水母雪莲的幼根培养及植株再生

1　植物名称　水母雪莲 (Ｓａｕｓｓｕｒｅａｍｅｄｕｓａ) ,藏药中称为恰羔素巴。2　材料类别　无菌苗的根。3　培养条件　诱导愈伤组织培养基以ＭＳ、Ｃ1 7或Ｗ 1 4为基本培养基 ,附加 2 ,4 Ｄ 1～ 2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) 肌醇 2 0 0 蔗糖 3% 琼脂 0 .5%。继代培养基为ＭＳ 2 ,4 Ｄ 1 肌醇 2 0 0 ＣＨ 30 0 蔗糖 3%～ 5% 琼脂 0 .5%。分化培养基配方为 1 /2ＭＳ ＫＴ 1 ＣＨ 30 0 肌醇 2 0 0 蔗糖 3% 琼脂0 .5% ,再附加 ( 1 )ＮＡＡ 0 .5 6 ＢＡ 1或 ( 2 )ＮＡＡ1 6 ＢＡ 2。所用培养基的 ｐＨ均调为 5.8。培养温度为…     

水母雪莲体细胞胚胎发生及其植株再生

水母雪莲（Saussurea medusa Maxim.)茎和叶片的切段接种于MS＋2mg/L NAA 0.5mmg/L 6-BA的培养基上,20d后产生黄褐色的愈伤组织,经过几个月的继代培养,愈伤组织仍保持旺盛的增殖能力,但部分由黄褐色逐渐变为红色,将红色愈伤组织转到MS＋0．1mg/L NAA＋0．2mg/L 6-BA 5mg/L GA3的培养基上,30d后可分化出大量的体细胞胚,体细胞胚成熟后转到1／2MS＋0．2mg/L IAA 0.5%活性炭的培养基上,30d后可长出2－4cm的根,带根的小苗经锻炼后移栽到土壤中,成活率达76％,细胞组织学观察表明,发育成熟的体细胞胚具有胚根,胚轴和胚芽的完整结构,具有独立的维管系统。     

分光光度法测定水母雪莲细胞培养物中的总黄酮

建立了测定水母雪莲细胞培养物中的总黄酮含量的分光光度法,该法操作简便,结果准确可靠。     

水母雪莲细胞悬浮培养合成黄酮及抗氧化活性

对水母雪莲细胞悬浮培养过程中细胞生长、黄酮积累和底物消耗的动力学过程进行了研究.经15 d液体培养可获得最大生物量干重和黄酮产量分别为17.2 g·L-1和607.8 mg·L-1,通过调控基本培养基种类和有机添加物可提高雪莲细胞的生长和黄酮积累.获得的水母雪莲细胞培养物具有明显的抗氧化活性,其抗氧化活性与雪莲细胞中的黄酮含量相关.     

水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮类活生成分合成

在ＭＳ培养基上进行水母雪莲细胞悬浮培养,研究了摇床转速、接种量、培养液初始ｐＨ、碳源等的影响。结果表明,摇床转速为９０￣１２０ｒ／ｍｉｎ,接种量为５０￣８０ｇＦＷ／Ｌ,培养液初始ｐＨ５．５￣６．０,对水母雪莲悬浮培养细胞生长和黄酮合成最有利。碳源以蔗糖最适合,蔗糖浓度则以４０ｇ／Ｌ较好,此时细胞生长量为１８￣１９ｇＤＷ／Ｌ,总黄酮合成量可达１４２３．２５ｍｇ／Ｌ。用ＨＰＬＣ检测显示４＇,５,７－三     

水母雪莲愈伤组织培养和黄酮类化合物的形成

８种基本培养基对水母雪莲（Ｓａｕｓｓｕｒｅａ ｍｅｄｕｓａ Ｍａｘｉｍ）愈伤组织生长和黄酮类形成影响不同,ＭＳ培养基较有利于愈伤组织生长和黄酮类形成。碳源、氮源、植物激素对愈伤组织生长和黄酮类形成影响较为显著。从ＭＳ培养基修饰得到的Ｍ－１３培养基培养的愈伤组织生长量和黄酮类产量比原培养基分别提高３３％和８２％,达到２１．００ｇＤＷ／Ｌ和１．８９ｇ／Ｌ。通过ＴＬＣ和ＨＰＬＣ初步分析和鉴定,证明Ｍ－１     

水母雪莲愈伤组织cDNA文库的构建

用TRIZOL Reagent提取水母雪莲红色系1～15d愈伤组织总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库.经测定原始文库滴度达到1.5～4×106,扩增总文库滴度达到1011,重组率达到98%,插入片段在0.5kb到3kb之间,多在1kb左右.通过PCR检测,从总文库中检测到了雪莲CHS、DFR及SmP基因的特异片段.SmP基因是转录调控因子,其表达丰度很低.各项指标都表明,已获得高质量的cDNA文库,为雪莲基因资源保存,雪莲类黄酮次生代谢分子调控奠定了坚实的基础.     

水母雪莲愈伤组织cDNA文库的构建

用TRIZOL Reagent提取水母雪莲红色系1~15 d愈伤组织总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库。经测定原始文库滴度达到1.5~4×106,扩增总文库滴度达到1011,重组率达到98%,插入片段在0.5 kb到3 kb之间,多在1 kb左右。通过PCR检测,从总文库中检测到了雪莲CHS、DFR及SmP基因的特异片段。SmP基因是转录调控因子,其表达丰度很低。各项指标都表明,已获得高质量的cDNA文库,为雪莲基因资源保存,雪莲类黄酮次生代谢分子调控奠定了坚实的基础。     

水母雪莲细胞培养物调血脂作用的初步研究

为研究水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠的调血脂作用,将雄性SD大鼠分为4组：正常对照组(A组)、高脂模型组(B组)、高剂量组(C组)和低剂量组(D组)。A组喂基础饲料,B组喂高脂饲料,C组喂高脂饲料的同时饲以大剂量水母雪莲细胞培养物,D组喂高脂饲料的同时饲以小剂量水母雪莲细胞培养物。给药1/d,3周后采血,测定血脂水平及肝肾功能。C组较B组各项血脂指标均有改善,各组间肝肾功能未见显性差异。初步研究表明,水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠具有调血脂的作用。本实验用药剂量安全。     

光质、光强和光期对水母雪莲愈伤组织生长和黄酮生物合成的影响

白光、蓝光、红光和远红光等不同光质照射及不同的白光强度对水母雪莲愈伤组织生长、苯丙氨酸氨基裂解酶（ＰＡＬ） 活性及黄酮合成有不同的影响。红光明显促进愈伤组织的生长,但强烈抑制ＰＡＬ活性和黄酮的合成。蓝光对愈伤组织生长无明显影响,但显著提高ＰＡＬ 活性和黄酮的合成。白光的作用介于红光和蓝光之间。远红光的作用与蓝光相似,但作用比较弱。每天１６ ｈ 蓝光加８ ｈ 白光和８ ｈ 蓝光加１６ ｈ 白光的组合产生最高的黄酮含量和黄酮生产率。     

不同理化因子对雪莲毛状根生长和总黄酮生物合成的影响

在 1 2MS液体培养基上研究了不同理化因子对水母雪莲毛状根生长和总黄酮生物合成的影响。实验结果表明 :氮源总浓度 (包括NH+4和NO-3)为 30mmol L ;NH⁺₄ NO^-₃比例为 5∶2 5 ;2 %蔗糖和 3%葡萄糖组合 ;0.5mg LGA₃和 0.5mg LIBA ;pH5.8;18h d的光照 (光强为 35.0.0lx) ;2.4℃ ;摇床转速为 100rmin有利于毛状根生长及总黄酮的生物合成。在此培养条件下 ,经过21d的培养毛状根生长量达到 12.8g L(DW) ,总黄酮合成量为 192.2mg L ,即总黄酮含量占毛状根干重的 15 % ,约为干重野生水母雪莲植株总黄酮含量的 2.5倍。     

光照对水母雪莲愈伤组织合成生物碱的影响

以水母雪莲（Saussurea medusa Maxin.)无菌幼苗的根作外植体,诱导获得的愈伤组织为材料,研究光照对生物碱合成的影响。结果表明：尽管在水母雪莲的愈伤组织培养物中,总生物碱的含量比原植株中的含量低,但其组成成分比原植物丰富。并且秋水仙碱的含量也比原植物高,尤其是在光照培养的愈伤组织中秋水仙碱大大增加。     

培养基及其组成对水母雪莲悬浮培养细胞生长及黄酮形成的影响

8种不同的基本培养基对水母雪莲(Saussurea medusa)细胞生长和黄酮形成的影响不同。实验结果表明,MS培养基较有利于细胞生长和黄酮形成。从MS培养基修饰得到的MG和MP培养基比前者细胞生长量与黄酮产量分别提高32%和70%。碳源、氮源、植物激素对细胞生长及黄酮形成的影响较为明显。用HPLC对细胞培养物中两种有效黄酮(Jaceosidin和Hispidulin)作了定性定量分析。     

不同理化因子对雪莲培养细胞中黄酮类形成的影响

研究了不同理化因子对水母雪莲(Saussurea medusa Maxim)愈伤组织生长及黄酮类化合物生物合成的影响。结果表明,有利于细胞生长及黄酮形成的合适温度为25℃。白光对愈伤组织生长无促进作用,但有利于黄酮的形成。培养基中添加1mg／L NAA和O．2mg／L的KT组合对细胞的生长较有促进作用。5％蔗糖和1％葡萄糖的组合有利于细胞的生长和黄酮的形成。用⁶⁰C0-γ射线辐照愈伤组织,在剂量为4000Gy的条件下,获得一个合成黄酮能力高于原愈伤组织70％的细胞系。用高效液相和紫外分光光度法,测定离体培养光照条件下干细胞总黄酮的含量为3．2％,是暗培养的4．4倍。培养温度25℃时干细胞黄酮的含量为2．02％,分别为20℃,35℃时的5倍和3．2倍。     

钙、磷、镁和钾对雪莲细胞悬浮培养的影响

考察了钙、磷、镁和钾等大量营养元素对雪莲细胞TUIP-8悬浮培养的影响,确定了培养雪莲细胞的钙、磷、镁、钾的最佳浓度范围。低于以上4种大量营养元素的最适浓度范围,TUIP-8细胞的生长和黄酮合成都将明显受到抑制。该细胞对Ca^2 和Mg^2 具有较好的浓度耐受性,而对PO4^3-和K^ 的耐受性较差。