大规模植物细胞培养生物反应器

在已知的3万多种天然物质中有80％来源于高等植物。美国每年从植物中提取的药品总价值和全世界从植物中提取的香料品总价值分别为90和15亿美元。同天然栽培法相比,利用植物细胞培养(PTC)技术生产医药、食品、化妆品等工业用重要化合物具有明显的优点。     

白果油的提取工艺及其化学成分研究

采用正交实验对超临界CO2萃取白果油的工艺条件进行优化,比较超声波提取、索氏提取、超临界CO2萃取3种方式对白果油提取率的大小,用最佳提取方式分析不同品种白果中油脂的含量,并用GC-MS分析其成分.结果表明: (1)3种提取方式对白果油提取率的大小顺序为:超临界CO2萃取(添加夹带剂)＞索氏提取＞超声波提取.(2)超临界CO2萃取白果油的最佳工艺条件为:温度40℃、压力20 MPa、流速15 L/h、时间3 h并添加石油醚夹带剂,不同品种白果干粉中油脂得率为3.6%～7.11%.(3)GC-MS分析表明:从超临界萃取白果油中鉴定出17种化学成分,其中不饱和脂肪酸占85.4%;超声波和索氏提取相似,分别从提取的白果油中鉴定出10种和9种化学成分,其中不饱和脂肪酸含量分别为90.3%和90.1%;不饱和脂肪酸以十六、十八碳的为主.     

从松针中提取混合氨基酸方法研究

本文主要是讨论从马尾松（Pinus mossoniana Lamb)针叶中提取混合基酸的方法。研究结果表明,用方法I和方法Ⅱ从马尾松针叶中提取18种混合氨基酸,平均收率为10％－14％;用方法Ⅱ从马尾松针叶中提取18种氨基酸的总量是用方法1从同量松针叶中提取18种氨基酸的总量的1．5倍以上。     

超临界CO2萃取真菌油脂及其脂肪酸组成分析

采用超临界CO2 萃取雅致枝霉的油脂 ,从最小样品需要量、处理样品能力及油脂得率等方面将其与索氏提取法进行综合对比评价 ,并对两种方法提取的雅致枝霉油脂的脂肪酸组成进行气相色谱分析。索氏法的油脂得率最高 ,但耗时较长 (>6h) ,样品需要量大 (>2 0 0 0mg) ,且提取的油脂中杂质较多 ;超临界CO2 萃取法油脂得率较索氏法低 ,但提取的油脂中杂质较少 ,单位时间内样品处理能力强 ,是索氏法的 6倍 ,且可处理微量样品 (5 0mg)。气相色谱分析结果表明两种方法提取的油脂 ,均含 12种已知脂肪酸 ,且每种脂肪酸的含量相近。综合各项指标考虑 ,超临界CO2 萃取法优于索氏法 ,是一种简便、有效的真菌油脂提取方法 ,适合油脂及多不饱和脂肪酸高产株菌筛选的实际应用需要     

红树林土壤总DNA不同提取方法比较研究

获得高浓度、大片段、无偏好的土壤微生物总DNA是土壤微生物分子生态学研究和宏基因组文库构建的基础。本研究采用了5种方法从红树林土壤中提取DNA,并对5种方法提取出的DNA的质量和产量进行比较评价。结果表明,5种方法均可从土壤中提取到DNA,但不同方法提取到DNA的产量和质量存在明显差异。Bio101FastPrep?SPINKit(forSoil)抽提到的DNA得率最高,适合分子生态学研究;SDS-GITC-PEG法提取的DNA纯度最高,所得到的DNA片段较大(>48kb),有利于构建宏基因组文库。     

一种多功能的蓝细菌

聚球藻(Synechococcus)是蓝细菌(曾归属蓝藻)之一种,列为原始单细胞原核生物之一。有一种聚球藻(Synechococcussp·)在高温的海水中有较强的增殖能力,藻体生物量中谷氨酸含量相当高,可从中提取用于谷氨酸钠(味精)的开发;也可采用细胞固定化技术连续大量生产,其产品具有商业价值     

水稻黄化苗PAL内源性抑制物的初步纯化及其基本性质

从去胚乳水稻黄化苗中提取、并部分纯化了苯丙氨酸解氨酶的抑制因子(PAL-I)。它是非透析性的蛋白质;大部分活力可被蛋白酶(胰蛋白酶、链霉蛋白酶)所破坏。动力学实验表明PAL-I对PAL的抑制作用是竞争性的。水稻PAL-I不仅能抑制水稻PAL,而且能抑制从玉米、小麦、马铃薯块茎切片中提取的PAL;但不能抑制从水稻中提取的多酚氧化酶、α-淀粉酶(过氧化物酶除外)。     

用气相色谱-质谱联用比较牛耳草代谢物的提取方法

通过比较不同的提取方法对牛耳草新鲜和脱水叶片中代谢物的提取效率,旨在建立一种可以有效鉴定并分析牛耳草脱水过程中关键小分子代谢物的种类和含量变化的方法,为研究植物耐脱水分子机制提供技术方法。本研究以气相色谱-质谱联用(GC-MS)为分析方法,对复苏植物牛耳草代谢物提取方法进行比较。从提取总色谱峰数目、提取效率、代谢物保留时间和提取效率稳定性等方面比较甲醇溶液(A法)和甲醇-氯仿-水溶液(B法)两种提取方法的提取效果。对牛耳草新鲜样品提取结果表明,B法提取的总色谱峰数目多于A法;对9种共有代谢物的提取效率比较结果表明,B法的提取效率高于A法;对10种色谱峰的保留时间和提取效率的方法学考察结果表明,两者保留时间RSD(相对标准偏差)值均小于1%,A法提取效率的RSD值≤10%的比例为50%,B法的为100%。A法对干样的提取色谱峰数目远少于鲜样,而B法对干样的提取色谱峰数目和鲜样没有显著差异,保留时间RSD值均小于1%,提取效率的RSD值与鲜样没有差异,稳定性良好。     

激光捕获显微切割技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用

背景与目的:激光捕获显微切割技术 (LCM)是获取均一目的细胞的有效方法。利用LCM技术从膀胱粘膜中分离膀胱移行上皮细胞从肿瘤间质细胞中分离膀胱癌细胞,进行RNA提取、纯化、浓缩以备进一步研究。方法:采用LCM技术分别从正常膀胱粘膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及膀胱癌细胞,提取RNA,并对微量RNA进行纯化、浓缩。然后用RT PCR验证TotalRNA中β actin基因表达水平。结果:对照实验Ⅰ证实经LCM后RNA完整性较好;经对照实验Ⅱ初步确定设定条件下LCMshooting次数与可获得RNA量间对应关系。从膀胱粘膜中捕获膀胱移行上皮细胞 2 5万shootings;从膀胱癌组织中获取癌细胞 2 0万shootings。经RT PCR验证β actin基因表达表达完整。结论:使用LCM技术能成功地获取较为均一的研究目的细胞,RNA完整性较好,能用于进一步研究中。     

忍冬不同药用部位活性成分的提取及含量分析

以河南封丘忍冬基地所产忍冬整株生药为研究对象,对比不同提取方法对忍冬各部位中活性成分含量大小的影响。用加热回流提取法、索氏提取法和超声波提取法分别对忍冬花蕾、叶、藤和根部中的活性成分进行提取,以绿原酸(CHA)、总黄酮作为指标成分,用薄层色谱法(TLC)、紫外色谱法(UV)和高效液相色谱法(HPLC)测定其含量。结果发现:与其他2种方法相比,用索氏提取法提取的有效成分最高,忍冬花蕾、叶、藤和根部中绿原酸质量分数分别为4.7%、3.0%、3.2%和2.1%,总黄酮的质量分数分别为6.9%、9.2%、3.6%和1.9%。提取效率从低到高分别是乙醇回流提取法、超声提取法和索氏提取法。3种提取方法以忍冬的花蕾、叶、藤、根部的粗提物中都检测到了绿原酸。绿原酸的含量从高到低为花蕾、叶、藤和根部;总黄酮的含量从高到低为叶、花蕾、藤和根部。本研究不仅通过对比得出了最优的提取方法,还为整株忍冬的综合开发利用提供了理论基础。     

深共熔溶剂提取杨树桑黄多酚类物质工艺优化及提取物抗氧化活性研究

桑黄是一类应用广泛的药用真菌,桑黄多酚具有抗氧化、抗炎和降糖作用。本研究中的杨树桑黄属于桑黄中重要且能栽培的一种。本研究采用深共熔溶剂(deep eutectic solvent,DES)从栽培杨树桑黄子实体中提取多酚类化合物,考察了不同提取条件对提取率的影响。采用氯化胆碱与尿素组成的DES体系对多酚进行提取,并进一步采用响应面法对提取条件进行优化,获得最佳提取工艺参数为21 min、80 ℃、料液比1:260 g/mL。在此条件下,多酚的提取率高达(23.17±0.88) mg/g,远高于传统方法(12.45±1.88) mg/g。最优条件提取的多酚显示了很强的DPPH和ABTS的清除能力。由此可见,采用DES法从杨树桑黄子实体中提取酚类化合物比传统方法更有效。     

一种从雉类孵化卵壳中提取DNA的方法

从鸟类已孵化的卵壳中提取DNA属于一种非损伤性取样技术,在鸟类分子生态学研究中具有广阔的应用前景。本实验以河南董寨自然保护区白冠长尾雉(Syrmaticus reevesii)和环颈雉(Phasianuscolchicus)已孵化的卵壳为材料,利用红细胞破碎液、蛋白酶K及RNA酶等试剂,对卵壳膜内的总DNA进行了提取,建立了一种提取高质量DNA的新方法。琼脂糖凝胶电泳检测显示,采用新改进的方法提取出的DNA条带清晰。同时,利用聚合酶链式反应(PCR)技术成功地从总DNA中扩增出两种雉类的线粒体DNA控制区(CR)片段,测序后与GenBank中同一物种的CR序列进行比对,结果证实了PCR产物的真实性。文中利用卵壳膜提取出的DNA,对一窝环颈雉的雏鸟进行了性别鉴定,其结果与根据形态特征进行鉴定的结果完全一致,均为3雄4雌,从而证实了从卵壳膜中提取DNA的真实性。该种DNA提取方法在雉类研究中将具有广泛的应用。     

用改进的热休克法制备大肠杆菌碱性磷酸单酯酶

碱性磷酸单酯酶(AKpase)[E.C.3.1.3.1]是专切磷酸单酯键的最常用工具酶之一,它广泛地存在于动植物组织以及微生物中。目前,从大肠杆菌中提取AKpase有四种方法:(1)热休克法;(2)渗透休克法;(3)溶菌酶-     

两种提取溶剂对莲雾果实GC-MS代谢组学分析的影响

以台湾"黑珍珠"莲雾果实为实验材料,选择植物代谢组学研究中常用的两种提取溶剂对莲雾果实样品进行非靶标的代谢轮廓分析,研究两种提取溶剂对莲雾果实代谢组学分析的影响。利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对莲雾果实代谢产物进行分离鉴定,利用甲醇-水(A)法和甲醇-氯仿-水(B)法两种方法共鉴定出129个代谢产物;利用主成分分析法等比较了两种提取方法的提取效果,结果表明两种方法存在显著差异。从色谱峰总数来看,A法可检测到323个色谱峰,B法仅有251个,统计分析发现124个差异显著的代谢物质,其中有90个代谢物质的相对含量用A法提取显著高于B法提取。研究结果表明,甲醇-水溶剂提取的方法更适合于莲雾果实代谢组学的分析研究。     

两种提取溶剂对莲雾果实GC-MS代谢组学分析的影响

以台湾"黑珍珠"莲雾果实为实验材料,选择植物代谢组学研究中常用的两种提取溶剂对莲雾果实样品进行非靶标的代谢轮廓分析,研究两种提取溶剂对莲雾果实代谢组学分析的影响。利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对莲雾果实代谢产物进行分离鉴定,利用甲醇-水(A)法和甲醇-氯仿-水(B)法两种方法共鉴定出129个代谢产物;利用主成分分析法等比较了两种提取方法的提取效果,结果表明两种方法存在显著差异。从色谱峰总数来看,A法可检测到323个色谱峰,B法仅有251个,统计分析发现124个差异显著的代谢物质,其中有90个代谢物质的相对含量用A法提取显著高于B法提取。研究结果表明,甲醇-水溶剂提取的方法更适合于莲雾果实代谢组学的分析研究。     

两种提取溶剂对莲雾果实GC-MS代谢组学分析的影响

以台湾"黑珍珠"莲雾果实为实验材料,选择植物代谢组学研究中常用的两种提取溶剂对莲雾果实样品进行非靶标的代谢轮廓分析,研究两种提取溶剂对莲雾果实代谢组学分析的影响。利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对莲雾果实代谢产物进行分离鉴定,利用甲醇-水(A)法和甲醇-氯仿-水(B)法两种方法共鉴定出129个代谢产物;利用主成分分析法等比较了两种提取方法的提取效果,结果表明两种方法存在显著差异。从色谱峰总数来看,A法可检测到323个色谱峰,B法仅有251个,统计分析发现124个差异显著的代谢物质,其中有90个代谢物质的相对含量用A法提取显著高于B法提取。研究结果表明,甲醇-水溶剂提取的方法更适合于莲雾果实代谢组学的分析研究。     

四种不同方法提取沙枣花挥发物的成分分析

为了探究不同提取方法对沙枣花挥发物化学成分分析的影响,本文采用水蒸气蒸馏法、固相微萃取法、顶空采集法和气囊采集法提取沙枣(Elaeagnus angustifolia)花的挥发性物质,并利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分别对4种方法提取的挥发物质进行化学成分分析鉴定。从4种方法提取的沙枣花挥发物质中共检测出51种化合物,其中酯类14种、烷类13种、酚类9种、酮类3种、醇类4种、其它物质8种。顶空收集法、水蒸气提取法、气囊采集法和固相微萃取法提取的挥发物质中分别检出化合物13种、19种、22种和18种,并且用2种(或2种以上)方法提取的沙枣花挥发物质中相同化合物有15种(即:酯类6种、烷类5种、酚类2种、醇类1种、其它物质1种),分别为:反式-肉桂酸乙酯、顺式-肉桂酸乙酯、反式-肉桂酸甲酯、邻苯二甲酸二甲酯、正癸烷、正十二烷、正十四烷、正十六烷、正二十烷、愈创木酚、4,4'-亚甲基双(2,6-二叔丁基苯酚)、2-苯基-1-丙烯、乙酸叶醇酯、肉桂酸异丙酯和苯乙醇。4种方法提取的沙枣花挥发物中均含反式-肉桂酸乙酯和邻苯二甲酸二甲酯2种化合物,且反式-肉桂酸乙酯的含量较高,分别为83.75%(水蒸气蒸馏法)、14.45%(固相微萃取法)、78.27%(顶空收集法)和56.65%(气囊采集法)。4种方法中气囊采集法提取的沙枣花挥发物质中所含化合物种类最多(22种),而且操作最简单,因此气囊采集法是提取沙枣花挥发物的较好方法。     

一种简便的从石蜡包埋组织中提取RNA的方法

目的:建立一种从石蜡包埋组织提取高质量RNA的简便、经济的方法。方法:运用TRIzol法和改进的AGPC(酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿)法等2种提取方法,从50例石蜡包埋组织中提取RNA,用紫外分光光度仪测定RNA的产率和纯度;用管家基因β-肌动蛋白做RT-PCR,检测RNA的质量。结果:TRIzol法提取RNA的成功率为96%(48/50),AGPC法为94%(47/50),2种方法所得RNA的吸光度值及得率在统计学上均无明显差异。结论:AGPC法和TRIzol法的提取效率相似,且提取费用只有TRIzol法的一半左右,是一种简便、经济、适合大量提取石蜡包埋组织中的RNA的方法,可用于临床。     

两种提取溶剂对莲雾果实GC-MS代谢组学分析的影响

以台湾"黑珍珠"莲雾果实为实验材料,选择植物代谢组学研究中常用的两种提取溶剂对莲雾果实样品进行非靶标的代谢轮廓分析,研究两种提取溶剂对莲雾果实代谢组学分析的影响。利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对莲雾果实代谢产物进行分离鉴定,利用甲醇-水(A)法和甲醇-氯仿-水(B)法两种方法共鉴定出129个代谢产物;利用主成分分析法等比较了两种提取方法的提取效果,结果表明两种方法存在显著差异。从色谱峰总数来看,A法可检测到323个色谱峰,B法仅有251个,统计分析发现124个差异显著的代谢物质,其中有90个代谢物质的相对含量用A法提取显著高于B法提取。研究结果表明,甲醇-水溶剂提取的方法更适合于莲雾果实代谢组学的分析研究。     

两种提取溶剂对莲雾果实GC-MS代谢组学分析的影响

以台湾"黑珍珠"莲雾果实为实验材料,选择植物代谢组学研究中常用的两种提取溶剂对莲雾果实样品进行非靶标的代谢轮廓分析,研究两种提取溶剂对莲雾果实代谢组学分析的影响。利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对莲雾果实代谢产物进行分离鉴定,利用甲醇-水(A)法和甲醇-氯仿-水(B)法两种方法共鉴定出129个代谢产物;利用主成分分析法等比较了两种提取方法的提取效果,结果表明两种方法存在显著差异。从色谱峰总数来看,A法可检测到323个色谱峰,B法仅有251个,统计分析发现124个差异显著的代谢物质,其中有90个代谢物质的相对含量用A法提取显著高于B法提取。研究结果表明,甲醇-水溶剂提取的方法更适合于莲雾果实代谢组学的分析研究。