重金属镉和铅胁迫对海洋微藻的毒性效应研究

设置不同浓度的重金属Cd2+(0、0.2、0.4、0.6、0.8和1 mg•L-1)和Pb2+(0、0.1、0.2、0. 4、0.8和1.6 mg•L-1)胁迫处理, 检测米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)的生长生理情况, 分析重金属胁迫对海洋微藻生长的毒性效应, 探讨超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)等对重金属胁迫的缓解作用。研究结果发现, 重金属Cd2+和Pb2+对米氏凯伦藻具有较强的毒性, 随着重金属浓度的提高, 细胞生长受到毒害作用增强; 而米氏凯伦藻对重金属Cd2+和Pb2+胁迫具有一定的适应性。重金属Cd2+和Pb2+胁迫导致米氏凯伦藻细胞的叶绿素a、叶绿素b含量下降(1.6 mg•L-1 Pb2+胁迫除外), 类胡萝卜素含量提高, 最大光能转化效率(Fv/Fm)下降, 表明重金属胁迫抑制藻的光合作用, 影响藻的生长繁殖。丙二醛(MDA)随着重金属Cd2+和Pb2+浓度提高而升高, 说明重金属引起藻细胞膜透性增加, 藻细胞遭受破坏。SOD活性整体呈现先升高后下降(或与对照持平)的趋势, 提示海洋微藻的抗氧化酶系统在低浓度重金属胁迫下产生应激性反应, 酶活性增强; 而CAT活性上升, 也对藻细胞起到保护作用, 推测两者共同反应, 以缓解藻体遭受的重金属毒害作用。结果可为了解重金属胁迫对海洋微藻的毒性效应提供参考。     

三疣梭子蟹不同组织同工酶的分析

采用垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,分析了三疣梭子蟹 (Portunustriuberbuculatus)雌性成体心脏、鳃、肌肉、眼睛、肝胰腺和卵巢 6种组织中的 1 0种同工酶 (ADH、MDH、ME、LDH、α AMY、GDH、SOD、SDH、EST和GOT)的分化表达模式 ,并对各种酶的同工酶位点表达及酶谱表型进行了分析。结果显示 ,三疣梭子蟹的同工酶系统具有明显的组织特异性。     

蒽对太平洋牡蛎不同发育时期抗氧化酶活性差异性影响

在实验条件下采用生态毒理学和生物化学方法,选用常见的环境污染物多环芳烃蒽(Anthracene),以太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)为实验材料进行毒理实验。研究了太平洋牡蛎D型幼虫、壳顶幼虫、幼贝和成贝4个不同发育时期中的3种抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)对蒽胁迫的敏感性。结果表明,在蒽胁迫下,D型幼虫和壳顶幼虫期3种抗氧化酶敏感性均为:POD>SOD>CTA;在幼贝和成贝期,其敏感性为:SOD>CTA,而POD表现出不稳定性。     

三疣梭子蟹胚胎期中枢神经系统的发生和发育

应用组织学方法研究三疣梭子蟹胚胎期中枢神经系统的发生和发育,光学显微镜下镜检切片,在第二期卵内无节幼体阶段开始观察到脑;第二期卵内状幼体阶段,前脑由视神经层、侧原脑和中央原脑组成,与位于食道两侧的中脑和后脑形成完整的脑。三疣梭子蟹胚胎期腹神经链由1对大颚、2对小颚和2对颚足所对应的神经节以及腹部神经链组成。光镜下大颚神经节可于第二期卵内无节幼体阶段观察到,2对小颚和2对颚足神经节则在第二期卵内状幼体阶段观察到;腹部神经链则在第三期卵内状幼体阶段观察到。三疣梭子蟹胚胎期中枢神经系统由脑和腹神经链组成,脑由前脑、中脑和后脑组成,脑位于背部,通过2条围食道神经与腹神经链相连。中枢神经系统的不同部分的形成在胚胎发育过程中具有阶段性差异。     

三疣梭子蟹两种养殖模式浮游动物调查

于2012年6-12月,在宁波市象山县东盛水产养殖有限公司对主养三疣梭子蟹池塘两种混养模式（模式Ⅰ：三疣梭子蟹与日本对虾、黑鲷、菲律宾蛤仔混养;模式Ⅱ：三疣梭子蟹与日本对虾、黑鲷混养）浮游动物进行了调查与比较。结果显示：共检出浮游动物13属19种,其中,原生动物3属3种;轮虫2属5种;枝角类2属3种;桡足类6属8种。浮游动物平均密度模式Ⅰ（370 ind./L）〉模式Ⅱ（209 ind./L）;平均生物量模式Ⅰ（17.974 mg/L）〈模式Ⅱ（18.102 mg/L）。Margalef指数为0.22~0.81;Shannon-Wiener指数为1.28~3.03;Pielou均匀度指数为0.54~0.96,均值都是模式Ⅰ〉模式Ⅱ。     

三疣梭子蟹精卵相互作用的扫描电镜观察

应用扫描电镜技术观察了三疣梭子蟹的精卵相互作用。未受精成熟卵表面较光滑、无受精孔,但有许多微孔。成熟卵外被卵膜,内为卵母细胞。在卵自然产出后,精子迅速发生顶体反应使顶体囊外翻并压入卵膜,而核仍留于卵膜外,核辐射臂不收缩且仍附着于卵膜上。三疣梭子蟹为多精着卵和多精入卵膜。精子外翻顶体囊压入卵膜后,核辐射臂陆续回缩直至消失。作用于顶体丝上的卵母细胞主动拖精作用对入卵膜精子的进一步入卵、受精至关重要,环状卵膜突起的向心伸展也有一定的协助作用。探讨了着卵精子的顶体反应、精子入卵膜的机制及卵子在精子入卵过程中的作用     

不同波长光照对三疣梭子蟹复眼超微结构的影响

三疣梭子蟹(Portunus tritubereulatus)经过30 min暗适应后,在不同波长的红光(750 nm),黄光(580 nm),绿光(560 nm),蓝光(400 nm)下,其光感受器形态和超微结构随不同波长光的适应而发生变化。在红光下感杆束直径大,微绒毛排列最整齐,内质网、线粒体等胞器较多,色素颗粒分布均匀,膜下储泡囊小;在蓝光下感杆束直径最小,微绒毛最凌乱,多囊体、板膜体、膜下储泡囊等胞器较多,色素颗粒位于细胞核周围。     

不同产地三疣梭子蟹的稳定同位素比值特征及原产地溯源

探索稳定同位素对三疣梭子蟹产地溯源的可行性,可为保护地理标志产品、追溯原产地来源提供理论依据.本研究以黄海、渤海和东海3个主产区海域的三疣梭子蟹为对象,分析了其碳、氮稳定同位素值差异性和不同组织中稳定同位素比值的相关性.结果 表明:不同产地的碳、氮稳定同位素比值有显著性差异,不同组织之间有明显的同位素分馏效应.利用建立...     

室内养殖条件下三疣梭子蟹的生殖蜕壳和交配行为

本文采用外部特征观察和红外线摄像,对室内配对养殖三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的生殖蜕壳和交配行为进行了系统研究。结果发现:近交配季节,雌性三疣梭子蟹腹甲出现蓝黑色并不断加深,游泳足掌节则最终汇聚成一轮红色月牙,这些体表特征集中出现在生殖蜕壳前期,可能是除信息素外,另一类用于交配活动的视觉信号。三疣梭子蟹的交配活动起始于两性间的求偶抱对行为,雌性完成生殖蜕壳便进行软壳交配,这是一个连续的过程,包括随后的抱对守护行为;期间,相对于交配前后的抱对行为,三疣梭子蟹用于实质性交配活动的时间十分有限。然而,这可能是一种生殖策略:一方面,雌性可以采用抱对这种方式确保随后进行的生殖蜕壳及软壳交配过程能在有限的时间内安全有序地完成;另一方面,作为补偿,雄性可通过交配活动在雌性生殖道内生成精子塞来保证父权,减少个体间的竞争。     

三疣梭子蟹卵附着机制及相关形态学特征

Using histological methods and scanning electron microscopy, the structure of cement gland and formation of outer egg-membrane and egg-stalk of the swimming crab Portunus trituberculatus were studied to explain the mechanism of egg-attachment and function of the cement gland. Eggs adhered to the setae of pleopodal basipodite and endopodite for hatching followed by spawning but no egg attached on the setae of exopodite. The setae of pleopodal basipodite and endopodite were smooth for egg attachment while the setae of exopodite were branched and suitable for collecting and protecting eggs. Cement gland distributed along longitudinal axis of the pleopodal basipodite and endopodite under epithelia cells. Cells of the cement gland were elliptical and its size was about 50 times of the epithelium. Some glue secreted to the surface of the pleopod along the seta, while the other glue secreted to the surface of the pleopod by the channel which across the integument of the pleopod. The first spawned egg was transferred to the setae that were far from the pore, not attached to the setae of the pleopodal basipodite and endopodite near the genital pore. And the egg attachment became nearer and nearer to the pore with further spawning. Since the eggs to glide rather than roll, there was almost no glue on the contrary surface of the egg at first: and with further secretion, the whole surface was surrounded by glue. The thick part of glue formed one short bud during the glide of the egg and gradually developed into a full egg-stalk. On the other hand, the else glue developed into an outer egg-membrane, which was “trichromatic egg membrane” originally. Each egg attached to the setae of pleopodal basipodite and endopodite with its own egg-stalk. The egg-stalk was a plane strap at the formation stage and later it rolled into a rope shape, but it could be reverted to the former by outside force. Four types of egg attachment : an egg to a seta, an egg to several setae, several eggs to a seta and several eggs to several setae were discovered. In summary, the cement gland existed in the pleopod of the swimming crab and formed outer egg membrane and egg-stalk during the egg attachment [Acta Zoologica Sinica 50 (5) : 873 - 879, 2004].     

饲料磷脂对三疣梭子蟹酚氧化酶活性的影响

目的：以实验室养殖和市场销售的正常三疣梭子蟹为研究对象,探究饲料磷脂水平对甲壳动物酚氧化酶活性的影响,为三疣梭子蟹的营养免疫学研究和梭子蟹饲料的开发提供科学依据。方法：将达到试验规格的三疣梭子蟹随机分成A1、A2、B1、B2四组。A1和A2组为蛋黄磷脂平行组,用以投喂该两组的配合饲料中添加足量蛋黄磷脂为主要磷脂源。B1和B2组为大豆磷脂平行组,用以投喂组B1、B2的配合饲料中添加足量大豆磷脂为主要磷脂源。人工饲养8周后,从A1、A2、B1、B2各组随机抽取4只蟹,测定其血清和HLS的酚氧化酶活性,并与市场组（C组）梭子蟹血清和HLS的酚氧化酶活性作比较。结果：血细胞样本中,市场组总活力均值为2.67,高于试验各组的活力均值（1.13~1.47）,差异显著,而试验各组之间没有显著性差异。A1、A2、B1、B2四组比活率分别为0.58、0.38、0.49、0.32,四组之间不存在显著性差异,而市场组比活率为2.20,显著低于试验各组。血清样本中,试验各组的总活力值均在1.40~1.99之间,组间不存在显著性差异;A1、B1、B2组的比活率值都在1.97~2.68之间,无显著差异。B组比活率平均值为4.44,与A1、B1、B2组有显著差异。结论：作为磷脂源,卵黄磷脂和大豆磷脂对梭子蟹HLS的酚氧化酶活性均无显著影响,而试验组血清酚氧化酶活性比活率明显高于市场组,说明在一定程度上,卵黄磷脂和大豆磷脂对血清中的酚氧化酶活性有促进作用。     

恩诺沙星在三疣梭子蟹主要组织中的代谢动力学

应用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）研究了三疣梭子蟹（portunus trituberculatus）经口灌10 mg/kg恩诺沙星后体内的药代动力学规律。结果表明口灌给药后,三疣梭子蟹肝胰腺、肌肉和血淋巴组织中的恩诺沙星达峰速度快,肝胰腺和血淋巴在给药24h都有双峰现象出现。恩诺沙星在肝胰腺、肌肉、血淋巴中的Cmax分别为11.235μg/g、0.850μg/g和0.858μg/g,Vd/F为7.954 L/kg、10.367 L/kg和0.345 L/kg。t1/2β分别为283.361 h、47.869 h和17.681 h,AUC分别为245.618μg/g.h、24.753μg/g.h和20.111μg/g.h。给药后5 min在肝胰腺中即可检测到恩诺沙星的代谢产物环丙沙星,而肌肉和血淋巴在给药后2 h才能检测到,其含量均处于较低水平。用3P97软件对各组织中的药时数据进行房室模型拟合,结果显示：三疣梭子蟹口灌给药后,恩诺沙星在血淋巴、肌肉和肝胰腺中的代谢过程均符合一级吸收二室开放模型,而环丙沙星不能用房室模型来描述。     

miR-139555及其靶基因PtNBC在三疣梭子蟹适应盐度胁迫中的表达调控

为研究miR-139555及其潜在靶基因PtNBC(碳酸氢钠协同转运基因)在三疣梭子蟹(Portunus tritu-berculatus)适应盐度胁迫中的表达调控分析,利用RACE技术克隆了PtNBC基因,该基因全长5308 bp,开放阅读框(ORF)3570 bp,共编码1189个氨基酸.利用RT-PCR技术分析m...     

三疣梭子蟹精子顶体反应过程中的形态和结构变化

用离子载体A2 3187和卵水人工诱导三疣梭子蟹精子的顶体反应 ,分别获得 75 33%和 84 83%的顶体反应率。应用光镜和电镜技术观察了顶体反应前后精子形态和结构的变化。未处理精子呈陀螺形 ,由顶体、核杯和 5 - 10条核辐射臂组成。顶体包括顶体囊和顶体管。顶体囊的伞形头帽拥有约 70条辐射肋。连续发生的精子顶体反应过程被人为地分为四个阶段 :(1)头帽鼓起 ;(2 )顶体囊外翻 ;(3)穿孔器前伸 ,顶体囊膜翻转 ;(4 )顶体囊膜脱落 ,顶体丝形成。直到第四阶段才观察到钉状精子的辐射臂开始收缩。探讨了辐射臂和穿孔器前冲在精子入卵中的功能     

三疣梭子蟹两种养殖模式浮游植物与产量的比较

为获知三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）两种养殖模式浮游植物与产量是否存在差异,于2012年6月—12月在宁波市象山县东盛水产养殖有限公司进行。结果显示：浮游植物共7门32属57种。模式Ⅰ浮游植物7门30属54种;模式Ⅱ5门19属32种。藻类平均细胞密度、平均生物量均为模式Ⅰ〉模式Ⅱ。Margalef指数、Shannon-Wiener指数均值模式Ⅰ〉模式Ⅱ,Pielou指数均值模式Ⅰ〈模式Ⅱ。养殖前期（8月）、中期（10月）、起捕（12月）时,对三疣梭子蟹壳长、壳宽、体重测量取其平均值,均为模式Ⅰ〉模式Ⅱ。三疣梭子蟹产量模式Ⅰ〉模式Ⅱ。研究表明,模式Ⅰ优于模式Ⅱ。     

三疣梭子蟹Profilin基因全长cDNA的克隆与表达分析

三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是我国沿海重要养殖品种之一,近年来养殖病害呈逐年上升趋势,制约了三疣梭子蟹养殖产业的健康可持续发展。克隆三疣梭子蟹免疫相关基因,研究免疫基因的功能和作用机制,可为三疣梭子蟹养殖病害的防治奠定基础。本研究从三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库中克隆了742 bp 的profilin基因全长cDNA。Profilin全长cDNA中开放阅读框长375 bp,编码125 aa。推导的三疣梭子蟹profilin理论等电点pI 5.87,氨基酸序列与冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）profilin同源性最高,序列一致性为42.9%。荧光定量RT-PCR分析结果显示在正常的三疣梭子蟹机体中,血细胞profilin表达水平最高,其次为肝胰脏;在致病菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）诱导后,血细胞中profilin表达量显著上升（P<0.01）,表明profilin可能参与了三疣梭子蟹的免疫防御反应,是一个免疫相关因子。     

基于 DArT 标记的三疣梭子蟹地理种群遗传多样性分析

三疣梭子蟹是中国重要的水产养殖动物。目前,其养殖业的蟹苗主要还是依靠野生资源,但种质（生长速度、肌肉品质和抗病性）退化现象严重,因此迫切需要了解个体、种群和物种遗传多样性。报道了一种检测三疣梭子蟹多样性芯片技术（diversityarraystechnology,DART）。DArT技术采用芯片可同时检测数百个基因座,即使没有基因组DNA序列信息也可以分析遗传多态性。采用了风tL／TaqI复杂性降低方法,多态性效率为12．5％。利用多样性芯片杂交获得313个DArT标记。这些DArT标记用于点制多态性富集芯片,DArT标记具有较高的多态性信息含量（polymorphisminformationcontent,PIC）。最后根据0／1矩阵获得UPGMA系统进化树,结果表明样品间的遗传多样性与文献报道一致。芯片质量检测中包括赋值重复性为99．1％,同一样品不同个体间的差异不显著,其差异介于0．7％～1．6％。研究表明,DArT技术具有高通量和低成本的显著特点,该技术可为三疣梭子蟹资源保护和良种选育提供支持。     

三疣梭子蟹的第二次卵巢发育规律

2005年3-5月,在室内养殖条件下对第二次卵巢发育的三疣梭子蟹进行连续采样,系统研究了其第二次卵巢发育期间的卵巢指数(GSI)、肝胰腺指数(HSI)、卵巢外部特征、卵巢发育分期及其组织学变化.结果表明:①三疣梭子蟹第二次卵巢发育过程可以分为4期,Ⅰ期卵巢为乳白色或者淡黄色细带状,卵巢中主要为卵黄合成期的卵母细胞和内源性卵黄合成前卵母细胞;Ⅱ期为淡黄色或橘黄色,主要为外源性卵黄合成期的卵母细胞;Ⅲ期卵巢为橘红色,主要为外源性卵黄合成期的卵母细胞和近成熟期的卵母细胞;Ⅳ期卵巢发育基本成熟,肉眼可见卵粒,主要为成熟期的卵母细胞;②三疣梭子蟹第二次卵巢发育期间,GSI显著增加,HSI变化不显著,GSI和发育天数呈显著正相关性,HSI和GSI的变化没有显著的相关性.     

三疣梭子蟹肌肉组织中甜菜碱、糖原及无机盐变化研究

为了探讨甜菜碱、糖原及无机盐含量对三疣梭子蟹肌肉口感品质的影响,采用可见分光光度法、蒽酮比色法和原子分光光度法,分别测定了3个发育阶段（8月份幼蟹阶段、10月份交配前和12月份交配后）的野生三疣梭子蟹肌肉组织中甜菜碱、糖原及无机盐含量。结果表明：1）肌肉中甜菜碱含量在第一阶段（8月幼蟹）甜菜碱含量最低,为172 mg/100 g,10月交配前雌蟹肌肉甜菜碱含量最高,达473 mg/100 g,但12月份交配后含量减半;雄蟹肌肉则表现为从第1到第3阶段逐渐升高趋势。2）幼蟹的糖原含量极低,仅为0.8μg/mg,交配前雌雄蟹仍保持较低水平,交配后糖原含量急剧升高,雌雄蟹分别上升至11.26μg/mg和9.61μg/mg,各是交配前的6.5倍和10倍。3）肌肉无机盐中K、Na是宏量元素,含量最高,K含量336~457 mg/100 g,Na含量131~185 mg/100 g,Fe为微量元素,含量最低,仅有1.12~1.26 mg/100 g。三疣梭子蟹肌肉中的甜菜碱含量远高于一般水产品,故蟹肉入口爽滑带有甜味,且随着肌肉中糖原含量不断增加,其风味也更佳。     

邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠认知功能的影响

目的:观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠认知功能的影响.方法:15月成熟雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组(n=10)、对照组(C组)、DBP暴露组(E组)、药物预防组(P组)、药物治疗组(T组).E组食用经DBP浸泡后的食物3个月、P组食用经DBP浸泡后的食物3个月,期间每天注射抗小胶质细胞活化药物吲哚美辛(按照2.5mg/kg,2次/天,腹腔注射),T组食用经DBP浸泡后的食物3个月后使用吲哚美辛治疗(按照2.5mg/kg,2次/天,腹腔注射1周),N组给予同剂量的生理盐水腹腔注射.各组于停药后1d使用Morris水迷宫实验,末次水迷宫测试结束后1h处死大鼠,取海马组织进行化学比色法检测其海马组织内AChE活性.结果:E、P、T组与对照组组比较,大鼠学习记忆能力均明显降低(P＜0.001),AChE活性明显增加(P＜0.001);P、T组与E组,P组与T组相比,大鼠学习能力及记忆能力无显著性差异(P＞0.05),AChE活性无显著性变化(P＞0.05).结论:DBP可引起正常大鼠认知功能障碍,其机制可能与大鼠海马组织AChE活性增加有关.