钩端螺旋体在复方明胶培养基中长期传代培养的抗原性分析

本文报道了钩端螺旋体(简称钩体)在复方明胶培养基中经过三年的传代培养,用显微镜凝集试验、对流免疫电泳及SDS-聚丙烯酰胺凝肢电泳(PAGE)分析,同Korthof培养基的钩体抗原比较。结果证明:(1)钩体抗原的组成是非常复杂的,SDS-PAGE可显示20多条抗原带;(2)两种培养基所培养的钩体,未发现抗原性变异。说明钩体在复方明肢培养基中长期传代培养过程中,其抗原组成是相对稳定的。这对进一步探讨钩体长期在综合培养基中培养以后的抗原稳定性,具有一定的理论及实际意义。     

11种灭活型样本保存液对病毒核酸保护效果的比较

收集11种不同厂家的灭活型样本保存液,将甲型流感病毒加入保存液和生理盐水中,在4℃、25℃和37℃条件下保存0 h、2 h、4 h、6 h和24 h后,分别提取各组的病毒核酸,并通过逆转录实时荧光PCR检测病毒载量变化,以探究不同样本保存液对病毒核酸保护效果是否存在差异。结果发现不同样本保存液中的病毒载量随保存时间和温度变化存在显著差异。据此可将11种灭活型样本保存液的保存效果分为四类：(1)优秀产品：在任一温度（4℃、25℃、37℃）条件下,即使保存24h时病毒核酸都未发生明显降解,占比27.2%(3/11);(2)良好产品：低温（4℃）和室温（25℃）情况下核酸未出现降解,但在高温（37℃）条件下6 h后保存效果明显下降,占比27.2%(3/11);(3)合格产品：低温（4℃）条件下对病毒核酸具有较好的保护效果,但在室温（25℃）和高温（37℃）情况下随保存时间延长其保护效果显著下降,占比18.1%(2/11);(4)不合格产品：任一保存条件下对病毒核酸的保护效果都较差,甚至加入病毒后立即导致病毒核酸发生快速降解,占比27.2%(3/11)。以上结果说明不同厂家样本保存液对病毒核酸...     

空肠弯曲菌的保存方法研究

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)目前已被确认是重要的肠道致病菌之一。由于本菌生活力弱,易于死亡,不好保存,在一般常用的培养基上存活时间极短约3—5天,给实际工作造成不少困难,如何保存菌种是一个急待解决的问题。为了提供一种较好的保存空肠弯曲菌的方法,作者选用了五种培养基,比较观察了18株空肠弯曲菌保存在不同条件下的存话期及变异情况,其结果表明：用1、2号培养基的培养物保存若放置4一10℃冰箱,前者经130天,后者经80天其存活率均为100％;在保存210天时,两种培养基的     

31例心脏移植的体外循环转流及供心保护经验

目的：报道连续31例心脏移植的体外循环转流经验及供心保护经验。其中扩张性心肌病29例,缺血性心肌病1例,复杂性先天性心脏病1例。方法：体外循环采用中度低温、轻度血液稀释法。供心保护方法为10例采用晶体保存液,21例采用UW液。结果：31例手术脱离体外循环顺利,无手术死亡。结论：良好的供心保护,监测各重要生理指标,使灌注充分合理是成功顺利脱离体外循环的关键。     

不同保存液和保存期限下肠道微生物组的变化

肠道菌群与人体健康的关系密切,通过检测肠道菌群可以获得有关健康的信息。新鲜粪便不易获得,很难做到快速低温冷冻,在进行标准化和大规模人群采样时,可用于常温条件下采集和保存样本的保存液可以弥补采集样本数量多、地域分布广、现场采样条件多样、工作量大、运输条件差等条件不足。本研究招募了5名健康志愿者,采集他们的粪便样本后,通过对比不同市售微生物样本采集常温保存液对新鲜粪便样本的影响,评估了各类保存液的保存效果。在室温下把粪便放置于5种保存液,在第0、1、3、7、15、30天提取元基因组DNA,进行16S rRNA V3–V4区高通量测序,来分析不同保存液,在不同时间段对肠道菌群组成的影响。结果显示,不同保存液对肠道菌群的影响存在差异,与对照组相比,不同保存液对样本中的OUT数量影响不大;保存液A、B和C在菌群构成上更接近对照组,保存液D会明显改变肠道菌群组成,使放线菌门 (Actinobacteria) 和厚壁菌门 (Firmicutes) 增加;随着时间延长,各类保存液都有降低菌群多样性趋势,保存液E降低菌群多样性更明显;第30天时,5种保存液都会改变肠道菌群构成;肠道菌群组成存在个体差异,是影响各样本相似性的主要因素,来自不同志愿者的粪便样本,无论何种保存液和保存时间,彼此之间更接近。不同保存液对革兰氏阳性杆菌、革兰氏阳性球菌和革兰氏阴性菌的含量存在不同影响,保存液C、E会降低双歧杆菌 (Bifidobacterium) 丰度,而保存液D则相对升高;除保存液E相对降低乳酸杆菌 (Lactobacillus) 丰度之外,保存液A、B、C、D与对照都相当。各类保存液对链球菌 (Streptococcus) 的影响,除保存液D差异较大之外,保存液C与对照组最接近;保存液D比对照组降低瘤胃球菌科UCG 003 (Ruminococcaceae UCG 003),其他各类保存液与对照组差异不大;不同保存液都比对照组增加大肠-志贺氏杆菌 (Escherichia-Shigella) 丰度,保存液A、B会增加克雷伯氏菌 (Klebsiella) 丰度,而保存液C、D和E与对照组相当。整体来看,保存液C在稳定肠道菌群的组成上表现较好。文中通过对比国内外常用保存液在不同时间点对肠道菌群的影响,为进行大规模微生物样本采集、保存提供了参考,也为标准化的微生物组项目提供了可参考的数据。后续的研究可在此基础上选择针对性的保存液和保存时间。     

几种虫生真菌菌株的培养性状及其对褐飞虱的毒力

从褐飞虱Nilaparvata lugens (St(a)l)罹病虫体上新分离出的一种黄绿绿僵菌菌株Metarhizium flavoviride (Mf82),与实验室保存的黄绿绿僵菌、金龟于绿僵菌和白僵菌3种菌种5个菌株作为对比,研究了在SDAY和PDA培养基上的培养性状,并测定了它们对褐飞虱成虫的毒力.结果表明:...     

人母乳中分离的链球菌菌悬液的制备及其对新生小鼠成活率的影响

为研究出生至4周龄每天口服107CFU母乳链球菌对新生小鼠的影响,需要制备在-80℃冻存4周、解冻后仍有至少1á×109 CFU/mL活菌的菌悬液.前期分离到人母乳链球菌Streptococus salivarius F286和S.parasanguinis F278.S.salivarius F286和 S.parasanguinis F278在 M17液体培养基厌氧生长至平台期时,活菌浓度高于1×109CFU/mL,分别用M17、M17+10％脱脂牛乳、磷酸盐缓冲溶液(PBS)、PBS+10％脱脂牛乳将平台期的 S.salivarius F286和 S.parasanguinis F278制成不浓缩或5倍浓缩的菌悬液,-80℃冻存4周后,只有PBS+10％脱脂牛乳制备的5倍浓缩的S.salivarius F286菌悬液和M17制备的S.parasanguinis F278菌悬液解冻后活菌数量始终高于1×109 CFU/mL.因为化学成分复杂的M17培养基可能影响动物的代谢和免疫,因此用含有PBS、10％脱脂牛乳和链球菌的菌悬液口饲动物.仔鼠出生后1～14 d,每天口饲解冻的、含有107CFUS.salivariusF286的PBS+10％脱脂牛乳菌悬液,或者新鲜制备的、含有107 CFU S.parasanguinis F278的PBS菌悬液以及等体积20％脱脂牛乳,仔鼠成活率约为83％(其余仔鼠死于母鼠拒绝喂养),说明107 CFU的S.salivarius F286或S.parasanguinis F278不会引起仔鼠感染死亡.本研究中,我们比较不同方法制备的菌悬液在-80℃冻存后细菌的存活量,确定最优的菌悬液制备方法,并评估细菌对仔鼠成活率的影响,确定了两株母乳链球菌的生物安全性,本实验流程对制备和保存用于灌胃/口饲动物的其他种类细菌的菌悬液具有借鉴意义.     

用于抗酸菌培养的痰标本室温保存方法的研究

在痰标本中加入适量的基础保存液,作为在室温下保存痰标本的方法。实验结果表明,基础保存液对抗酸菌H₃₇Rv株及草分枝杆菌株无抑制作用,但对变形杆菌等痰标本抗酸菌培养中常见的杂菌具杀灭作用。219例临床痰标本的实验结果显示:痰标本用此法处理在室温中保存28天,其阳性检出率不受影响,与未经任何处理的在同样室温中保存的痰标本相比两者具有极显著性差异(p<0.01).本方法可使痰标本在室温中保存21天,以保存14天以内为佳。     

天花粉对钩端螺旋体生长的促进作用

为了提高钩端螺旋体(以下简称钩体)的检出率,我们从多种中药中筛选出对钩体有促进生长作用的天花粉。实验结果如下: 各型钩体在添加0.1％天花粉柯索夫培养基的生长情况:将添加0.1％天花粉的柯索夫培养基与常规使用的柯索夫培养基各1ml,接种1/1000稀释度钩体培养物0.1ml,混匀,置28℃温箱培养。从第3天到第7天,每天用3mm直径接种环挑取培养物一环,置载玻片上,用暗视野     

延长鞭毛染色液使用时间的研究

介绍一种保存细菌鞭毛染色液的简便方法。采用低温、隔绝空气、避光的手段,可以比较稳定地保存鞭毛染色液,适当延长其使用时间。     

蛇鮈精子保存液的筛选及其效果研究

旨在研究不同精子保存液对蛇鮈精子活率的影响,并探讨保存蛇鮈精子的最佳保存液。在光镜下观察6种精子保存液保存蛇鮈精子后精子活率的变化,结果表明精子保存液在低温(4℃)保存蛇鮈精子的方法效果较好。6种蛇鮈精子保存液使精子的活率保持为80%的时间有着明显的差异:A液为36 h,B液为4 h,C液为0 h,D液为60h,E液为16 h,F液为6 h,因此在低温(4℃)下,蛇鮈精子的最佳保存液为D液。     

菊花水煎液对长双歧杆菌促生长作用的探讨

目的研究菊花水煎液促进长双歧杆菌的体外增殖与活性的作用,初步探讨它作为一种双歧因子的条件。方法以菌液A600值、pH、活菌计数及发酵牛乳的凝乳时间、pH、滴定酸度等为指标,研究菊花水煎液对长双歧杆菌生长的影响,并用K—B琼脂法初步研究菊花水煎液对几种常见肠道菌群的抑／促菌作用。结果在5％添加菊花水煎液的培养基中长双歧杆菌的菌体浓度（A600值及活菌计数）均明显高于空白对照,菌液pH也均低于空白对照;长双歧杆菌发酵含有菊花水煎液的牛奶后,凝乳时间缩短,乳液的滴定酸度高于空白对照,pH也相应降低。菊花水煎液对几种常见肠道致病菌有较强的抑菌作用。结论菊花水煎液能促进长双歧杆菌的体外增殖与活性,且具有一定的选择性;菊花有可能成为一种良好的双歧因子或益生元制剂的候选物质。     

结核分枝杆菌在自制培养基上快速生长初步观察

观察结核分枝杆菌标准株在5种自制培养基上的生长时间及最佳实验条件。将改良罗氏基的成分及传统的实验条件进行改进自制5种培养基,观察结核分枝杆菌标准株生长情况。并以第5号培养基3种成分不同浓度,做正交叉实验。结核分枝杆菌标准株在5种自制培养基上,菌落开始生长天数及典型菌落出现天数均比改良罗氏培养基短,两者差异均具有显著性(P<0.01)。第5号培养基以25%牛肉浸液,20%当归煎液,20%党参煎液的浓度最佳,结核分枝杆菌接种后第3~5 d开始生长,第7~9 d出现典型的“菜花状”菌落。结核分枝杆菌标准株在自制第5号培养基上生长快,培养时间短,为该菌培养提供了一种新的快速培养基,值得进一步研究。     

蜜环菌分纯及深层液体培养条件初探

（Ａｒｍｉｌｌｅｒｉｅｌｌａ ｍｅｌｌｅａ）是一种有名的药用覃菌,对人类大有裨益。笔者对从云南采集的蜜环菌Ｓｈ－１４进行分离纯化,并对蜜环菌固体培养的营养、温度、水份等进行了研究。同时对蜜环菌深层液培养的一级种子及发酵培养基对蜜环菌菌丝体生长影响作了探讨。通过实验获得最佳一级种子培养基及发酵培养基。     

不同固定液及保存温度、时间对小鼠组织DNA的影响

比较10％甲醛、95％乙醇、Saccomanno3种固定液及不同保存温度、保存时间对小鼠肝、肺组织DNA的影响。取材后将标本分为无固定液组、甲醛组、乙醇组和Saccomanno组,不同温度保存至一定时间后提取DNA进行比较。结果无固定液时,保存3d后,室温且与低温组差别不大。甲醛固定时,对不同保存温度、时间、不同组织的DNA影响不同。乙醇、Saccomanno法室温放置1个月后DNA仍保存良好。短时间室温保存对DNA影响不大。10％甲醛使DNA降解,95％乙醇、Saccomanno法固定则可以保护DNA的完整性。     

肺炎球菌生长培养基和菌种保存方法的研究

肺炎球菌一般在含血液培养基上才能生长。本文对适合肺炎球菌生长的国外无血液半合成培养基“C+Y”进行改良和借鉴,研制出一种BYGP-glu代用培养基,其组分简单,操作方便,便于推广使用。肺炎球菌存在自溶酶,不易长期保存。本文还试验了在不同低温条件下,几种保护和保存菌种的效果。结果证明40%甘油在-20℃保存效果较好,可使肺炎球菌存活3个月以上。该法适于实验室保存和使用。     

问号钩端螺旋体中一个新的OmpA家族蛋白抗原性及保守性研究

目的克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体(L.interrogans)黄疸出血群赖型赖株中一个新的外膜蛋白(Omp)A家族基因LA0301,研究LA0301编码蛋白的抗原性和在15个钩端螺旋体(简称钩体)血清群代表株中的保守性,探讨其在疫苗研究中的意义。方法生物信息学软件分析预测LA0301的特征。构建原核表达重组体pQE31-LA0301,经IPTG诱导后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹检测其免疫反应性和在不同血清型钩体中的保守性。酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹检测兔抗钩体全菌血清中的LA0301编码蛋白的抗体。结果生物信息学预测结果显示,LA0301具有OmpA家族的结构域。克隆表达了重组质粒pQE31-LA0301,重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体,效价为1:32000。在兔抗钩体全菌血清中检测到特异的LA0301蛋白抗体,并在15个血清群的代表株钩体中均可检测到LA0301蛋白。结论LA0301蛋白是问号钩体中一个新的OmpA家族蛋白,具有良好的抗原性和保守性,并且能在钩体感染的过程中刺激机体产生相应的抗体。为进一步研究钩体新型疫苗候选基因奠定了基础。     

生姜脱菌快繁研究进展

生姜是重要的经济作物,可用作香料、药物和调味品,它主要通过地下根状茎繁殖。自1977年生姜脱菌组培获得成功以来,在外植体的选择、培养基和培养条件等脱菌快繁技术上都有较大改进,培养效率明显提高,平均每个芽可增殖7.7个芽,移栽成活率高达95%以上。就生姜脱菌快繁技术的发展及其应用前景,诸如创造遗传变异、离体种质保存、脱菌种子包衣和离体小块茎生产等作了综述。     

迟钝爱德华氏菌的保存方法

比较了7种不同方法保存迟钝爱德华氏菌的效果。测定存活力、毒力和生物学特性的结果表明,采用30％甘油PBS液保存该菌的效果较好。     

谈昆虫浸渍液标本的改进

经过多年的探索与研究,在原有的标本制作方法上,通过改进发明一种新昆虫浸渍液标本的保存方法．其试用效果十分理想。弥补了过去2种传统模式方法保存标本的一些不足。本标本的制作方法值得运用推广。