三种致病性耶尔森氏菌噬菌体的分离鉴定研究进展

3种致病性耶尔森氏菌包括鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌,其噬菌体可用于耶尔森氏菌的诊断、防治和生态进化学研究。本文重点分析3种致病性耶尔森氏菌噬菌体的分离鉴定史。将3种耶尔森氏菌噬菌体基因组进行比较分析,并对各菌的噬菌体受体进行总结,为研究及利用3种耶尔森氏菌噬菌体提供思路。     

某林麝场林麝感染假结核耶尔森菌的诊治

为寻求四川宝兴某家养林麝死亡的原因及控制措施,采集一例病死林麝各组织器官进行病理切片观察和细菌分离,对分离到的病菌进行形态学观察、16S rDNA序列分析、小鼠致死试验、生化鉴定及药敏试验。结果显示,切片中各组织含有大量细菌团;从肠系膜淋巴结、肝、脾、肾和肺中只分离到1株病菌;16S rDNA测序分析发现该菌与耶尔森菌16S基因的相似性高达100%,生化及鉴别试验最终判定为假结核耶尔森菌。该菌对头孢噻肟、头孢西丁、丁胺卡那霉素等药物敏感。结果证实,此次林麝死亡的原因为假结核耶尔森菌引起的败血症,并及时应用敏感抗生素控制了病情。     

假结核耶尔森氏菌与宿主之间相互作用的分子机制研究进展

耶尔森氏菌属中有3个种对人和动物具有致病性,包括鼠疫杆菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)和假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)。研究发现,假结核耶尔森氏菌能通过小鼠小肠派氏淋巴结的M细胞(Microfold cell)进行跨细胞转运。这种转运方式首先是细菌利用其表面蛋白侵袭素Invasin或黏附素Yad A蛋白识别并结合宿主细胞表面的整合素Integrin受体家族成员的β1链,然后细胞膜上的分泌通道打开,细菌利用Ⅲ型分泌系统把效应蛋白注入宿主细胞内,破坏宿主细胞免疫系统进行感染的过程。过去三十年内关于假结核耶尔森氏菌有大量的文献报道,本文综述该菌与宿主细胞之间相互作用分子机制的研究进展,并讨论目前关于假结核耶尔森氏菌的研究方向及热点。     

耶尔森菌Ⅲ型分泌系统研究进展

Ⅲ型分泌系统是目前细菌中已知的最为复杂的分泌系统,也是致病性耶尔森菌包括鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌所共有的重要致病策略之一。简要综述了耶尔森菌Ⅲ型分泌系统的遗传构成、分泌装置的结构和组成、效应蛋白分泌及调控、效应蛋白的功能等方面的主要研究成果和研究进展。     

致病性耶尔森菌强毒力岛的结构和功能研究进展

耶尔森菌属中鼠疫耶尔森菌,假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌与人类致病关系密切,其鼠毒力是由染色体上存在的强毒力岛（HPI）决定,本文综述了由3种致病性耶尔森菌形成的2个HPI进化系Yen HPI和Yps HPI的结构和功能的研究进展。     

假结核耶尔森氏菌flhDC基因影响细菌运动性和生物膜形成

假结核耶尔森氏菌YPIII鞭毛系统的一级主调控基因flhDC缺失突变, 所得突变株在细菌泳动实验中丧失了泳动能力; 对fliA启动子融合报告菌株的检测发现, 与大肠杆菌一样, 在假结核耶尔森氏菌中二级调控基因fliA的表达也受到flhDC的调控; 对野生型和突变株在非生物活性表面和生物活性表面生物膜形成的观察和统计表明, flhDC突变株在不同表面上生物膜的形成明显减少, 并降低了对线虫表面侵染的严重度. 以上结果表明, flhDC的突变不仅直接使YPIII的运动性丧失, 而且影响了细菌在不同表面上生物膜的形成, 这一新功能的鉴定为细菌生物膜形成机制的研究提供了新的视点.     

噬菌体phiYe-F10的裂解谱的测定以及裂解能力与宿主毒力基因间关系分析

目的为测定小肠结肠炎耶尔森菌噬菌体phiYe-F10的裂解谱,分析噬菌体phiYe-F10裂解能力与宿主毒力基因间的关系。方法采用双层平板法观察噬菌体phiYe-F10对213株小肠结肠炎耶尔森菌,36株假结核耶尔森菌和1株鼠疫耶尔森菌的裂解能力;同时对不同来源不同地区的小肠耶尔森菌进行黏附侵袭位点基因(ail)、肠毒素基因(ystA、ystB)、黏附素基因A(yadA)、毒力因子基因F(virF)、O∶3血清型特异性基因(rfbc)检测和血清型别鉴定。结果表明213株小肠结肠炎耶尔森菌包括O∶3血清型84株(其中rfbc+78株),O∶5血清型10株,O∶8血清型13株,O∶9血清型34株,其它及未分型的共72株。携带毒力质粒的典型致病性小肠耶尔森菌(ail+,ystA+,ystB-,yadA+,virF+)77株,毒力质粒丢失的致病性小肠结肠炎耶尔森菌(ail+、ystA+、ystB-、yadA-、virF-)15株,其它非致病基因型121株。噬菌体phiYe-F10裂解71株O∶3小肠结肠炎耶尔森氏菌,其中致病性小肠结肠炎耶尔森菌52株,非致病性小肠结肠炎耶尔森菌19株。对O∶5,O∶9血清型和其它菌株均不裂解,对O∶3的裂解率高达84.5%(71/84)。噬菌体phiYe-F10对假结核耶尔森菌和鼠疫耶尔森氏菌均不裂解。结论:phiYe-F10噬菌体是一株小肠结肠炎耶尔森菌的裂性噬菌体,在25℃时表现出一个典型的窄裂解谱,高度专一性裂解O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌。phiYe-F10对典型致病性小肠结肠炎耶尔森菌的裂解能力明显高于非致病性的小肠结肠炎耶尔森菌     

合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布与耐药性分析

目的了解安徽省合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布和耐药状况,以期筛选出菌苗株和指导临床合理用药。方法对46份疑似大肠埃希菌病病料进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。采用玻片凝集试验对分离到的46株致病性大肠埃希菌进行血清型鉴定。同时分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测致病性大肠埃希菌的耐药性和ESBLs阳性菌株。结果46株致病性大肠埃希菌中,除7株细菌未能定型外,其余39株细菌分布于10个血清型,O127：K63血清型为优势血清型,占定型菌株的33．33％。46株致病性大肠埃希菌对21种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,15个ESBLs阳性菌株表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率均高于ESBLs阴性菌株。结论O127：K63血清型为优势血清型,可作为菌苗株。合肥地区动物源性大肠埃希菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠埃希菌多重耐药更为突出。     

圈养猕猴志贺氏菌的分离鉴定及药敏分析

目的确定猕猴感染志贺氏菌的状况,寻找有效治疗措施。方法采用不同选择培养基对13份病猴粪便样品进行分离培养、细菌革兰氏染色、镜检,并对分离的疑似菌株进行细菌生化鉴定和分子鉴定,经小白鼠致病性实验后,再用纸片扩散法测定分离菌株对23种抗生素的敏感性。结果从13份猕猴粪便样品中共检出12株志贺氏菌,检出率为92.31%,其中痢疾志贺菌(A群)1株、福氏志贺菌(B群)10株、宋内氏志贺菌(D群)1株;致病性试验结果表明,12株菌均能在72h内致死小白鼠,并能回收到注射的菌株;药敏试验结果表明,本实验中分离到的志贺氏菌对头孢噻肟(86.49%)最敏感,对头孢三嗪(75.00%)、头孢他啶(66.67%)次之,对多粘菌素B、羧苄西林、苄唑西林素等抗生素耐药性强。结论初步确定猕猴感染志贺氏菌普遍存在,进而引起腹泻、痢疾的可能性较大,头孢噻肟等为最敏感药物。     

青海湖斑头雁粪便细菌分离鉴定与耐药性分析

为了解斑头雁(Anser indicus)粪便中携带细菌多样性及其耐药情况,对青海湖斑头雁粪便细菌进行分离培养、生化鉴定、16S r RNA基因PCR扩增和序列分析,并进行细菌耐药性试验。结果显示:从30份斑头雁粪便中共分离到123株细菌,可分为10类细菌,分别从每类细菌中挑出一株代表性菌株进行鉴定,鉴定结果显示这10株细菌分别为大肠埃希菌(Escherichia coli)、水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sublitis)、柠檬节杆菌(Arthrobacter citreus)、腐败希瓦氏菌(Shewanella pulrefaciens)、河生肠杆菌(Enterobacter amnigenus)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)和产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。选取氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林、头孢他啶、氨曲南、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、四环素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星药敏纸片,对分离菌株进行耐药性分析,发现水生拉恩菌、杀鲑气单胞菌和成团泛菌表现为多重耐药性;其他细菌对氨苄西林和四环素有一定的耐药性,对其余受试药物都有不同程度的敏感性。野鸟携带耐药性的条件致病菌,可能会对野生动物健康造成威胁,本研究对斑头雁粪便中携带的条件致病菌及其耐药性进行探究,以期为野鸟携带细菌的耐药机制提供研究理论依据,同时也对野生动物疫病的监测与防控有重要意义。     

群体感应与病原菌致病性研究进展

群体感应是细菌根据细胞密度变化进行基因表达调控的一种生理行为。当细菌密度达到临界阈值时能释放一些特定的自诱导信号分子,从而调节本种群或同环境中其他种群的群体行为。细菌群体感应参与包括人类、动植物、病原菌在内的多种生物的生物学功能调节,如生物膜的形成、毒力因子的产生、病原菌的耐药性等。深入研究病原菌群体感应系统的调控机制,将提高对病原菌发病机制的认识,有利于以群体感应作为防治疾病策略的研究。系统阐述了群体感应系统的组成类型、群体感应与病原菌致病性的关系,及其在抑制病原菌致病方面的应用。     

弗氏柠檬酸杆菌对河蟹致病性的研究

首次报道了弗氏柠檬酸杆菌对河蟹的病原性、并导致其病理变化,药物对该菌的敏感试验及生产中药物治疗效果.从垂死的病蟹肝胰脏中分离得到可疑病菌,经人工感染试验证实此菌导致健康蟹发病死亡.该菌可导致河蟹的肝胰腺、鳃等发生病理变化,最终引起败血症而死亡.通过16种药物对该菌的敏感试验,筛选出有效药物,应用于生产中取得了较好疗效.       

猪源致病性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析

目的鉴定引起猪渗出性皮炎的病原,并分析猪源致病性金黄色葡萄球菌的耐药性,为临床用药提供依据。方法采集患渗出性皮炎的仔猪标本进行细菌分离培养,联合应用形态学检查、生理生化试验和PCR方法鉴定分离菌株,并进行致病性和药物敏感性试验。结果先后从病猪标本中分离鉴定获得PSA1、PSA2、PSA3和PSA4四株金黄色葡萄球菌,其中PSA1和PSA3分离株的致病性较强。药敏试验结果显示PSA1、PSA2和PSA3分离株为MRSA菌株,PSA4分离株为MSSA菌株。MRSA菌株对14种抗菌药物均呈现不同程度的耐药,尤其是对青霉素、链霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星和氧氟沙星等6种抗菌药物的耐药率达100%。所有分离株对万古霉素与替考拉宁均敏感。结论合肥地区猪渗出性表皮炎的病原为金黄色葡萄球菌。猪源致病性金黄色葡萄球菌合肥分离株具有多重耐药性,治疗猪渗出性皮炎应建立在体外药敏试验的基础上,有针对性选择抗菌药物。     

Current concepts on the pathogenicity of phytopathogenic bacteria

What are the molecular determinants that make a bacterium a plant pathogen? In the last 10-20 years, important progress has been made in answering this question. In the early 20th century soon after the discovery of infectious diseases, the first studies of pathogenicity were undertaken. These early studies relied mostly on biochemistry and led to the discovery of several major pathogenicity determinants, such as toxins and hydrolytic enzymes which govern the production of major disease symptoms. From these pioneering studies, a simplistic view of pathogenicity arose. It was thought that only a few functions were sufficient to transform a bacterium into a pathogen. This view rapidly changed when modern techniques of molecular genetics were applied to analyse pathogenicity. Modern analyses of pathogenicity determinants took advantage of the relatively simple organization of the haploid genome of pathogenic bacteria. By creating non-pathogenic mutants, a large number of genes governing bacterium-host interactions were identified. These genes are required either for host colonization or for the production of symptoms. Even though the role of motility and chemotaxis in these processes is still unclear, it is clear that a strong attachment of Agrobacterium to plant cells is a prerequisite for efficient plant transformation and disease. Other important pathogenicity factors identified with a molecular genetic approach include hydrolytic enzymes such as pectinases and cellulases which not only provide nutrients to the bacteria but also facilitate pathogen invasion into host tissues. The precise role of exopolysaccharide in pathogenicity is still under discussion, however it is has been established that it is crucial for the induction of wilt symptoms caused by Ralstonia solanacearum. Trafficking of effector proteins from the invading bacterium into the host cell emerged recently as a new central concept. In plant pathogenic bacteria, protein translocation takes place through the so-called 'type II secretion machinery' encoded by hrp genes in the bacterium. These genes are present in representatives of all the major groups of Gram negative plant pathogenic bacteria except Agrobacterium. Most of these genes have counterparts in pathogens of mammals (including those of human) and they also play a central role in pathogenicity. Additionally, recent evidence suggests that a 'type IV secretion machinery' injects bacterial proteins into host cells. This machinery, originally found to be involved in the transfer of t-DNA from Agrobacterium into plant cells, was recently shown to translocate pathogenicity proteins in pathogens of mammals such as Helicobacter pylori and Brucella. Discovery of the trafficking of proteins from the pathogen into host cells revolutionized our conception of pathogenicity. First, it rather unexpectedly established the conservation of basic pathogenicity strategies in plant and animal pathogens. Second, this discovery changes our ideas about the overall strategy (or mechanism) of pathogenicity, although we still think the end result is exploitation of host cell nutritive components. Rather than killing the host cell from outside, we envision a more subtle approach in which pathogens inject effector proteins into the host cell to effect a change in host cell biology advantageous to the pathogen. Identification of the effector proteins, of their function and of the corresponding molecular targets in the host is a new challenge which will contribute to the conception of new strategies to control diseases.     

弗氏柠檬酸杆菌对河触致病性的研究

首次报道了弗氏柠檬酸杆菌对河蟹的病原性、并导致其病理变化,药对物该菌的敏感试验及生产中药物治疗效果。从垂死的病蟹肝胰脏中分离得到可疑病菌,经人工感染试验证实此菌导致健康蟹发病死亡。该菌可导致河触的肝胰腺、鳃等发生病理变化,最终引起败血症而死亡。通过16种药物对该菌的敏感试验,筛选出有效药物,应用于生产中取得了较好疗效。     

雏鸡源致病性粪肠球菌的分离鉴定及其耐药性分析

【背景】粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是人和动物肠道正常菌群之一,也是一种条件性致病菌。近年来,粪肠球菌引起人和动物感染的报道越来越多。【目的】探明引起某养鸡场雏鸡发病死亡的病原及其致病性和有效治疗药物。【方法】结合临床症状和病理剖检,开展病原菌分离、生理生化特性检测和16S rRNA基因序列分析、致病性试验、耐药分析和对患病鸡群的药物治疗。【结果】患病鸡有昏睡、瘫痪或共济失调等临床症状;肝、脾肿大,肝脏发黄、少量出血点、质脆易碎,肠道粘膜增厚、出血,脑轻微水肿;从肝脏组织分离得到一株革兰氏阳性球菌,经纯化培养后命名为CJ517;依据该菌株形态特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析鉴定为粪肠球菌;致病性试验显示CJ517菌株能致死小鼠,致死率为66.67%;该菌对头孢噻肟、磷霉素、丁胺卡那等药物敏感,对多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考等药物耐药;经用敏感药物和提高免疫力结合治疗后,鸡群病情得到控制。【结论】研究结果可为临床诊断和治疗动物粪肠球菌感染提供参考。     

病原中的活性氧释放研究进展

活性氧的释放在动植物-病原菌互作过程中有着非常重要的作用.一般认为互作中的活性氧来源于动植物细胞生物膜中的氧化还原体系.但近年来随着互作研究的深入,发现动植物病原菌自身也有活性氧的释放以及复杂的调控系统,它们的活性氧释放能力很有可能与其致病性有一定的联系,并可能参与了互作,这些发现对深入了解动植物-病原菌的互作机制具有重要意义.概述了在细菌、真菌等多种动物病原菌中存在的活性氧释放现象,这些微生物活性氧产生的位点、相关功能分子以及调控机制,介绍了目前研究仍然较少但其潜在意义重大的植物病原菌中的活性氧释放现象、可能的调节机制和病理学意义.     

重症监护病房革兰阴性菌分布及耐药性分析

目的：了解我院重症监护病房革兰阴性菌的分布和耐药情况。方法：WHONET5.6分析585例的革兰阴性菌的细菌培养和药物敏感试验结果。结果：585例革兰阴性菌标本中,排名前五位的是铜绿假单胞菌菌152株（25.98%）,鲍曼不动杆菌111株（18.97%）,肺炎克雷伯菌98株（16.75%）,大肠埃希菌49株（8.38%）,洋葱伯克霍尔德菌39株（6.67%）。这五种病原菌对14中抗生素的药敏试验发现,除了对头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低外,对其他抗生素都有不同程度的耐药。结论：革兰阴性菌在感染的病原菌中仍占主要地位,耐药性也很严重,应及时检测病原菌变化及耐药趋势,指导临床合理使用抗生素。     

Herpesvirus saimiri antigens and virus recovery from cultured cells and antibody levels and virus isolations from squirrel monkeys

In cultures of vero cells infected with a low multiplicity of Herpesvirus saimiri (HVS), the development of internal antigen, as demonstrated by indirect immunofluorescence, was detected early and preceded the release of infectious virus. Membrane antigen, determined on unfixed cells, developed shortly thereafter. A positive correlation was found between the percentage of antigen-positive cells and the amount of recoverable infectious virus in cocultivation cultures of cells of a low virus-producing line of HVS-induced tumor and vero cells. Cytosine arabinoside (araC) prevented the development of infectious HVS, typical internal antigen, and membrane antigen when vero cells were treated with the drug two hours after virus inoculation. Another type of internal antigen appearing predominantly in the nucleus was demonstrable in infected but araC-treated vero cells. The presence of antibody to this antigen was rare in naturally-infected squirrel monkeys. Colony-housed squirrel monkeys showed a high frequency of antibody to HVS internal antigen produced in infected vero cells in the absence of araC, and evidence for seroconversion in some of these monkeys was obtained. Virus was isolated from lymphocytes of six of seven squirrel monkeys tested.     

貂源绿脓杆菌的分离鉴定及其致病性

为了揭示绿脓杆菌对水貂的致病性,本研究采用细菌分离培养方法、形态学观察、生化试验、药敏试验与16S rDNA测序等技术,对2013年在山东省诸城、文登与临沂采集的43份发病水貂肺组织进行了细菌分离鉴定。结果分离到的5株细菌均为绿脓杆菌（分别命名为F1、F5、F6、F8、F10）,分离率为11.6%。所分离的5株绿脓杆菌之间的核酸同源性为 98.9 %～99.7 %; F5、F6、F8、F10与F1在一个大的分支上。用F1株对小鼠与水貂分别进行接种攻毒,建立绿脓杆菌对小鼠与水貂的致病性研究动物模型。F1在小鼠肺部含量较高,半数致死量（LD₅₀）为 1.6×10⁶CFU/mL,对小鼠有较强的致病力;F1对水貂的LD₅₀为3.2×10⁷CFU/mL,接种3.2×10⁸CFU/mL菌液的水貂在接种后的20-44h内全部死亡,其他感染组的水貂仅表现一过性的精神不振、食欲稍有下降,这表明绿脓杆菌对水貂具有一定的致病力。