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小麦染色体的显微激光分离 总被引:18,自引:0,他引:18
探讨了应用氩离子激光进行植物染色体显微激光切割,分离的可行性,应用该技术对普通小麦的体细胞及特定染色体(1B染色体)实施切割,分离,并且以分离到的单细胞核或单条染色体为模板进行了PCR DNA扩增。该技术比玻璃针切割分离染色体技术,具有操作方便,容易掌握,且可对整个细胞核进行分离等优点,有利于促进染色体显微操作技术的普及应用。同时,探讨了染色体显微操作技术在细胞遗传学及分子生物学研究领域的应用前景 相似文献
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采用玻璃针分离法,通过显微操作系统成功地分离到内葵杂3号三交种和单交种的随体染色体,经两轮LA.PCR扩增得到250~1500bp的DNA片段。用各自的基因组DNA标记成探针,与随体染色体扩增产物进行Southern杂交,显示杂交信号,证明内葵杂3号三交种和单交种随体染色体DNA已被成功扩增。将第2轮PCR产物构建质粒文库,得到三交种和单交种克隆数分别约为2.26×10^5和2.57×10^5。各随机挑取30个重组子进行分析,发现插入片段大小分别为200-700bp和200~500bp,平均插入片段大小分别为535bp和480bp。这是染色体微分离与微克隆技术首次在向日葵上的应用。 相似文献
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14个染色体区特异性探针池的构建 总被引:9,自引:2,他引:7
本文运用人类染色体显微切割和PCR技术,成功地构建了14个染色体区带专特性探针池,并通过染色体原位杂交证明它们均分别来源于相应的被切割的染色体区带。 相似文献
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黑麦2R染色体的显微分离与回收 总被引:4,自引:0,他引:4
建立了利用显微担任技术分离植物单个染色体的方法。以黑麦(Secale cereale L)为材料,以其标准染色体组型图为依据,识别出黑麦含抗病基因的1R染色体。经显微操作,将单条1R染色体放入Ep-pendof管中。研究表明,用α-溴萘饱和液对细胞进行预处理,可快速鉴别出黑麦1R染色体。采用去壁低渗制片技术,可明显地改善显微分离意境染色体的条件。 相似文献
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大豆单染色体的显微分离及体外扩增 总被引:18,自引:0,他引:18
采用玻璃针分离法,通过显微操作器成功地分离到大豆(GlycinemaxL.)单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个0.5mLEppendorf管中,经Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头后,进行两轮PCR扩增,得到0.3~3kb之间的DNA片段。Southern杂交表明,这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组DNA之间有同源性,从而证明两条单染色体DNA确实已被成功地扩增了,同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离,为小型单染色体DNA的体外扩增及微克隆奠定了基础。 相似文献
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黑麦B染色体端粒相关序列的克隆 总被引:5,自引:0,他引:5
利用显微切割技术,分离了黑麦(SecalecerealL.)10个B染色体短臂端部片段,并利用寡核苷酸引物(CCCTAAA)3及新建立的二级单引物序列PCR扩增法,扩增了黑麦B染色体端粒相关序列。染色体原位杂交实验将PCR产物定位于B染色体短臂末端,多数A染色体末端也显示清晰的杂交信号。部分PCR产物克隆到pUC19载体中,对其中一个克隆子pp3的序列分析结果表明,它与玉米亚端部克隆子pBF266部分区域的同源性为92%。就目前资料检索,黑麦、玉米端粒相关序列具有高度同源性还未见报道。对这一实验设计在构建高密度RFLP图谱中的应用进行了探讨 相似文献
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建立了利用显微操作技术分离植物单个染色体的方法。以黑麦(Secale cereale L.)为材料,以其标准染色体组型图为依据,识别出黑麦含抗病基因的1R染色体。经显微操作,将单条1R染色体放入Ep-pendorf管中。研究表明,用α-溴奈饱和液对细胞进行预处理,可快速鉴别出黑麦1R染色体。采用去壁低渗制片技术,可明显地改善显微分离单染色体的条件。 相似文献
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染色体微切割,微分离与微克隆技术研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
本文详细介绍了染色体微切割、微分离与微克隆技术在动物、人类及植物中的创立与发展,评述了不同染色体微切割、微分离与微克隆方法的优缺点,总结了这项技术在遗传学研究中的应用,提出了管项技术在植物分子遗传学研究中新方向。 相似文献
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黄鳝单条染色体的显微分离及特异性检测 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法;在Olympus倒置显微镜下用毛细玻璃微针手工分离黄鳝减数分裂Ⅰ终变期3号染色体,将期DNA作模板进行DOP-PCR扩增后,分别以α^-32P-dCTP和Biotin-11-dUTP标记的单条染色体DNAPCR扩增产物及Biotin-11-dUTP标记的大豆18SrRNA基因作探针进行Southern杂交,FISH和Dot杂交来检测其特异性,结果表明:(1)减数分裂Ⅰ终变期染色体标本是进行染色体显微操作的理想材料;(2)DOP-PCR扩增产物片段在200-1000bp之间,平均600bp左右;(3)杂交结果显示,本研究所获得的单条染色体是黄鳝3号染色体;(4)与显微操作仪和微激光分离相比较。该方法不需要昂贵仪器,在常规实验室即可操作,具有广泛的普及应用意义。 相似文献
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邓汉湘 《中国生物工程杂志》1995,15(3):9-9
显微切割与显微克隆邓汉湘(湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室)湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室,运用人工合成的寡核苦酸引物结合染色体的显微切割,在国际上率先建立了寡核音酸引物介导的人类高分辨染色体显微切割和显微基因克隆技术。至今,该室已建立了1... 相似文献
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小麦染色体显微切割及HMW-GS1Dx5亚基基因克隆 总被引:5,自引:0,他引:5
宏伟的人类基因组计划以及随之而来的动物、植物(如水稻等)基因组计划为克隆有益基因提供了新方法和思路,其中一个令人注目的领域是染色体显微切割。该技术起始于80年代早期,首次应用显微切割和微克隆的是Scalenghe等在果蝇多线染色体上进行的。随后在哺乳... 相似文献
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本文详细介绍了染色体微切割、微分离与微克隆技术在动物、人类及植物中的创立与发展,评述了不同染色体微切割、微分离与微克隆方法的优缺点,总结了这项技术在遗传学研究中的应用,提出了利用这项技术在植物分子遗传学研究中的新方向。 相似文献
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介绍了染色体显微切割及微克隆技术的原理和主要方法,综述了显微切割及微克隆的研究进展,并讨论了其在植物中的应用. 相似文献
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染色体显微切割与DOP—PCR结合对赤麂Sry基因克隆,测序及初步定位 总被引:5,自引:2,他引:3
应用显微切割技术获得赤麂1号,Y1,Y2染色体,通过DOP-PCR增加模板DNA拷贝数,然后用人的性别决定基因(Sex-tetermininig Region of the Chromosome Y,SRY)中HMG框内设计1对引物,对DOP-PCR产物进行扩增,在雄性赤麂Y2染色体DOP-PCR产物中扩增出与人SRY基因同源的Sry基因片段,克隆,测序,首次在分子水平上证明赤麂Y2染色体是真正的Y染色体,同时对赤麂Syr基因进行了初步定位。 相似文献
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黑麦染色体的显微分离与PCR扩增 总被引:13,自引:0,他引:13
利用改良的染色体显微分离技术,分离了黑麦(SecalecerealeL.)一个完整细胞的18条染色体(14A+4B),用人工合成的寡核苷酸为引物,进行单一引物法(singleuniqueprimerPCR,SUPPCR)扩增,经Southern杂交证明,PCR扩增产物与黑麦基因组DNA同源。 相似文献