的脾细胞培养,经Con A或各自抗原刺激后,3组疫苗免疫后小鼠脾细胞增殖显著高于对照组;Aβ42组,IL-4和IL-10相对较高,而IL-2和INF-γ相对较低;Aβ1-15小组中IL-4和IL-10较高;Aβ36-42组IL-2和INF-γ较高．免疫组织化学法显示对照组小鼠脑皮质与海马部位有大量老年斑,而Aβ42组和Aβ1-15组脑内无老年斑出现,Aβ36-42组小鼠脑内有少量老年斑．实验证明Aβ1-15亚单位疫苗可防止Tg2576小鼠认知行为的退化,阻止Tg2576小鼠脑内Aβ沉积和老年斑的形成．     

阿里红黄酮对衰老模型小鼠的抗衰老作用

目的：研究阿里红黄酮对衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法：将小鼠随机分为6组（n=12）：正常对照组,衰老模型组,阳性对照组,低、中、高剂量阿里红黄酮组。除正常对照组外,其余各组均采用D-半乳糖颈背部皮下注射建立亚急性衰老小鼠模型,用不同剂量的阿里红黄酮（100、200和400 mg/（kg·d））灌服小鼠6周后,计算衰老模型小鼠脑指数及脾脏指数、胸腺指数,测定其脑组织丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、肝组织过氧化氢酶（CAT）及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：阿里红黄酮3个剂量组可不同程度的升高衰老模型小鼠的脑指数、脾脏指数、胸腺指数、脑组织中的GSH-Px活性及肝组织中的CAT、SOD活性,降低其脑组织中的MDA含量。结论：阿里红黄酮可能通过提高机体的抗氧化能力而达到抗衰老作用。     

帕金森病小鼠模型行为学检测方法的比较研究

目的比较目前常用的5种帕金森病(PD)小鼠模型行为学检测方法在PD研究中的作用。方法用MPTP建立C57BL小鼠PD模型,通过行为学检测(自主活动计数、滚轴实验、游泳实验、爬杆实验、悬挂实验)、免疫组织化学和荧光分光光度法,对比5种行为学检测方法的平均数与变异系数,观察MPTP对PD小鼠模型的行为学、黑质多巴胺(DA)神经元和纹状体酪氨酸羟化酶免疫反应阳性(TH-ir)神经纤维以及纹状体DA水平的影响。结果给与MPTP后,小鼠行为学计数降低,爬杆实验未能得到检测结果,悬挂实验变异系数很高,结果有明显的偶然性,滚轴实验结果变异系数中等,平均数呈现一定的上升趋势,自主活动计数中移动与站立和游泳实验的平均数则呈现明显的下降趋势,变异系数很低,而黑质DA神经元数目减少约58%,纹状体TH-ir神经纤维密度减低,纹状体DA水平明显降低约88%,两组相比差异有显著性(P<0.01)。结论MPTP所致的C57BL小鼠的神经病理、生化改变与PD患者近似,自主活动计数和游泳实验优于其他行为学检测方法。     

杭白菊总黄酮对衰老小鼠学习记忆的影响

目的：探讨杭白菊总黄酮（TFCM）对衰老小鼠学习记忆能力及胆碱能系统的影响。方法：采用皮下注射D-半乳糖的方法制备衰老小鼠模型。ICR小鼠随机分为5组（n=10）：正常对照组,模型组,低、中、高剂量TFCM处理组。TFCM处理组于造模后第2周开始每天给予TFCM（50、100或150mg／kg）灌胃。用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力,用比色法测定血清和大脑组织中丙二醛（MDA）含量,以及超氧化物歧化酶（SOD）和乙酰胆碱酯酶（Ach E）活性。结果：与正常对照组相比,模型组学习记忆能力减退,MDA含量和Ach E活性增加,SOD活性降低。与模型组相比,中高浓度TFCM处理组（100、150mg／kg）小鼠学习记忆能力明显改善,MDA含量和Ach E活性明显降低,SOD活性增高。结论：TFEM能显著改善D-半乳糖衰老小鼠学习记忆能力,其机制可能与TFCM的抗氧化特性以及提高中枢胆碱能系统功能有关。     

小蘖胺免疫抑制作用和抗氧化实验研究

对小蘖胺（Ｂｅｒｂａｍｉｎｅ）的抗氧化作用和免疫抑制作用进行了研究,发现小蘖胺（２５ｍｇ／ｋｇ／ｄ）腹腔给药一周能明显降低小鼠肝脏过氧化脂质的含量,提高血及心肌内超氧化物歧化酶的活性,并能明显减低同种异型抗原诱导的迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应。皮肤移植试验表明小蘖胺５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ可以延长小鼠对异基因皮肤移植的排斥时间。用流式细胞仪对小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞亚群分析结果表明：小蘖胺能降低小鼠脾脏ＣＤ＋４／ＣＤ８＋的比例。说明小蘖胺对小鼠免疫功能的抑制作用可能在于改变Ｔｈ／Ｔｓ的细胞平衡,使抑制活性增强,从而发挥其对免疫反应的负调节作用。     

胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酶活性影响的实验研究

目的 观察胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酸性磷酸酶（ACP）和琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的影响,探讨胎脑提取液的抗衰老作用。方法 选用健康昆明种小白鼠30只,随机分为3组;采用D-半乳糖制备亚急性衰老模型;酶组织化学方法结合显微图像分析。观察各组小鼠海马神经元ACP和SDH的活性。结果 衰老模型组与正常对照组相比,小鼠海马神经元ACP活性明显升高,SDH活性明显降低;给药组与衰老模型组相比,小鼠海马神经元ACP活性明显降低。SDH活性明显升高。结论 胎脑提取液可以延缓海马神经元的衰老进程,具有一定的抗衰老作用。     

重复性低氧对小鼠脑组织MMP-2及 MMP-9含量与活性的影响

目的：探讨重复性低氧对小鼠脑组织内MMP-2和MMP-9的蛋白表达量及活性的变化。方法：将BALA／C小鼠随机分成常氧对照组（I加）、急性低氧1、2、3、4次组（H1～H4）共5组。应用SDS-PAGE、Western—blot等生化技术,并结合Gel Doc凝胶成像系统,半定量检测5组小鼠大脑皮层和海马组织内MMP-2及MMP-9的蛋白表达量及其活性的变化。结果：①随着低氧次数的增加,小鼠海马组织内MMP-2的蛋白表达量呈现先增后降的趋势,其中H4组MMP-2蛋白表达量的降低显著（P〈0．05,n=6）,而小鼠大脑皮层组织内MMP-2的蛋白表达量变化不明显。此外,在海马和大脑皮层组织内均未检测到MMP-2的活性组分;②海马组织内MMP-9的蛋白表达量随重复性低氧次数的增加,其含量也呈现先增后降的趋势,且H1组MMP-9表达量的增高和H4组MMP-9表达量的降低均具有显著意义（P〈0．05）。同样,海马组织内MMP-9活性组分的变化与其蛋白表达量变化趋势一致,与H0组相比．H1组MMP-9活性组分增高和H4组的降低均显著（P〈0．05）。大脑皮层组织内MMP-9表达量及其活性组分在脑低氧预处理过程中均无显著性变化。结论：MMP-2和MMP-9可能在脑低氧预处理过程中具有一定的作用．且提示其蛋白表达量及活性在大脑皮层和海马组织内的差异变化可能与大脑皮层和海马组织对低氧的选择易损性不同有关。     

癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区神经病理观察

目的和方法：采用颞叶癫痫红藻氨酸（kainic acid,KA)模型,制备癫痫发作敏感大鼠,并分别以硫瑾染色和GFAP（神经胶质原纤维酸性蛋白,glial fibrilary acidic protein)免疫组化方法检测前深梨状皮层T区（area tempestas,AT)内神经元损伤及星形胶质细胞增生情况,并与经蝎毒（scorpion venom,SV)处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果：与对照组比较,癫痫敏感动物前深梨状皮层T区锥体细胞数目明显减少,GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞数目明显增加,染色强度明显增强,（P＜0．05）以剂量为100mg/kg/日的蝎毒给予动物连续灌胃三周,可明显降低其癫痫发作敏感性（P＜0．05）,而脑内梨状皮层T区锥体细胞脱失减轻,GPAP免疫反应活性未见明显增强。结论：推测梨状皮层T区硬化（神经元脱失,星形胶质细胞增生肥大）很可能是癫痫发作敏感性长期存在的重要原因。     

大蒜素对阿尔茨海默病模型小鼠脑内TNF-α表达的影响

本文应用免疫荧光、Western blot及Real-Time PCR等实验方法检测大蒜素对阿尔茨海默病模型小鼠脑内TNF-α表达的影响。结果发现,与对照组小鼠相比,模型组小鼠脑内TNF-α的阳性表达增加,提示在APP/PS1转基因小鼠脑组织中存在神经免疫炎症反应,而大蒜素处理组TNF-α表达明显低于模型组小鼠。基于此结果,说明大蒜素可以降低阿尔茨海默病模型小鼠脑内TNF-α的表达,提示大蒜素在阿尔茨海默病的抗炎临床治疗方面具有重要的理论意义。     

蝎源活性肽对早期帕金森病大鼠脑源性营养因子及神经肽Y的影响

目的：研究蝎源活性肽对早期帕金森病（PD）大鼠脑源性营养因子（BDNF）及神经肽Y （NPY）的影响。方法：实验动物随机分为三组（n=11）,分为早期PD模型组、假手术对照组和蝎源活性肽治疗组。将6羟多巴（6-OHDA,20μg/3μl含0.1%抗坏血酸生理盐水）注射到SD大鼠右侧纹状体制备早期PD模型,注射2周后,通过旋转行为学检测造模是否成功;造模成功的早期PD大鼠,和相应的对照组腹腔注射蝎源活性肽（2.20 mg/kg·d）处理1周。3周后,用免疫组织化学法检测大鼠脑源性营养因子及神经肽Y的免疫反应活性。结果：在6-OHDA给药侧,PD动物与假手术对照组相比较,BDNF免疫反应活性明显增强,NPY免疫反应活性明显减少,蝎源活性肽处理可以逆转这些异常改变。结论：改变PD早期中脑内NPY与BDNF的免疫反应活性是蝎源活性肽对早期PD大鼠中脑多巴胺能神经元的保护作用机制之一。     

毕赤酵母表达的neurturin对恒河猴帕金森氏病模型中黑质多巴胺能神经元的保护作用

帕金森氏病(PD)是由于多巴胺能神经元变性、坏死,导致黑质-纹状体系统的多巴胺含量下降而引起的一种神经系统退行性疾病,目前还没有一种很好的方法能使之治愈.Neurturin（NTN）能特异地作用于中脑多巴胺能神经元,对该类神经元具营养和保护作用.经静脉注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导恒河猴产生帕金森氏病模型,并在NTN治疗组,注射MPTP之前48 h脑室内注射重组毕赤酵母表达的人NTN 1 mg. 结果表明：模型组猴均逐渐出现了PD症状,而NTN治疗组猴,PD症状比较轻或不明显;荧光分光光度法测定MPTP模型组猴黑质、壳核和尾状核多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）和5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）的含量结果与正常对照组相比均显著降低,NTN治疗组猴的黑质、壳核和尾状核中的DA、5-HT和5-HIAA与对照组相比无显著性差异,而与模型组相比,DA、5-HT和5-HIAA含量均明显增加;光镜检查MPTP模型组猴黑质神经元细胞明显脱失,而NTN治疗组猴黑质神经元细胞丢失不明显,与正常对照组猴无差别.上述结果表明,制备的重组人NTN在恒河猴体内能保护中脑黑质多巴胺能神经元不受MPTP的损伤,使其DA含量及多巴胺能神经元维持正常,在MPTP存在下没有发生PD症状.     

MPTP慢性帕金森病小鼠纹状体差异蛋白质的研究

目的分离、鉴定MPTP诱导慢性帕金森病模型小鼠纹状体差异表达的蛋白质,对MPTP慢性PD动物模型的特异性蛋白质组进行初步探讨,为PD的发病机制提供一定的蛋白质组学依据。方法成功建立MPTP诱导慢性帕金森病小鼠模型,提取模型组和对照组小鼠脑纹状体蛋白质,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行2-DE。图像分析软件PDQUEST8.0分析电泳图谱找出差异表达蛋白,运用MALDI-TOF MS质谱鉴定;其肽质量指纹图（PMF）经MS Fit检索。结果比较MPTP诱导慢性PD模型小鼠和正常对照小鼠纹状体二向电泳图,发现12个蛋白表达异常,最终鉴定出其中4个蛋白质：线粒体裂殖调节因子1（mitochondrial fission regulator 1）、类泛素样蛋白3前体（ubiquitin-like protein 3 precursor）表达下调;S100蛋白A10（proteinS100-A10）、Lin-7 homolog B为新出现点。结论初步鉴定出MPTP慢性PD模型小鼠纹状体部分差异表达蛋白,所发现4个表达异常的蛋白质与帕金森病线粒体的损伤和兴奋性神经毒性密切相关,与PD的发病机制相符,为深入研究帕金森病病理机制奠定了基础。     

MPTP对小鼠帕金森病造模条件探讨

目的观察不同剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对小鼠行为学及脑黑质酪氨酸羟化酶、纹状体多巴胺含量的影响,探讨MPTP致帕金森病(Parkinson′s disease,PD)样小鼠模型的最佳条件。方法C57BL小鼠分别给与MPTP不同剂量处理,测定各组小鼠爬竿时间检测动物运动协调性,应用免疫组化方法和高效液相法观察不同模型组多巴胺能神经元的变化。结果模型组各组均出现不同程度爬竿时间延长,酪氨酸羟化酶阳性细胞数减少和多巴胺含量减少。结论MPTP处理可造成小鼠的帕金森病样症状,在此种动物模型中,应根据科研目的选择MPTP的应用剂量和给药途径。     

蜂胶黄酮对小鼠脑so D 、 GsH 一Px 、 MDA 的影响

目的：研究蜂胶黄酮对小鼠脑组织的抗氧化系统的作用,以期探讨蜂胶黄酮的抗衰老作用机制。方法：以小鼠为实验对象,以其脑SOD、GSH—Px、MDA为指标,考察蜂胶黄酮的抗衰老作用。结果：蜂胶乙醇提取物（EEP）可使脑组织中SOD、GSH—Px活性明显增高,和空白组相比具有显著差异（P〈0、01）;使脑组织MDA明显降低,和空白组相比具有显著差异（P〈0．01）。结论：EEP可有效地提高脑组织中抗氧化酶的活性,降低脑MBA的含量,抑制和／或减轻脂质过氧化反应,从而防止了自由基过氧化对脑组织的损伤,可能是有效的脑组织保护荆。     

H102对转基因AD小鼠脑内NF-κB信号通路相关蛋白的影响

目的：研究β片层阻断肽H102对转基因AD小鼠脑内NF-κB通路相关蛋白活性及表达的影响。方法：将30只8周龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和给药组,另选15只同周龄同背景的C57BL/6J小鼠设为对照组（n=15）。给药组每日经鼻腔给予H102溶液5 μl （5.8 mg/kg）,对照组和模型组每日给予等量空白辅料溶液。给药16周后,采用Morris水迷宫检测小鼠的空间参考记忆变化,采用免疫组织化学方法和免疫印迹技术测定小鼠脑组织内β样淀粉样蛋白（Aβ_1-42）、核因子-κB （NF-κB）、核因子-κB抑制蛋白（IκB）、IκB蛋白激酶（IKK）及其磷酸化蛋白（p-NF-κB、p-IκB、p-IKK）以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和活化型半胱天冬酶-3（cleaved Caspase 3）蛋白的表达。结果：①Morris水迷宫测试：模型组小鼠的空间学习记忆能力较对照组显著降低,给药组较模型组显著提高（P<0.05）。②免疫组化及免疫印迹检测结果模型组小鼠脑组织内Aβ_1-42、p-IKK、p-NF-κB、p-IκB、核内NF-κB及iNOS和cleaved Caspase 3蛋白的表达较对照组显著增高,给药组蛋白表达较模型组显著降低（P<0.05）。结论：H102可抑制APP/PS1双转基因小鼠脑内NF-κB信号转导通路,抑制细胞凋亡和炎症反应,明显改善转基因AD小鼠的学习记忆能力。