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1.
青蒿转杜松烯合成酶基因发根系的培养 总被引:10,自引:2,他引:8
将已克隆的棉花杜松烯合成酶的cDNA(cadC14)插入到植物表达载体pBI121中,构建含CaMV35S启动子驱动下的杜松烯合成酶基因的植物表达载体pBIC14。用含pBIC14质粒的发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)15834感染青蒿(ArtemisiaannuaL.)叶片并诱导发根,共建立121个生长迅速的发根系。经浓度为20mg/L的Kan筛选,获得12个抗Kan阳性根系。PCR和Southernbloting分析表明,外源杜松烯合成酶基因已整合到青蒿基因组中,其转基因频率为3%。RTPCR分析表明,外源杜松烯合成酶基因在C37根系中,在转录水平上已有表达。 相似文献
2.
转甜菜碱醛脱氢酶基因豆瓣菜的耐盐性 总被引:33,自引:0,他引:33
将山菠菜甜苹碱醛脱氢酶(BADH)基因经根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens (Smith et Townsend)Conn)AGL1介导转入豆瓣菜(Nasturtium nofficinale R,Br.)PCR、Southerj bloting检测呈阳性的再生植株有46株,对6株再生植株的BADH活性和Northern bloting检测发现,有5株BADH酶活性明 相似文献
3.
转BmK IT4基因烟草的抗虫性 总被引:3,自引:0,他引:3
用酶切方法从「pBS-BmK IT4质粒中获得BmK IT4基因片段,并构建CaMV 35S启动子下的BmK IT4基因表达质粒pE3-BmK IT4,以根癌土壤杆菌(Agrobacterium trmefaciens(Smith et Townsend)Conn)介导的叶盘法转化云烟(Nico-tiana tabacum L.)K326叶片,获得45株抗卡那霉素的再生植株。用这些再生植株进行抗虫 相似文献
4.
黄瓜花叶病毒(CMV)运动蛋白基因介导的抗病性 总被引:4,自引:0,他引:4
利用Fny_CMV株系RNA3cDNA克隆,构建了含有全长和编码区缺失501个核苷酸的运动蛋白(MP)基因植物表达载体pBMPR和pBMPK。在土壤农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)LBA4404介导下转化烟草(NicotianatabacumL.)品种“NC89”,分别经Southernbloting、RT_PCR或Westernbloting分析,外源基因已整合到再生植株中并得到表达。抗病性分析表明,含有缺失型MP基因的R0代转基因植株抗性较好,接种50d后,10株转化植株中仍有5株不表现症状。在自然发病条件下,这5个含有缺失型MP基因转基因株系在R1代都表现了一定的抗病性。抗性主要表现为症状出现推迟,严重度减轻。利用PCR筛选、种子卡那霉素抗性试验和温室抗病性测定等方法,初步认为R2代转基因烟草K_6_5株系为转基因抗病纯合系。而含有全长MP基因的R0代转化植株,前期没有表现明显的抗病性,但在接种40d后部分发病植株有恢复健康的趋势。 相似文献
5.
根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植株的再生 总被引:37,自引:0,他引:37
用根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜(Brassi-ca napusL.)主要栽培品种“云北2 号”,获得转基因植株。所用外植体为带有1—2 m m 子叶柄的完整子叶,根癌农杆菌为A208SE(pTiT37-SE, pROA93)。Ti质粒pROA93 带有NPTⅡ及GUS嵌合基因。共培养2 天后转到附加25 m g/L卡那霉素的分化培养基(MS+ 4.5 m g/LBAP)上。AgNO3 和羧苄青霉素促进芽的分化,头孢霉素则有抑制作用。最高转化频率为27% 。把分化出的茎芽切下,插入含有25 m g/L卡那霉素的生根培养基中。羧苄青霉素不利于根的形成。把完整抗性植株移入盛土壤的盆中,生长状况良好。测定β-葡糖苷酸酶活性,84% 明显高于对照。以NPTⅡ基因作探针进行Southern blot分析,证实外源基因已插入到植物细胞基因组中 相似文献
6.
导入蜘蛛杀虫肽基因的烟草具有抗虫性 总被引:18,自引:0,他引:18
用带有杀虫肽基因的农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)LBA4404 转化烟草(Nicotiana tabacum )叶片,共获得30 株抗卡那霉素的再生植株. 用这些再生植株对棉铃虫(Heliothisarm igera)进行毒力测定,有3 株转杀虫肽基因植株对棉铃虫有较强抗性. 与对照相比,这3 株转基因烟草的杀虫率可达30%~45% ,并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育,表现出明显的抗虫作用. 以这3 株为主进行了PCR 扩增及Northern blot实验,结果表明杀虫肽基因已插入到这3 株植株的基因组中并表达出有活性的杀虫肽 相似文献
7.
Transgeni根癌农杆菌介导的小麦转基因植株再生(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ的Ti 质粒pUNN-2 带有Ubi1 启动子驱动的npt Ⅱ基因。7 种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同浓度巴龙霉素的筛选,3 种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株。再生植株经PCR 和Southern 杂交鉴定为转基因植株,转化频率( 再生转基因植株的小麦愈伤组织数/ 用于转化实验的愈伤组织数) 为3.7% ~5 .9% 。小麦基因型及转化材料的起始生理状态是影响TDNA转移的重要因素。 相似文献
8.
利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究 总被引:2,自引:2,他引:2
利用激光微束照射油菜子叶柄,将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白(Insecticidalcrystalprotein,ICP)基因导入油菜细胞中,经植株再生和卡那霉素筛选,获得了转基因植株。对转基因植株进行了PCR检测和饲虫实验,发现转基因植株为PCR扩增阳性,某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。 相似文献
9.
雪花莲外源凝集素基因转化番茄 总被引:20,自引:0,他引:20
将含有雪花莲外源凝集素基因(GNA)的质粒pRSSGNA1通过冻融法转化到根癌土壤杆菌9Agrobacterium tumefaciens(Smith et Townsend)Conn)菌株LBA4404中。采用叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)栽培品种“C8”、“A39”和“A53”,获得了含GNA基因的43株转化植物株。通过卡那霉素抗性鉴定、NPTⅡ基 相似文献
10.
抗芜菁花叶病毒转基因甘蓝型油菜的研究 总被引:31,自引:0,他引:31
以子叶柄为材料,建立了甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)双低品种的再生体系。通过子叶柄与农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensLBA4404)共培养,将表达载体pBTu中芜菁花叶病毒外壳蛋白(TuMV-CP)基因以整合方式导入甘蓝型油菜,然后用卡那霉素进行筛选,获得了油菜再生植株。经PCR特异性扩增、点杂交和Southern印迹分析,证明再生植株基因组DNA中整合了TuMV-CP基因。攻毒实验表明,有TuMV-CP基因插入的工程油菜对TuMV均有不同程度的抗性。 相似文献
11.
牛生长激素基因在马铃薯中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
将牛生长激素基因cDNA 与Patatin ClassI启动子及NOS3终止子连接,构建了表达载体pPBGT. 用直接法将表达载体转入农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) LBA4404(pRAL4404)菌株, 用此菌株转化马铃薯(Solanum tuberosum )得到再生植株. 经NPTⅡ活性检测,总DNA PCR和Southern blot证明目的基因已整合到马铃薯基因组中.RNA 点杂交和Western blot表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达 相似文献
12.
13.
植物表达载体pKC—3的构建及大分子DNA连接策略 总被引:5,自引:1,他引:5
以根癌农杆菌双元载体pCAMBLA1300为基础,先后连接含有马铃薯蛋白酶抑制剂-Ⅱ基因(PⅡ)、苏云金杆菌毒蛋白基因(B.t cryI(A))及雪花莲外源凝集素基因(GNA)的完整表达片段,构建了抗多种稻田害虫的表达载体pKC-3,将其导入根癌农杆菌LBA4404,可进一步用于水稻抗虫基因转化的研究。载体构建进程采用多次的大分子DNA片段连接,总结出了一套适合大片段连接转化的可行策略。 相似文献
14.
通过根癌农杆菌介导法获得菊花转基因植株 总被引:26,自引:0,他引:26
以带叶茎段为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将兔防御NP-1基因导入菊花品种“001”中。经梯度卡那霉素(kanamycin,Km)筛选,获得了大量Km抗性植株,其中部分Km抗性植株经Southern杂交鉴定为转基因植株。从而成功地建立了菊花遗传转化系统,为菊花分子育种奠定了基础。 相似文献
15.
利用PCR技术鉴别转化根癌农杆菌中外源和内源的GUS基因刘颖,金振华(中国科学院发育生物学研究所,北京100080)林忠平(中国科学院植物研究所,北京100044)利用GUS编码区引物,分别以取自根癌农杆菌LBA4404及整合GUS融合基因的Ti质粒为模板,通过PCR扩增并用琼脂糖凝胶电泳鉴定其产物。结果表明,两种模板的扩增物都含有对应于GUS编码区的1.8kb条带,证明农杆菌LBA4404本身含有GUS基因(内源),但是基因和GUS融合基因(外源)的GUS编码序列对BamHI作用的反应不同,据此可将二者区分开来。 相似文献
16.
通过PCR程序克隆拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)的干旱诱导性启动子Prd29A及来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)的海藻糖-6-磷酸合酶基因(TPS),并将它们组成可在植物中表达的载体RT。通过根癌土壤杆菌(Agroacterium tunefaciens(Smith et Townsend)Conn)LBA440 相似文献
17.
由RTS—barnase嵌合基因的表达导致的雄性不育水稻植株 总被引:5,自引:0,他引:5
用PC赍水稻品种IR36的总DNA中扩增了RTS基因5’调控区(-1288+25_顺序并与从解粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)染色体DNA中克隆的RNase(barnase)基因编码区构建了嵌合基因,通过根癌农杆菌介导转化水稻品种ZH11,所获得转基因植株的主要性状与供体亲本无显著差异,但开花后药壁不开裂,并且大多数植株的花粉不被I-KI染色,自交条件下结实率为完 相似文献
18.
烤烟栽培品种G28和K326抗黄瓜花叶病毒的遗传转化 总被引:2,自引:0,他引:2
采用根癌农杆菌介导的叶盘转化法,将CMVBS(香蕉株系)的CP基因转入广东烤烟栽培品种G28和K326,获得了再生转基因烟株。在卡那霉素(Km)100μg/mL浓度下转化体叶片分化形成愈伤组织;用PCR和DASELISA分析,结果证明CP基因已整合到转化烟株的染色体中,并得到不同程度的表达。利用广东地区香蕉、烟草和番茄上的CMVBS、27和37株系,采用机械接种和蚜虫传毒法分别进行攻毒试验,结果证明转基因烟株对这三个株系的攻击都表现出明显的抗病能力,其抗性程度与烟株中的CP表达量呈正相关。采用五种攻毒浓度处理,发现随着攻毒浓度的增加,转基因烟株的抗病能力逐渐减弱。 相似文献
19.
双价外壳蛋白基因植物表达载体的构建及马铃薯转基因植株的鉴定 总被引:10,自引:0,他引:10
在克隆了马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y 病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的外壳蛋白基因的基础上,构建同时包含PVX和PVY 与PVY 和PLRV 两个外壳蛋白基因植物表达框架的表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草(Nicotianatabacum )和生产上常用的几个马铃薯(Solanum tuberosum )优良品种:“Favorita”、“虎头”、“克4”。经PCR检测证明外源基因已整合到植物的染色体上,得到批量转基因植株。在转PVX+PVY 外壳蛋白基因的烟草上接种PVX (5 μg/m L)、PVY(20 μg/m L)病毒,得到有一定抗性的植株 相似文献
20.
大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用 总被引:17,自引:0,他引:17
大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有抗虫特性。从未成熟的大豆(GlycinemaxL.)子叶中提取总RNA,然后反转录成单链cDNA,以此为模板,用PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因,并克隆到pBluescriptKS(+)的SmaⅠ位点上。序列分析表明:克隆片段大小为663bp,包含了基因完整的编码序列。编码多肽由217个氨基酸组成,其中包括N端25个氨基酸组成的信号肽序列,181个氨基酸组成的成熟蛋白序列和C端11个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体,用于烟草(NicotianatabacumL.)、水稻(OryzasativaL.)、棉花(GosypiumhirsutumL.)等作物的转化。利用棉铃虫(HeliothisarmigeraHubner)对经PCRSouthern杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试,结果表明,转基因烟草和对照烟草相比,具有明显的抗虫能力。 相似文献