RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

利用RFLP,SSR,AFLP和RAPD标记分析玉米自效系遗传多样性的比较研究

利用ＲＦＬＰ、ＳＳＲ、ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ４种分子标记方法研究了１５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性,同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个,６７６对ＳＳＲ引物,２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合,分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性检测效率（Ａｉ,３２．２）。４种分子标记所得遗传相似自交系划分     

利用RFLP、SSR、AFLP和RAPD标记分析玉米自交系遗传多样性的比较研究

利用 ＲＦＬＰ、ＳＳＲ．ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ ４种分子标记方法研究了 １５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性,同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个,６６对ＳＳＲ引物,２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合,分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性信息量（ＰＩＣ）最大（０．５４）,ＡＦＬＰ标记位点最小（０．３６）,但ＡＦＬＰ标记具有最高的多态性检测效率（Ａｉ,３２．２）。４种分子标记所得遗传相似系数相关性显著,比较相关系数表明 ＲＡＰＤ可靠性较低。依据 ４种分子标记结果将 １５个供试自交系划分为塘四平头、旅大红骨、兰卡斯特、瑞德和ＰＮ共５个类群,与系谱分析基本一致。认为ＳＳＲ和ＲＦＬＰ两种分子标记方法适合进行玉米种质遗传多样性的研究。     

利用分子标记定位农垦58S的光敏核不育基因

对农垦５８Ｓ（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）／大黑矮生标记基因系ＦＬ２组合组建可育集团和不育集团,并以亲本为对照进行了ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ和双引物ＲＡＰＤ分析,结果第１２染色体上的一个单拷贝标记Ｇ２１４０与光敏核不育基因连锁遗传,二者间的遗传图距为１４．１ｃＭ（ｃｅｎｔｉｍｏｒｇａｎ）。在筛选过的１０４０个随机单引物和１９０个双引物中,仅引物ＯＰＡＵ１０扩增出与光敏核不育基因连锁的１．５ｋｂＤＮＡ片段,回收、克隆该ＤＮＡ片段并制备探针,将其转换成共显性的ＲＦＬＰ标记并命名为ＯＰＡＵ１０１５００。分离群体连锁分析表明该标记与标记Ｇ２１４０紧密连锁,将农垦５８Ｓ的一对光敏核不育基因定位于第１２染色体上。     

RAPD标记构建水稻分子连锁图

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）,在一个水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）的双单倍体（ＤＨ）群体中发展分子标记,仅用５２ 个ＲＡＰＤ标记建成了一个水稻ＲＡＰＤ分子连锁图。该图覆盖基因组的总长度为８９８．４ ｃＭ （ｃｅｎｔｉｍ ｏｒｇａｎ）,标记间的平均间距为１７．３ ｃＭ,它能与用同一群体构成的ＲＦＬＰ图谱互相补充     

应用RFLP研究水稻基因突变的特性

选用覆盖整个水稻遗传图谱的１２９和１０６个ＤＮＡ探针,分别分析了灿稻品系ＩＲ５４、５４６０、５４６０Ｓ之间和粳稻品系农垦５８、农垦５８Ｓ及其育性回复突变系之间的ＲＥＬＰ。在ＩＲ５４／５４６０、５４６０／５４６０Ｓ和ＩＲ５４／５４６０Ｓ检测到ＲＦＬＰ的探数分别为４３、１４和３２。而且,５４６０／５４６０Ｓ的多态性探针均能在ＩＲ５４和５４６０之间检测到差异性,其中１１个（７８．６％）在５４６０Ｓ与ＩＲ     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用ＡＰ－ＰＣＲ和ＲＡＰＤ技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株Ｖ３４基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）,及对编码核糖体５．８ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）进行ＰＣＲ扩增后的产物进行限制性内切酶长主多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10-A中的黑麦染色质

利用ＡＰＡＧＥ、荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０＿Ａ进行了分子标记检测。ＡＰＡＧＥ分析发现,１０＿Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０＿Ａ根尖细胞有丝分裂染色体进行荧光原位杂交。结果表明,黑麦的１ＲＳ易位到１０＿Ａ中。用２５个ＲＦＬＰ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析,进一步发现１０＿Ａ的１ＢＳ特异限制性片段发生丢失,代之以黑麦１ＲＳ的特异限制性片段,而位于其他染色体上的特异限制性片段未发生缺失。据此认为,多小穗小麦新种质１０＿Ａ属于１ＲＳ／１ＢＬ易位系。同时还讨论了１０＿Ａ在小麦遗传改良中的利用情况。     

RAPD标记构建家蚕分子连锁图

以大造、Ｃ１０８及其Ｆ２群体构建了１个家蚕的ＲＡＰＤ连锁框架图,该图含ＲＡＰＤ标记位点１８２个,来自大造的１０３个标记分属前２３个连锁群,来自Ｃ１０８的７９个标记分属后１６个连锁群,覆盖基因组的总长度为１１４８．３ｃＭ（ｃｅｎｔｉｍｏｒｇａｎ）,它能与本室用同一群体构建的ＳＡＤＦ图谱相整合,亦可与相应的ＲＦＬＰ图谱相互补充。     

RAPD标记构建家蚕分子链锁图

以大造、Ｃ１０８及其Ｆ２群体构建了１个家蚕的ＲＡＰＤ连锁框架图,该图含ＲＡＰＤ标记位点１８２个,来自大造的１０３个标记分属前２３个连锁群,来自Ｃ１０８的７９个标记分属后１６个连锁群,覆盖基因组的总长度为１１４８．３ｃＭ（ｃｅｎｔｉｍｏｒｇａｎ）,它能与本室用同一群体构建的ＳＡＤＦ图谱相整合,亦可与相应的ＲＦＬＰ图谱相互补充。     

微卫星DNA和AFLP标记在水稻分子标记连锁图上的分布

以一个栽培稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）和野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＧｒｉｆ）杂交的Ｆ２作图群体以及由该群体构建的ＲＦＬＰ标记连锁图,分析了微卫星ＤＮＡ和ＡＦＬＰ标记的多态性、遗传行为及其在染色体上的分布。共定位了２８个微卫星ＤＮＡ标记和１７２个ＡＦＬＰ标记。２８个微卫星ＤＮＡ标记中有６个为华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室根据数据库中序列而设计,其余２２个来自美国Ｃｏｒｎｅｌ大学已发表的结果。１７２个ＡＦＬＰ标记出自２５对引物扩增得到的２２８个多态性带的片段。这些标记分布于水稻的１２条染色体。将此２００个ＰＣＲ标记与华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室构建的ＲＦＬＰ连锁图整合,得到一张含６１２个分子标记位点的遗传连锁图。     

栽培稻F1花粉不育基因座S—a的分子定位

以栽培稻品种台中６５及其等基因Ｆ１不育系ＴＩＳＬ４为材料,用ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ等技术,对Ｆ１花粉不育基因座Ｓ－ａ定位。通过用ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ方法对亲本间进行多态性分析,发现亲本间的多态性很低,说明经多代回交后,在等基因系基因组中供体亲本的ＤＮＡ片段所占的比例很小。通过连锁分析,将Ｓ－ａ定位在第１染色体。Ｓ－ａ与分子标记ＣＤＯ５４８、Ｏ１１－１０００、ＲＧ１４６和Ｙ１３－５００之间的遗传距离分别为     

DNA分子标记在柑桔中的应用

ＤＮＡ分子标记是最为理想的遗传标记 ,依其多态性检出所用的分子生物学技术 ,大致可分为Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交技术为核心的分子标记和ＰＣＲ技术为核心的分子标记。前者的代表性技术有ＲＥＬＰ(ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)和ＤＮＡ指纹技术 (ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ)。后者的代表性技术有ＲＡＰＤ(ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ)、ＳＣＡＲ(ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃ ｔｅｒｉｓｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ)…     

扩增片段长度多态性(AFLP)——一种新的分子标记技术

ＡＦＬＰ（扩增性片段长度多态性）是一种新的ＤＮＡ分子标记。与ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ相比,ＡＦＬＰ具有在一次试验中可同时观察到大量的限制性片段的优点。本文阐述了ＡＦＬＰ的原理和方法,综述了ＡＦＬＰ目前在植物遗传育种研究中的应用进展,并对ＡＦＬＰ技术在植物遗传育种中的应用前景提出了初步设想。     

植物病原真菌中DNA分子鉴定技术

就基因组ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量、分子杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）,以及扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等分子标记技术,在植物病原真菌鉴定工作中的应用情况和发展趋势作了介绍。     

应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10—A中的黑麦染 …

利用ＡＰＡＧＥ,荧光原位杂交技术和ＲＦＬＰ标记,对导入黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）多小穗等性状创制的小麦新种质１０－Ａ进行了分子标记检测,ＡＰＡＧＥ分析发现,１０－Ａ与其他１ＲＳ／１ＢＬ易位系一样,含有１ＲＳ的醇溶蛋白标记位点Ｇｌｄ１Ｂ３。以黑麦基因组总ＤＮＡ作探针,用中国春（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｕｍｃｖ．ＣｈｉｎｅｓｅＳｐｒｉｎｇ）基因组ＤＮＡ作封阻,与１０－Ａ根尖细胞有丝分裂染     

中国对虾cDNA文库的构建

中国对虾ｃＤＮＡ文库的构建ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹＯＦＳＨＲＩＭＰＰＥＮＡＥＵＳＣＨＩＮＥＮＳＩＳ（ＣＲＵＳＴＡＣＥＡ,ＤＥＣＡＰＯＤＡ）关键词中国对虾ｃＤＮＡ文库构建ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ,ｃＤＮ...     

玉米CMS材料线粒体DNA遗传多型性的研究

选用１１×４＝４４个探针／酶组合,５０个（１０ｍｅｒ）随机序列引物对２５种不同胞质来源的ＣＭＳ玉米,５种正常胞质玉米线粒体ＤＮＡ进行ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ研究。研究结果表明：（１）４５％的探针／酶组合可检测到玉米线粒体ＤＮＡ的多型性,共表现１５种ＲＦＬＰ类型,其中Ｓ组ＣＭＳ材料内有７种,正常胞质材料内有２种;８０％的随机引物可检测到ＲＡＰＤ。（２）基于ＲＦＬＰ资料的聚类分析结果,可将３０种胞质明确地划分为Ｔ、Ｃ、Ｓ、Ｎ４组,其结果与恢复专效性测定结果一致。其中ｐＨＪ２－７－１／ＢａｍＨＩ的ＲＦＬＰ类型可成为利用ＲＦＬＰ技术进行胞质分组的鉴定体系。（３）“双”型胞质线粒体ＤＮＡ常表现Ｓ＋Ｃ胞质的ＲＦＬＰ图谱。     

黄瓜花叶病毒山东株（CMV—SD）RNA2全和cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶ－ＳＤＲＮＡ２的５’和３’未端序列,在此基础上,利用ＲＴ－ＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡＤＱ ＢＴＧ Ｐｃ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ＰＣ２３,并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ＰＣ２Ｆ。     

辣椒疫霉产毒共分离RAPD标记的研究

辣椒疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃｏｐｓｉｃｉ）毒素的产生是由一个不完全显性基因所控制,通过ＲＡＰＤ／ＢＳＡ分析证明,用ＯＰＷ１２扩增得到一条约１３００ｂｐ的ＲＡＰＤ标记带,该带与辣椒疫霉产毒共分离。纯化回收ＯＰＷ１２　１３００ＤＮＡ,共转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉ　ＤＨ５ａ,筛选出３个白色阳性克隆,序列分析发现该标记ＤＮＡ为１２９１ｂｐ。这一标记ＤＮＡ序列的阐明为进一分析产毒遗传机理提供了新的信息。