蝶兰胚珠的cDNA文库构建及其特异基因表达的研究

以蝶兰（Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ＂Ｍｔ．Ｋａａｌａ”ｃｖＳＭ９１０８）为材料,分别提取大孢子母细胞时期胚珠和成熟胚珠的ＰｏｌｙＡＲＮＡ,反转录成ｃＤＮＡ,构建起两个ｃＤＮＡ文库。克隆筛选采用差异杂交法。从上述两个ｃＤＮＡ,对其在植物体不同器官和不同发育时期的胚珠内的表达进行了分析。结果表明该两个ｃＤＮＡ均为胚珠特异,并且分别在胚珠发育的特定时期表明。推测该两个ｃＤＮＡ的表达受胚珠内部的不同因子调控     

蓝藻OscilatoriaceaerDNA16S-23S基因间隔区的序列分析及其分类学意义

采用末端终止法对蓝藻类颤藻科Ｏｓｃｉｌａｔｏｒｉａｓｐ．ｒＤＮＡ１６Ｓ－２３Ｓ基因间隔区进行了序列测定,获得了Ｏｓｃｉｌａｔｏｒｉａｓｐ．ｒＤＮＡ基因间隔区４２７个核苷酸,其中包含１个异亮氨酸ｔＲＮＡ基因（ｔＲＮＡＩｌｅ）。并通过计算机联网从国际分子生物学数据弹库中获取颤藻科其它种的ｒＤＮＡ基因间隔区序列,通过比较分析,从分子水平对颤藻科Ｏｓｃｉｌａｔｏｒｉａｃｅａｅ属间的某些分类学问题进行了讨论,并根据序列中核苷酸差异值探讨了颤藻科属间界定的分子标准。提出了ｒＤＮＡ基因间隔区是良好的分子标记,可用于“赤潮”或“水华”蓝藻专一性核酸分子探针的研制     

玉米苹果酸脱氢酶基因的分离与结构分析

以一个玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）杂种一代超亲表达的ｃＤＮＡ片段为探针,从玉米幼苗期ｃＤＮＡ文库中筛选到一个全长１２８７ｂｐ的ｃＤＮＡ克隆。序列分析表明,该ｃＤＮＡ编码细胞质苹果酸脱氢酶,推导的氨基酸序列与龙须海棠（Ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍ　ｃｒｙｓｔａｌｌｉｕｍ　Ｌ．）及拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）同一编码基因的氨基酸序列同源性分别为９０％和８４％。这是禾谷类作物中首次克隆的编码细胞质苹果酸脱氢酶的完整基因。     

蓝藻Oscillatoriaceae rDNA16S—23S基因间隔区的序列分析及其分 …

采用末端终止法对蓝藻类颤藻科Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ ｓｐ．ｒＤＮＡ １６Ｓ－２３Ｓ基因间隔区进行了序列测定,获得了Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ ｓｐ．ｒＤＮＡ基因间隔区４２７个核苷酸,其中包含１个异亮氨酸ｔＲＮＡ基因。并通过计算机联网从国际分子生物学数据弹库中获取颤藻科其它种的ｒＤＮＡ基因间隔区序列,通过比较分析,从分子水平对颤藻科Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａｃｅａｅ属间的某些分类学问题进行了讨论,并根     

大肠杆菌SLT—IIvB基因的克隆和表达

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从大肠杆菌Ｏ１３８基因组ＤＮＡ中分别扩增出志贺菌样毒素ＩＩ型变体Ｂ的结构序列和包括信号肽的全序列两段基因,定向克隆进表达载体质粒ｐＹＡ３３３４（ａｓｄ＾＋）的ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点之间,构建成重组表达质粒。在大肠杆菌Ｘ６２１２（△ａｓｄ）筛选出重组质粒ｐＢ０和ｐＢ１后,经中间宿主Ｘ３７３０转化过渡,再导入△ａｓｄ△ｃｙａ△ｃｒｐ减毒鼠伤寒沙门氏菌Ｘ４５５０,构建成     

水稻D1snoRNA及其基因的鉴定和功能分析

测定和比较了籼稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）、粳稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）和多年生野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＷ．Ｇｒｉｆｉｔｈ）ｈｓｐ７０基因第一个内含子中Ｄ１ＤＮＡ以及部分上游序列,并通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ｃＤＮＡ序列分析对Ｄ１ＤＮＡ编码的Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ进行了实验鉴定。Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,它与水稻２５ＳｒＲＮＡ互补序列为１４个核苷酸长。根据理论计算,Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ具有指导水稻２５ＳｒＲＮＡ中第８０７位的核糖甲基化功能。Ｄ１ＤＮＡ与Ｃ１ＤＮＡ相隔仅１０５个核苷酸,在内含子中如此短的距离内连续编码两种ｓｎｏＲＮＡ是罕见的,这一结构为研究串联结构的ｓｎｏＲＮＡ转录后加工机制提供了一个良好的研究体系。     

棉花法呢基焦磷酸合酶cDNA克隆、序列分析及其在种子发育过程中的表达特征

根据法呢基焦磷酸合酶（ＦＰＳ）保守域设计简并引物,应用ＮｅｓｔＰＣＲ和ＰＣＲ９６孔板筛库技术分离到亚洲棉（ＧｏｓｙｐｉｕｍａｒｂｏｒｅｕｍＬ．）法呢基焦磷酸合成酶的ｃＤＮＡ。序列分析表明,该ｃＤＮＡ全长１２８０ｂｐ,开放阅读框共编码３４２个氨基酸残基,推断蛋白质分子量约为３９ｋＤ,推测的氨基酸顺序与拟南芥和青蒿的ＦＰＰ合酶序列同源性为７８９％和８０７％。应用ＲＴＰＣＲ定量分析ｆｐｓ１基因在“苏棉６号”（Ｇ．ｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．ｃｖ．“Ｓｕｍｉａｎ６”）种子发育过程中的表达特征,发现从胚珠开始形成种子（开花后２０ｄ）至种子成熟（开花后４０ｄ）,ｆｐｓ１ｍＲＮＡ转录水平发生明显变化。在种子发育早期,开花后２０ｄ至２７ｄｆｐｓ１基因保持相对稳定的表达水平;但从开花后２７ｄ到种子成熟,ｆｐｓ１ｍＲＮＡ的转录水平迅速增高,此期倍半萜棉毒素在种子中的积累亦呈明显的增长趋势,完全风干成熟的种子中倍半萜棉毒素的含量可达１３ｍｇ／ｇ。推测ｆｐｓ１基因在转录水平参与种子中倍半萜类物质合成的调控。     

热休克后表达受抑基因的分子克隆及其表达特性

以人成骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３为热休克模型,在利用ＤＤｍＲＮＡ方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的ｃＤＮＡ片段的基础上,以该片段为探针,筛选ＨＯＳ－８６０３细胞的ｃＤＮＡ文库,获得该基因的全长ｃＤＮＡ克隆（ＨＳＳＧ－１）;ＤＮＡ序列测定表明该ｃＤＮＡ全长１４５６ｂｐ,编码２７６个氨基酸,经计算机辅助分析,该ｃＤＮＡ序列尚未被报道。经ＲＮＡ斑点杂交证实,该基因的表达于多种组织细胞之中,并且     

蝮蛇毒碱性磷酯酶A2基因的克隆

从蝮蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ。利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以ｃＤＮＡ为模板进行体外扩增,获得磷脂酶Ａ２基因。克隆至ｐＢＳ－ｋｓ载体中。通过对３个碱性ＰＬＡ２基因单克隆分别作ＤＮＡ作全序列分析,推ｐｒｏ－ＢＰＬＡ２由１３８个氨基酸残琪构成,已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。     

水稻脂质转移蛋白基因的分离和分析

用水稻脂质转移蛋白（ｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＴＰ）的ｃＤＮＡ（ｐＦＤＲＳＣ１１０）为探针,从水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）“广陆矮４号”基因文库中筛选出ＬＴＰ基因,完成了１．８ｋｂ长片段的序列测定。该基因编码一个１２１个氨基酸组成的肽,编码区中间有一个９０ｂｐ的内含子,基因的调控区除有２个ＴＡＴＡｂｏｘ和ｐｏｌｙＡ加工信号外,还存在多个回文序列和逆向重复序列。该基因编码的蛋白质Ｎ端是由２８个氨基酸组成的信号肽,同源性比较表明它具有典型的植物ＬＴＰ特征。     

辣椒疫霉产毒共分离RAPD标记的研究*

辣椒疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃｏｐｓｉｃｉ）毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过ＲＡＰＤ／ＢＳＡ分析证明,用ＯＰＷ１２扩增得到一条约１３００ｂｐ的ＲＡＰＤ标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收ＯＰＷ１２　１３００ＤＮＡ,共转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉ　ＤＨ５ａ,筛选出３个白色阳性克隆,序列分析发现该标记ＤＮＡ为１２９１ｂｐ。这一标记ＤＮＡ序列的阐明为进一分析产毒遗传机理提供了新的信息。     

辣椒疫霉产毒共分离RAPD标记的研究

辣椒疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃｏｐｓｉｃｉ）毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过ＲＡＰＤ／ＢＳＡ分析证明,用ＯＰＷ１２扩增得到一条约１３００ｂｐ的ＲＡＰＤ标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收ＯＰＷ１２　１３００ＤＮＡ,共转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉ　ＤＨ５ａ,筛选出３个白色阳性克隆,序列分析发现该标记ＤＮＡ为１２９１ｂｐ。这一标记ＤＮＡ序列的阐明为进一分析产毒遗传机理提供了新的信息。     

裂叶牵牛psah基因的克隆,序列分析及其表达研究

从裂叶牵牛（Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ ｎｉｌ Ｃｈｏｉｓｙ）子叶的ｃＤＮＡ文库中,分离了一个５２０ ｂｐ 的ｐｓａＨｃＤＮＡ 克隆,ＤＮＡ序列分析表明其开放阅读框架由１４４ 个氨基酸构成,包括４９ 个氨基酸长的转运肽和９５ 个氨基酸长的成熟ＰＳⅠＨ（ｓｕｂｕｎｉｔ Ｈｏｆｐｈｏｔｏｓｙｓｔｅｍ Ⅰ）。利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交技术,发现在高等植物中ｐｓａＨ 基因的表达明显地受内生昼夜节奏的调控,在幼苗阶段呈现出组织特异性,并证明光是迅速启动ＰＮｐｓａＨ基因高水平表达的重要因子     

辣椒疫霉产毒共分离RAPD标记的研究

辣椒疫毒（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过ＲＡＰＤ／ＢＳＡ分析证明,用ＯＰＷ１２扩增得到一条约１３００ｂｐ的ＲＡＰＤ标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收ＯＰＷ１２１３００ＤＮＡ,共转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α,筛选出３个白色阳性克隆,序列分析发现该标记ＤＮＡ为１２９１ｂｐ。这一标记ＤＮＡ序列的阐明为进一步分析产毒遗传机理提供了新的信息     

水稻乙醛脱氢酶基因的克隆及其在不育系中的表达

从水稻中分离了乙醛脱氢酶基因（Ｏｓａｌｄｈ）的全长ｃＤＮＡ,序列分析显示Ｏｓａｌｄｈ ｃＤＮＡ含有一个完整的编码５４９个氨基酸的开放阅读框,其编码蛋白ＯＳＡＬＤＨ的Ｎ端为预期的线粒体前导肽,中部具有醛类脱氢酶基因家族的酶催化活性中心,ＯＳＡＬＤＨ与玉米、烟草、人类的线粒体乙醛脱氢酶同源性分别高达８７％、７７％、５９％。Ｎｏｒｈｅｒｎ分析显示,幼根中Ｏｓａｌｄｈ的表达水平高于幼苗,幼穗,不育品种幼重     

甘薯叶片超氧化物歧化酶基因克隆及测序

以甘薯（Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ（Ｌ．）Ｐｏｉｒ）叶为材料提取植物总ＲＮＡ,经反转录后,利用多聚酶链式反应技术,扩增并克隆超氧化物歧化酶基因的ｃＤＮＡ,并进行测序分析。该序列全长４８２ｂｐ,其读码框编码１５２个氨基酸,与国外文献报道的甘薯块根ＳＯＤ基因的ｃＤＮＡ序列相比,具有９９％的同源性。     

马铃薯Patatin class—I启动子及信号肽基因的克隆和序列分析

为利用ｐａｔａｔｉｎ ｃｌａｓｓ－Ｉ启动子的块茎表达专一性以达到马苓薯的目的,利用ＰＣＲ技术从马铃薯总ＤＮＡ中扩增出Ｐａｔａｉｔｎ ｃｌａｓｓ－Ｉ启动子及信号肽基因,并将其克隆;序列分析发现该基因片段与已发表ｃＤＮＡ相应片段约９４％同源。     

青岛文昌鱼LIM类基因Bblim同源框区的内含子分析(英文)

ＬＩＭ类同源框基因（ｈｏｍｅｏｂｏｘｇｅｎｅ）保守性很强,在动物界广泛存在。各种ＬＩＭ类同源框基因的共同点是：在结构上,ＬＩＭ类同源框基因的编码蛋白都具有同源域和ＬＩＭ结构域;在生物学功能方面,都与早期发育中胚胎细胞谱系的决定和胚胎细胞分化有关。本实验提取青岛文昌鱼基因组ＤＮＡ,用一对简并引物对其ＬＩＭ类同源框基因Ｂｂｌｉｍ进行ＰＣＲ扩增,将所得ＤＮＡ片段克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫＳ（＋）质粒上,经测序发现,其同源框区比大多数ＬＩＭ类基因的同源框区要长得多,其上插入有一个长度为１３８ｂｐ的内含子（Ｆｉｇ．１）。这个内含子的序列中有真核生物核基因ｍＲＮＡ内含子的典型序列。并且与该基因ｃＤＮＡ克隆的测序结果相吻合。从而,可以确认该序列中这个内含子的存在。已知绝大多数ＬＩＭ类同源框基因的同源框区无内含子。因此,有必要对其作深入研究。     

蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2基因的克隆

从蝮蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ．利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以ｃＤＮＡ为模板进行体外扩增,获得磷脂酶Ａ２（简称ＰＬＡ２）基因,克隆至ｐＢＳ－ｋｓ载体中。通过对３个碱性ＰＬＡ２（简称ＢＰＬＡ２）基因单独克隆分别作ＤＮＡ全序列分析,推导ｐｒｏ－ＢＰＬＡ２由１３８个氨基酸残基构成,与已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。该基因成功的克隆,不仅推导出ＢＰＬＡ２的蛋白质全序列,也为进一步开展蛇毒功能肽蛋白质工程的研究工作打下了良好的基础。     

粘虫核型多角体病毒凋亡抑制基因的定位,序列和启动子结构

以ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５为探针,与ＬｓＮＰＶＤＮＡ的限制性片段和ＬｓＮＰＶＤＮＡＥｃｏＲＶ片段杂交,发现ＥｃｏＲＶ５．５ｋｂ片段有强烈的杂交信号。将此片段亚克隆后,测定了１２４４ｂｐ序列,发现一个完整的ＯＲＦ,推导的３０２个氨基酸与ＡｃＮＰＶｐ３５蛋白有７０．４％的氨基酸同源性,证明所测ＯＲＦ为ＬｓＮＰＶ的ｐ３５基因。结构分析发现其５′端有早期基因启动子元件ＧＣ、ＡＣＧＴ和ＴＡＴＡｂｏｘ。有２２ｂｐ的顺向重复序列,包括由两个重叠的ＴＡＴＡｂｏｘ和上下游两个ＡＣＧＴｍｏｔｉｆ组成的两套启动子元件,这些结构特征与ＡｃＮＰＶ的凋亡抑制基因十分相似。