低温和超低温保存对中国大鲵成熟精子的影响

中国大鲵Andrias davidianus是中国特有的一种濒危有尾两栖类动物,为了保护这一珍稀物种并且为中国大鲵人工辅助繁育建立一套可靠的技术,对中国大鲵的精子在0—4℃下低温短期保存和在液氮中超低温长期保存进行了研究。研究表明中国大鲵精子原液在常温下一般仅存活3—5h,4℃下能存活6d,0℃下存活时间可达9d。精子原液中添加Ringer氏液或Holtferter氏液,精子存活率比原液保存显著降低。在改良的超低温冻存条件下,中国大鲵精子在液氮中保存两周后解冻,精子复苏率可达10%—15%。利用扫描和透射电镜观察冻融前后中国大鲵精子的超微结构,发现受冷冻损伤精子质膜出现膨胀、破裂;精子穿孔器和轴丝显著弯曲,甚至断裂;波动膜明显脱落或膜结构损坏;精子线粒体嵴变形。结果表明,超低温冻存导致部分中国大鲵精子超微结构发生变化而产生冻伤,进而导致精子活力、复苏率下降。研究为建立规范化的中国大鲵精液保存程序和中国大鲵规模化人工繁育提供重要参考。     

冷冻保护剂及预冷时间对河蟹精子体外冷冻保存的影响

本文以甘油、二甲亚砜（DMSO）为冷冻保护剂,采用两步降温法,以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标,研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响。胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子,液氮冷冻保存8h以上,精子保存密度为10^7个／mL,伊红染色法检测精子存活率,单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA损伤。实验共设置10个组,分别为不同浓度的单一冷冻保护剂（每种保护剂的体积百分比分别为5％、10％、12．5％、15％）和两种保护剂组合（两种保护剂在同一实验组巾的体积百分比含量均为5％、10％）。结果显示,12．5％甘油的保存效果最佳,精子存活率达到62．60％。在此基础上,以10％甘油作为冷冻保护剂,设置5、10、20、30、40min5个时间梯度,研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响。结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著,当预冷时间低于20min时,精子大量死亡,且精子DNA严重损伤;当预玲时间超过30min时,精子存活率明显提高,精子DNA损伤明显减弱。     

大熊猫精子低渗膨胀试验与其他精子质量评估试验相关性研究

利用解冻后的大熊猫冷冻精液,分别进行体外存活试验、顶体反应试验、异种穿卵试验和低渗膨胀试验,并对低渗膨胀试验与其他试验作相关性分析.结果显示:各试验之间存在一定的相关性.精子低渗膨胀率与精子的体外37℃存活时间呈显著正相关,r=0.79(P＜0.05);与体外异种受精率呈极显著正相关,r=0.90(P＜0.01).说明大熊猫精子的低渗膨胀试验可以作为精子质量评价的重要指标.     

AFM对黄精赞育胶囊优选方处理前后大鼠弱精子超微结构的观察研究（英文）

目的：应用原子力显微镜技术实现对大鼠精子超微结构的实时成像,对比观察中药作用前后弱精子超微结构的变化。方法：制作少弱精症大鼠模型;运用非接触模式原子力显微镜技术对比观察正常精子和病理性精子在中药作用前后超微结构的动态变化。结果：获得精子头体、颈部和鞭毛等部位的实时超微结构图像。结论：AFM可直接探测精子头体的各种畸形,实现对精子全貌的观测。通过修复弱精子超微结构的病理形态学缺陷可能是黄精赞育胶囊优选方改善弱精子质量的机制之一。     

AFM对黄精赞育胶囊优选方处理前后大鼠弱精子超微结构的观察研究

目的:应用原子力显微镜技术实现对大鼠精子超微结构的实时成像,对比观察中药作用前后弱精子超微结构的变化.方法:制作少弱精症大鼠模型;运用非接触模式原子力显微镜技术对比观察正常精子和病理性精子在中药作用前后超微结构的动态变化.结果:获得精子头体、颈部和鞭毛等部位的实时超微结构图像.结论:AFM可直接探测精子头体的各种畸形,实现对精子全貌的观测.通过修复弱精子超微结构的病理形态学缺陷可能是黄精赞育胶囊优选方改善弱精子质量的机制之一.     

AFM对黄精赞育胶囊优选方处理前后大鼠弱精子超微结构的观察研究

目的:应用原子力显微镜技术实现对大鼠精子超微结构的实时成像,对比观察中药作用前后弱精子超微结构的变化.方法:制作少弱精症大鼠模型;运用非接触模式原子力显微镜技术对比观察正常精子和病理性精子在中药作用前后超微结构的动态变化.结果:获得精子头体、颈部和鞭毛等部位的实时超微结构图像.结论:AFM可直接探测精子头体的各种畸形,实现对精子全貌的观测.通过修复弱精子超微结构的病理形态学缺陷可能是黄精赞育胶囊优选方改善弱精子质量的机制之一.     

氦氖激光对种公牛精子生物学效应的研究

本文采用氦氖激光辐射种公牛的精液,发现低剂量的氖氦激光可以提高精子的活力,存活时间和呼吸强度,降低精子的畸形率,并对其机理作了探讨。     

冻存对自发性高血压大鼠精子顶体功能的影响

应用金霉素(CTC)荧光检测、精子穿卵试验和项体酶β-D-半乳糖苷酶活力测定等方法检测冻存对大鼠精子顶体的影响。CTC荧光反应显示,与未冻存精子比较,冻存后精子顶体反应的类型发生改变,AR型(发生了顶体反应)精子比例明显下降,冻存前为68.6％,冻存后为13.4.％,但是获能精子的比例未发生明显变化(92.6％对90.8％)。与未冻存的精子相比,冻存组精子的穿卵试验的受精指数下降(23.4±7.02对10.2±3.95),而且冻存后精子顶体酶——β-D-半乳糖苷酶活力明显下降(9.39±1.98对4.50±1.40)。结果表明冻存后精子的顶体功能受到较明显的破坏。实验结果为今后针对性地改进大鼠精子的冻存方法,改善大鼠精子的冻存保护剂提供实验和机制上的依据。     

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力及其对棉酚敏感性的变化

大鼠及羊精子在附睾成熟过程中ATP酶活力发生明显下降,酶活力的变化形式存在着种间差异。大鼠附睾体及附睾尾精子的ATP酶相对活力分别为附睾头的55.7％及59.6％,而羊则为92.1％及59.8％。 大鼠及羊附睾各区域精子的ATP酶对棉酚抑制作用的敏感程度不同。在5μmol/L的低棉酚的浓度下,大鼠附睾头、体及尾部精子的ATP酶活力分别降至对照组的40.8％、62.7％及81.4％;当棉酚浓度增至40μmol/L时,羊附睾头、体、尾部精子的ATP酶活力才分别降至对照组的63.8％、83.7％及90.7％。作者提出如能使药物作用于附睾精子的敏感区域以干扰其成熟,可能是一条有发展前景的抗生育新途径。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对离体人成熟精子功能的影响

该文研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]在体外对人成熟精子功能的影响。用0,0.1,1,10,100μmol/L DEHP处理离体人成熟精子后,利用伊红苯胺黑染色、计算机辅助精子分析系统、精子穿甲基纤维素实验、金霉素染色等方法检测精子存活率、运动、超活化、获能、顶体反应等生理功能。结果显示,DEHP在短时间内不影响精子存活率,但是抑制精子运动、超活化以及孕酮诱导的获能和顶体反应。推测DEHP体外急性染毒会抑制人成熟精子功能。     

麝香、麝香酮对体外培养大鼠视网膜神经细胞存活影响的比较研究

为比较麝香、麝香酮对大鼠视网膜神经细胞存活的影响,分别单独将麝香、麝香酮加入大鼠视网膜神经细胞混悬液中,用MTT法评价麝香、麝香酮对大鼠视网膜神经细胞存活的影响;另分别在麝香和麝香酮中加入定量的m-NGF,采用同法评价麝香(或麝香酮) m-NGF对大鼠视网膜神经细胞存活的影响。结果表明,单独应用麝香、麝香酮对体外培养大鼠视网膜神经细胞的存活无明显影响(P>0.05);在加入定量m-NGF的条件下,麝香、麝香酮分别在50～800μg/mL和100～800μg/mL的浓度范围明显促进大鼠视网膜神经细胞的存活,且呈一定的量效关系。说明麝香、麝香酮无直接促进视网膜神经细胞存活的作用;麝香、麝香酮均与NGF协同增进视网膜神经细胞的存活;麝香酮是麝香中增强NGF生物效应的有效成分之一。     

氯化二丁基锡对雄性小鼠睾丸和精子质量的影响

成年雄性小鼠腹腔注射 0 0 2 5～ 0 40 μg/kg/d氯化二丁基锡 (DBTCl) ,染毒 7d。实验温度 2 2± 2℃ ,光∶暗 =1 2h∶1 2h。结果表明 ,DBTCl对雄性小鼠生殖系统毒性影响很强。在≥ 0 0 5μg/kg剂量作用下 ,小鼠睾丸重量、精子存活率和密度明显下降 ,精子畸形率明显增加。观察发现 ,在 0 0 2 5～ 0 0 5μg/kg低剂量组中精子头部畸形率较高 ,而在0 2 0～ 0 40 μg/kg高剂量作用下 ,精子尾部的畸形率明显增加。剂量大于 0 1 0 μg/kg处理组小鼠体重明显下降。DBTCl和雄性小鼠生殖指标之间存在剂量 效应关系。DBTCl对精子存活率和精子密度 7d的ED50 值分别为 0 1 7和 0 1 9μg/kg。本项研究为有机锡化合物引起哺乳动物精子畸形的早期诊断提供可能的指标与方法     

渔游蛇雄性生殖周期及其肾性节的生殖生理学研究:Ⅱ.肾性节对精子的体外效应及生化分析

通过精子体外短期孵育表明：渔游蛇（Ｎａｔｒｉｘ ｐｉｓｃａｔｏｒ）肾性节具有营养精子的功能。聚丙烯酰 胺凝胶制备性电泳分离得到了肾性节特异性蛋白Ａ、Ｂ、Ｃ三因子。其中Ａ因子能显著提高精子在 体外的存活率，由Ａ１Ａ２两个亚基构成，分子量分别为６００００和３２０００。而Ｂ、Ｃ因子对精子存活 率无明显的影响。     

精子特异性乳酸脱氢酶的免疫学特性及其应用

精子特异性乳酸脱氢酶特异地存在于鸟类和哺乳类动物的成熟睾丸和精子中,为精子的运动和存活提供能量,它是一种自身抗原,其天然抗体不与体细胞LDH同工酶发生交叉反应,用LDH－C4免疫小鼠或免疫等能够诱导免疫应答,导致生育率的降低,因此在人类避免和鼠害控制方面将有较好的应用前景。     

棉酚对几种动物精子ATP酶抑制作用的比较研究

本文比较了棉酚对几种动物精子ATP酶的抑制作用。实验所测为精子细胞的总ATP酶活力;采用的棉酚浓度为10μM至80μM。20μM时精子酶的相对活力为海胆7604％,大鼠74％,家兔51.6％;40μM时酶的相对活力百分数下降至海胆52.5,大鼠35和家兔29.7;达80μM时酶的相对活力进一步下降至海胆26.7,而大鼠及家兔仅余13.2。结果表明(1)棉酚对精于ATP酶的抑制作用是依赖浓度的变化;(2)各种动物精子ATP酶活力的下降情况显示,大鼠及家兔(哺乳动物)精子ATP酶对棉酚的敏感性比海胆(无脊椎动物)要高些。这种差异性可能对棉酚在临床上的应用具有一定的参考价值。     

不同剂量x射线对大鼠精子CRISP2mRNA表达水平的影响

目的：观察不同剂量x射线对大鼠精子CRISP2mRNA表达水平的影响,探讨其在电离辐射所致大鼠精子功能改变中的作用。方法：用吸收剂量为1、2、4、和6Gy的x射线分别照射活体SD大鼠的外生殖系统1…4812、24h后,用PCR技术检测精子CRISP2基因mRNA表达水平;用光学显微镜观察精予活力。以未照射组为对照。结果：4、6GyX射线照射不同时间（1、4、8、12、24h时）后大鼠精子的CRISP2mRNA相对表达量均较对照组显著下降（P．〈0．05）,其中6Gb,照射24小时后相对表达量最低（P〈0．01）,而4Gy照射组与6Gy照射组相比较差异无统计学意义（P〉0．05）;2Gyx射线照射8h后CRISP2mRNA相对表达量下降有统计学意义（P〈0．05）;2GyX射线照射1、4h后及1GyX射线照射不同时间（1、4、8、12、24la）后大鼠精子的CRISP2mRNA相对表达量较对照组下降,但差异无统计学意义（P〉O．05）。1、2GyX射线照射不同时间（1、4、8、12、24小时）及4GyX射线照射（1、4、8h）后,精子活力与正常对照组相比无明显改变（P〉0．05）;4GyX射线照射12、24h后大鼠精子活力显著低于正常对照;6GyX射线照射不同时间（1、4、8、12、24h）后,精子活力明显低于对照组（P〈0．05）。结论：不同剂量X射线照射不同时间可导致SD大鼠精子活力下降,这可能与其下调CRISP2基因的mRNA表达水平有关。     

慢性间歇性缺氧降低SD大鼠精子数量和活力的研究

摘要 目的：通过制备大鼠慢性间歇性缺氧的动物模型,观察间歇性缺氧对雄性大鼠精子数量和活力的影响,并初步探讨其可能的发生机制。方法：16只雄性SD大鼠随机分为对照组和缺氧组。间歇性缺氧8周后分别测定两组大鼠精子活力和精子浓度,睾丸组织中P53的表达量和细胞的凋亡水平,以及血清睾酮（T）、促卵泡素（FSH）和黄体生成素（LH）的浓度。结果：与对照组比较,缺氧组大鼠精子的浓度和活力均降低（P>0.05),并且前向运动的精子数明显减少（P<0.05）。同时,缺氧组睾丸组织P53 mRNA的表达和睾丸组织中凋亡的细胞均多于对照组,血清T、LH的浓度低于对照组（P<0.05）。结论：间歇性缺氧时可能影响了下丘脑-垂体-性腺轴,不仅使睾酮合成减少,还降低了对P53的抑制作用而诱导了大量细胞的凋亡,最终降低了SD大鼠的精子数量和活力。     

度他雄胺对大鼠附睾精子成熟和生育的影响

目的通过度他雄胺对大鼠附睾精子和生育的影响,探索调节雄性生育的睾丸后作用靶点。方法使用度他雄胺20和40 mg/(kg.d)大鼠灌胃给药,连续2周。给药结束后雄雌鼠按1∶2合笼,计算生殖指数;采用计算机辅助精子分析系统分析精子活力和形态;采用SYBR-14和PI双重荧光染色计算精子存活率;采用Elisa法测定大鼠睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)血清浓度;采用HE染色法对各组睾丸、附睾进行组织学分析。结果度他雄胺低、高剂量组双氢睾酮浓度均显著下降,分别为0.54和0.28 nmol/L(P<0.01),精子活力明显降低,分别为39.0%和28.7%(P<0.01),畸形率分别增加为10.3%和15.6%(P<0.05),最后受孕率分别降为62.5%和38.4%。而睾酮水平和交配指数均无明显变化(P>0.05),睾丸和附睾亦无明显病理学改变。结论度他雄胺通过抑制DHT生成,影响附睾精子成熟而导致大鼠不育,为今后男性避孕和不育药物研发提供了新思路。     

东方蝾螈繁殖生态的研究

本文报道东方蝾螈(Cynops orientalis)的繁殖生态,内容有精巢分叶、精子形态、怀卵量、性征、性比、求偶、交配、纳精、产卵及孵化等,并对产卵场中性比的周年变化、精包形态、精子存活力及与蓝尾蝾螈的种间差异进行了观察和讨论。     

冷刺激诱导的弱精子症大鼠模型肾上腺轴与甲状腺轴功能改变的研究

目的:研究冷刺激诱导建立的弱精子症模型大鼠HPA轴与HPT轴功能改变,探讨其生殖生物学意义。方法:取28只SPF级性成熟雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组,12只)与冷刺激组(C组,16只)。造模结束前对大鼠一般情况包括精神状态、体重、核心体温、尿量等进行检测。23周后通过精子功能的评定筛选弱精子症大鼠并建立弱精子症组(CA组),同时取外周血清、HPA轴、HPT轴相关组织;ELISA法和放射免疫法测定各组大鼠外周血清HPA、HPT轴相关激素水平,并在光镜下观察HPA轴和HPT轴相关组织形态学改变。结果:与N组相比,CA组大鼠反应迟钝,活动能力降低,夹尾试验评分显著降低,核心体温及尿量升高,差异显著(P0.05)。血清激素结果表现为CA组EPI显著升高,T3/T4比值亦显著升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。光镜下可见N组各组织形态正常,与N组相比,CA组下丘脑室旁核神经细胞增生,排列紊乱;垂体细胞水肿,血窦不明显,嗜酸性细胞增多;肾上腺以皮、髓质水肿改变为主;甲状腺滤泡萎缩,上皮细胞增生。结论:冷刺激诱导建立的弱精子症大鼠模型可发生HPA轴功能改变,呈现慢性应激反应现象,提示,HPA轴功能改变参与该模型弱精子症的的发生发展过程。