优良水稻品种“明恢63”BAC文库的构建

“明恢６３”是我国许多重要的水稻杂交组合中的恢复系。为了对其进行深入的遗传学研究以及克隆控制重要农艺性状的基因,以细菌人工染色体（ｐＢｅｌｏＢＡＣ１１）为载体,克隆经限制性内切酶消化后部分收集的“明恢６３”基因组ＤＮＡ,将连接混合物转化细菌ＤＨ１０Ｂ,构建了细菌人工染色体（ＢＡＣ）文库。该文库共有２６０００个转化子,插入片段为９０～２４０ｋｂ,平均大小为１５０ｋｂ。经计算该文库覆盖９倍水稻基因组。该文库正在用于构建几个基因所在区段的物理图谱,为图位克隆打下基础     

菜豆基因组微卫星DNA的分离与鉴定

从耐高温型菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｌ．）品种“Ｈａｉｂｕｓｈｉ”基因组分离微卫星ＤＮＡ,可以提供与耐热性ＱＴＬ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｔｒａｉｔ ｌｏｃｕｓ）连锁的多态遗传标记。为此,利用ｌａｍｂｄａ ＺＡＰⅡ载体构建了一个包含４００－８００ｂｐ插入片段的菜豆基因组文库。利用地高辛末端标记寡聚核苷酸（ＧＡ）１０和（ＣＡ）１０作为探针筛选该文库,并对部分阳性克隆进行测序分析,     

盐藻基因组DNA文库的构建(英文)

以ＬａｍｂｄａＦＩＸ○ＲⅡ为载体,构建了盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｓａｌｉｎａ）的基因组文库。该文库包含了１．１×１０６个重组子,插入片段平均大小为１８ｋｂ左右,含插入片段的频率为１００％。该文库的容量约为盐藻单倍体基因组的２００倍。     

人淋巴细胞CD2基因5‘侧翼序列的克隆和鉴定

本文报告以ＣＤ２ｃＤＮＡ５＇端的片段作探针,从人Ｔ淋巴细胞基因组文库筛选阳性重组克隆,经限制性内切酶降解和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明其中一个阳性克隆的插入片段中含ＣＤ２基因５＇侧翼顺序。经插入片段的亚克隆、限制性内切酶图谱及ＤＮＡ序列分析,鉴定出一含转录起始点及其上游序列的４．ｋｂ片段。将此片段中含转录起始点和两个ＤＮａｓｅＩ高敏感位点的２．５ｋｂ片段定向克隆到以虫萤光素酶为报告基因的表达载体     

水稻cDNA c73片段在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化

曾以水稻蜡质基因５’调控区内一段３１ｂｐ片段为探针,用酵母单杂交法从水稻ｃＤＮＡ文库中筛选出若干个其编码的蛋白可能与此３１ｂｐ片段结合的ｃＤＮＡ克隆,现将其中的ｐＣ７３克隆中的插入片段ｃ７３连接到含Ｈｉｓ６的表达载体ｐＥＴ２８－ｃ（＋）上,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行诱导表达,并用Ｎｉ－ＮＴＡ树脂纯化得到预期的融合表达产物。在合适的诱导表达条件下,融合表达产物主要以可溶形式存在于大肠杆菌细胞     

柑橘抗寒育种早期鉴定的一种指标

以５个抗寒性不同的柑橘品种或杂交后代：“山金柑”（ＦｏｒｔｕｎｅｌａｈｉｎｄｓｉＳｗｉｎｇｌｅ）、“伏令夏橙”（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ）、“伏令夏橙”＋“宁波金柑”（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ＋Ｆ．ｃｒａｓｉｆｏｌｉａＳｗｉｎｇ．ｃｖ．Ｍｅｉｗａ）、“Ｐａｇｅ”橘柚（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏ×Ｃ．ｇｒａｎｄｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｐａｇｅ）、“Ｍｕｒｃｏｔ”橘橙（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏ×Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｍｕｒｃｏｔ）为材料,研究了低温锻炼期间柑橘原生质体抗寒性的变化及其田间植株的冬季抗寒性,表明离体原生质体抗寒性与田间植株抗寒性之间有显著的正相关,因而前者可以作为衡量后者的指标。     

编码天麻抗真菌蛋白cDNA的分子克隆

用重组ＤＮＡ 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白（ＧＡＦＰ）的基因,从天麻（Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａＢｌ．）块茎中提取Ｐｏｌｙ（Ａ） ｍ ＲＮＡ 后合成ｃＤＮＡ,构建成表达型ｃＤＮＡ 文库,用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找出对应的ｃＤＮＡ 克隆。在进一步证明所选用的ｃＤＮＡ 克隆含有重组的λ－ｐｈａｇｅ ＤＮＡ 后,提取和纯化含有插入片段重组子的ＤＮＡ,用Ｅｃｏ ＲＩ酶切分析可见插入片段。已分离出编码天麻抗真菌蛋白的基因     

新疆细毛羊2倍基因组BAC文库PCR筛选系统的构建与使用

本研究所构建的BAC文库覆盖了8倍新疆细毛羊的基因组,平均插入片段的大小为133kb,同时文库92．5%的克隆插入片段大于100kb,而且有部分克隆甚至大于300kb,假定绵羊的基因组含有3×10~6kb,根据文库的平均插入片段大小为133kb,从文库筛选到目的片段的概率为98．208%。为了验证文库有较好的覆盖率,构建了2倍基因组文库PCR筛选系统,并对位于新疆细毛羊20号染色体MHC基因邻近区段的DMB_EX2、MCMA36、CP73和BM1258 4个分子标记进行了筛选,得到的平均阳性克隆数为1．5个,从筛选结果来看,这与文库插入片段估计的8倍基因组覆盖率相当接近并且没有偏向,这使得本文库成为研究绵羊的功能基因、位置克隆和完善基因组物理图谱的极为有用的资源。     

浑球红细菌Rhodobacter sphaeroides吸氢酶（hup）基因簇的分离 …

以Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ的ｈｕｐＳ‘Ｌ基因ＤＮＡ片段为探讨,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,从构建的Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ６０１基因库中调取ｈｕｐ基因。阳性克隆Ｃｏｓｍｉｄ１可与Ｈｕｐ突变株ＪＰ９１,ＲＣＣ８以及ＢＳＥ８互补,而Ｃｏｓｍｉｄ３和Ｃｏｓｍｉｄ９只能与ＢＳＥ８互补。试验所产生的接合转移子均恢复了吸氢酶的活性和自养生长能力。     

水稻广亲和品种核DNA cosm id文库的构建和鉴定

用改进的方法成功构建了一个高质量的水稻广亲和品种（Cpslo17)的核基因组cosmid文库, 文库以SuperCos 1为载体,克隆总数约为12万以上,克隆平均插入片段约40kb,空载率约为5％,文库容量覆盖水稻单倍基因组约9倍以上,用RFLP标记23D12R作为探针,从文库中分离到一个位于水稻广亲和基因座S5附近的克隆R2I19。     

人淋巴细胞CD2基因5’侧翼序列的克隆和鉴定

本文报告以ＣＤ２ｃＤＮＡ５’端的片段作探针,从人Ｔ淋巴细胞基因组文库筛选阳性重组克隆,经限制性内切酶降解和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明其中一个阳性克隆的插入片段中含ＣＤ２基因５’侧翼顺序。经插入片段的亚克隆、限制性内切酶图谱及ＤＮＡ序列分析,鉴定出一含转录起始点及其上游序列的４．０ｋｂ片段。将此片段中含转录起始点和两个ＤＮ（ａｓｅ）Ⅰ高敏感位点的２．５ｋｂ片段定向克隆到以虫萤光素酶为报告基因的表达载体ｐＭＧ３中,并用限制性内切酶对此２．５ｋｂ片段作不同程度缺失,构成一系列突变子。这些重组的表达质粒转染人ＪｕｒｋａｔＴ细胞后,以瞬时表达实验分析各突变子驱动虫萤光素酶基因的表达,结果发现在ＣＤ２基因５’上游具有很弱的启动子活性,初步测定该启动子位于－１．２ｋｂ～－９８ｂｐ域。ＣＤ２基因具有弱启动子、强增强子的特点与Ｔ细胞表面其它抗原分子基因是相似的。     

高覆盖率水稻ＢＡＣ库的构建及抗病基因相关克隆的筛选

利用含Ｘa4、xa5和xa13 3个水稻白叶枯病抗性基因的累加系ＩＲＢＢ５６构建了一个水稻细菌人工染色体文库,该文库包含５５２９６个克隆,平均插入升段为１３２kb。按水稻基因组为４５０Ｍb计,该文库覆盖１４倍基因组,筛选出任一水稻基因或序列的概率为９９．９９％。用均匀分布的３个叶绿体基因和４个线粒体基因克隆作探针筛选文库,结果显示该文库中含细菌器基因组ＤＮＡ同源序列的克隆数小于１％、用分布于水稻３条不同染色体、分别与Ｘa4、xa5和xa13连锁的ＤＮＡ标记筛选文库,分别检测出１１－１０６个阳性克隆,为克隆这些基因打下了基础。该文库对水稻基因组的高度覆盖率和较大的插入片段,非常适合于物理作图和基因的分离和克隆。     

小麦—簇毛表6VS／6AL易位系可转化人工染色体（TAC）文库的构建

可转化人工染色体（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ,ＴＡＣ）是具有克隆和转移大片段基因能力的新型载体,是植被基因克隆和转化的有效工具。为了克隆泪科抗白粉病基因和其它基因,本研究用ＴＣＡ载体ｐＹＬＴＡＣ１７构建了带有抗白粉病基因Ｐｍ２１的小麦＝簇毛麦６ＶＳ／６ＡＬ易位系的基因组ＤＮＡ文库。该文库包含２１０万个克隆平均插入征段３５ｌｂ,相当于     

环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因的克隆

环状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｃ２总ＤＮＡ经ＰｓｔＩ部分酶切后分离２～１０ｋｂ的片段,插入质粒ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点,转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）,利用几丁质平板从约８０００个重组子中筛选到一个几丁酶基因阳性克隆（命名为ｐＣＨＴ１）。用１２种限制酶对重组质粒进行的酶切分析表明,重组质粒中的插入片段长３０ｋｂ,其中各有一个ＫｐｎＩ,ＳａｃＩ和ＳｓｐＩ位点。把该克隆片段反向插入ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点所得到的重组子同样具有几丁酶基因表达活性,说明此片段含有一个完整的几丁酶基因,其自身的启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该片段来自于Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓＣ２基因组,且以单拷贝形式存在,它不能与来自于其它７株几丁酶产生菌的总ＤＮＡ杂交。     

水稻cDNA c73片段在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化

曾以水稻蜡质基因５’调控区内一段３１ ｂｐ 片段为探针,用酵母单杂交法从水稻ｃＤＮＡ 文库中筛选出若干个其编码的蛋白可能与此３１ ｂｐ 片段结合的ｃＤＮＡ克隆,现将其中的ｐＣ７３ 克隆中的插入片段ｃ７３ 连接到含Ｈｉｓ６ 的表达载体ｐＥＴ２８ｃ（ ＋ ） 上,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３） 中进行诱导表达,并用ＮｉＮＴＡ 树脂纯化得到预期的融合表达产物。在合适的诱导表达条件下,融合表达产物主要以可溶形式存在于大肠杆菌细胞内;表达量占到大肠杆菌总蛋白的１０ ％ 左右;经ＮｉＮＴＡ 树脂亲和层析纯化得到的产物纯度达９５ ％ ,可供进一步研究之用。     

应用酵母单杂交系统分离水稻蜡质基因5'调控区结合蛋白的基因

在水稻蜡质基因５’上游区中一段３１ｂｐ 核苷酸序列能与水稻未成熟种子核蛋白特异结合。为了克隆这一核蛋白基因,以此３１ ｂｐ 序列构建成“鱼饵”质粒,从水稻ｃＤＮＡ文库中筛选到１３ 个阳性克隆。根据这些阳性克隆中插入ｃＤＮＡ 片段的相互杂交结果,对这些克隆进行了分组。     

聚球藻7942高效泌氨突变种的获得及其泌氨,谷氨酰胺合成酶活性,光合和生

将含有Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣ７１２０反义ｇｌｎＡ基因片段的穿梭表达质粒ｐＤＣ－ＡＴＧＳ转化单细胞蓝藻聚球藻Ｓｙｎｅ－ｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２,通过同源重组,外源ＤＮＡ定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．７９４２突变种。     

应用酵母单杂交系统分离水稻蜡质基因5‘调控区结合蛋白的基因

在水稻蜡质基因５‘上游区中一段３１ｂｐ核苷酸序列能与水稻末成熟种子核蛋白特异结合。为了克隆这一核蛋白基因,以此３１ｂｐ序列构建成“鱼饵”质粒,从水稻ｃＤＮＡ文库中筛选到１３个阳性克隆,根据这些阳性克隆中插入ｃＤＮＡ片段的相互杂交结果,对这些克隆进行了分组。     

中国尾孢菌属及其近似属的研究VI.(英文)

本文报道９种尾孢菌,其中有２个新种：蟹甲草尾孢 Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｃａｃａｌｉａｅ Ｙ． Ｌ． Ｇｕｏ　＆ Ｙ．Ｊｉａｎｇ和菜蓟尾孢Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ 　ｃｙｎａｒａｅ Ｙ． Ｌ． Ｇｕｏ　＆ Ｙ． Ｊｉａｎｇ,中国新记录种有迪氏尾孢Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａｄｅｍｅｔｒｉｏｎｉａｎａ　 Ｇ． Ｗｉｎｔｅｒ,田菁生尾孢 Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ　 ｇｌｏｔｈｉｄｉｉｃｏｌａ 　Ｔｒａｃｙ　＆ 　Ｅａｒｌｅ,甘草尾孢 Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ 　（Ｓａｖｕｌｅｓｃｕ　＆　Ｓａｎｄｕ）Ｃｈｕｐｐ,野桐尾孢Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ　ｍａｌｌｏｔｉ　Ｅｌｌｉｓ　＆ 　Ｅｖｓｒｈ,木薯尾孢Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｍａｎｉｈｏｂａｅ Ｖｉｅｇａｓ,补骨脂尾孢 Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｐｓｏｒａｌｅａｅ－ｂｉｔｕｍｉｎｏｓａｅ Ｓａｖｕｌ．＆ Ｓａｎｄｕ和香豆尾孢Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｔｒａｖｅｒｓｉａｎａ Ｓａｃｃ。文中为新种提供了拉丁文描述并附图,研究的标本保存在中国科学院微生物研究所菌物标本馆（ＨＭＡＳ）。     

一种强启动子的分离与功能

以棉花曲叶病毒（ＣＬＣｕＶ）侵染的番茄叶片组织总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ反应扩增ＣＬＣｕＶ双向启动子片段并插入克隆载体。序列分析和同源性比较表明,克隆的启动子长４３６ｂｐ,与目前发现的４类ＣＬＣｕＶ分离物的启动子序列的同源性最高为９９．３２％。将启动子片段分别以不同方向与ｇｕｓ报告基因和ｎｏｓ终止子融合,构建了瞬时表达载体。通过基因枪法将质粒载体导入烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）