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1.
利用微分离黑麦1R染色体的体外扩增产物进行染色体着染研究 总被引:3,自引:0,他引:3
首先对显微分离出的黑麦(SecalecerealeL.)1R染色体进行了两轮Sau3A连接接头介导的PCR扩增(LA_PCR)。经Southern杂交证实这些染色体扩增片段来源于基因组DNA之后,再利用1R染色体的第二轮扩增产物、黑麦基因组DNA、rDNA基因为探针,与其根尖细胞中期分裂相进行染色体原位杂交,发现微分离的1R染色体体外扩增产物中包含大量的非该染色体特异性重复序列,而其信息量却较黑麦总基因组少;当以适量的黑麦基因组DNA进行封阻时,微分离染色体的体外扩增产物成功地被重新定位在中期分裂相的一对1R染色体上,说明微分离1R染色体的PCR扩增产物中的确包含了该染色体特异性的片段。此外,以从1R染色体微克隆文库中筛选出的一单、低拷贝序列和一高度重复序列分别为探针,染色体原位杂交检测发现,这一高度重复序列可能为端粒相关序列;而单、低拷贝序列却未检测到杂交信号。这些结果从不同侧面反映出染色体着染技术是证实微分离、微切割染色体的真实来源及筛选染色体特异性探针的有利工具。建立了可供参考的植物染色体着染实验体系,为染色体微克隆技术在植物中的进一步应用提供了便利。 相似文献
2.
黑麦染色体的显微分离与PCR扩增 总被引:13,自引:0,他引:13
利用改良的染色体显微分离技术,分离了黑麦(SecalecerealeL.)一个完整细胞的18条染色体(14A+4B),用人工合成的寡核苷酸为引物,进行单一引物法(singleuniqueprimerPCR,SUPPCR)扩增,经Southern杂交证明,PCR扩增产物与黑麦基因组DNA同源。 相似文献
3.
显微分离出黑麦(SecalecerealeL.)1R染色体,用CohesiveadapterssingleprimerPCR(CASPPCR)方法进行体外扩增,以DIG11dUTP标记扩增产物为探针,进行Southern分子杂交,结果表明扩增产物来自黑麦1R染色体。用1/10体积的连接物转化E.coliDH5α,获得10000多个重组菌落。经酶切分析,克隆子的插入片段为250~500bp,为进一步筛选1R染色体的分子标记打下了基础 相似文献
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大豆单染色体的显微分离及体外扩增 总被引:18,自引:0,他引:18
采用玻璃针分离法,通过显微操作器成功地分离到大豆(GlycinemaxL.)单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个0.5mLEppendorf管中,经Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头后,进行两轮PCR扩增,得到0.3~3kb之间的DNA片段。Southern杂交表明,这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组DNA之间有同源性,从而证明两条单染色体DNA确实已被成功地扩增了,同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离,为小型单染色体DNA的体外扩增及微克隆奠定了基础。 相似文献
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黑麦B染色体端粒相关序列的克隆 总被引:5,自引:0,他引:5
利用显微切割技术,分离了黑麦(SecalecerealL.)10个B染色体短臂端部片段,并利用寡核苷酸引物(CCCTAAA)3及新建立的二级单引物序列PCR扩增法,扩增了黑麦B染色体端粒相关序列。染色体原位杂交实验将PCR产物定位于B染色体短臂末端,多数A染色体末端也显示清晰的杂交信号。部分PCR产物克隆到pUC19载体中,对其中一个克隆子pp3的序列分析结果表明,它与玉米亚端部克隆子pBF266部分区域的同源性为92%。就目前资料检索,黑麦、玉米端粒相关序列具有高度同源性还未见报道。对这一实验设计在构建高密度RFLP图谱中的应用进行了探讨 相似文献
6.
黑麦1R染色体特异性PCR引物的分子证据 总被引:10,自引:0,他引:10
根据黑麦(SecaleceraleL.)与小麦(TriticumaestwumL.)rRNA基因间隔区序列差异,按Koebner设计的引物序列,合成了黑麦特异引物NOR-R1。运用该引物对不同植物材料进行PCR扩增,观察表明,含有黑麦1R染色体的植物均扩增出黑麦的特异带,但含有其他黑麦染色体的小麦种质,普通小麦品种及其近缘物种长穗偃麦草(Agropyronelongatum(Host)Beauv) 相似文献
7.
通过玻璃针分离法从大豆(Glycine max L.)根尖细胞中期分裂相中显微分离出一条染色体,经Sau3A人工接头介导的两轮PCR后,将其第二轮扩增产物克隆到质粒载体上,构建了单染色体质粒文库,经分析,该微克隆文库包含约20000个重组子。随机挑选178个重组子进行鉴定,证明该文库的插入片室主要介绍于200-1800bp大小830bp;其中,中、高拷贝重复序列占44%,单、低拷贝序列占56%。微 相似文献
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应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10-A中的黑麦染色质 总被引:9,自引:0,他引:9
利用APAGE、荧光原位杂交技术和RFLP标记,对导入黑麦(SecalecerealeL.)多小穗等性状创制的小麦新种质10_A进行了分子标记检测。APAGE分析发现,10_A与其他1RS/1BL易位系一样,含有1RS的醇溶蛋白标记位点Gld1B3。以黑麦基因组总DNA作探针,用中国春(Triticumaestivumcv.ChineseSpring)基因组DNA作封阻,与10_A根尖细胞有丝分裂染色体进行荧光原位杂交。结果表明,黑麦的1RS易位到10_A中。用25个RFLP探针进行Southern分析,进一步发现10_A的1BS特异限制性片段发生丢失,代之以黑麦1RS的特异限制性片段,而位于其他染色体上的特异限制性片段未发生缺失。据此认为,多小穗小麦新种质10_A属于1RS/1BL易位系。同时还讨论了10_A在小麦遗传改良中的利用情况。 相似文献
9.
利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
10.
应用荧光原位杂交和RFLP标记检测多小穗小麦新种质10—A中的黑麦染 … 总被引:4,自引:0,他引:4
利用APAGE,荧光原位杂交技术和RFLP标记,对导入黑麦(SecalecerealeL.)多小穗等性状创制的小麦新种质10-A进行了分子标记检测,APAGE分析发现,10-A与其他1RS/1BL易位系一样,含有1RS的醇溶蛋白标记位点Gld1B3。以黑麦基因组总DNA作探针,用中国春(Triticumaestiumcv.ChineseSpring)基因组DNA作封阻,与10-A根尖细胞有丝分裂染 相似文献
11.
以蚕豆根尖为材料,采用改良方法制备染色体标本,在光镜下切割分离一段大M染色体核仁组织区(NOR)特定区段,通过单一引物--聚合酶链式反应法随机扩同切DNA后,获得近60μgDNA。经琼脂糖电泳分析测定扩增产物分子片段大小介于200-900bp。以地主新标记蚕豆总体DNA。作为探针与扩增产物进行Southern杂交,证实扩增得到的DNA与蚕豆DNA同源,来自微切染色体。部分扩增产物经EcoRI酶切后 相似文献
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通过组织培养从普通小麦(TriticumaestivumL.)与八倍体小黑麦(×TriticosecaleWitmack)杂种F0幼胚再生植株后代中获得2个代换系930498、930483和1个附加系930029。以黑麦(SecalecerealeL.)基因组DNA为探针,采用荧光原位杂交(FISH)证实了黑麦染色体的存在。在有丝分裂中期,经FISH处理的黑麦染色体为黄绿色,明显区别于红色的小麦染色体。染色体配对、C分带、麦谷蛋白电泳分析,证明两个代换系为1D/1R代换,附加的也是黑麦1R染色体 相似文献
14.
根据两个植物抗病基因N和RPS2中核酸结合位点(NBS)和富亮氨酸重复区(LRR)中的保守序列设计了一对特异引物,用PCR从具有水稻(Oryza sativa L.)改良所需要的许多优良性状的水稻近缘野生种菰(Zizania latifolia(Griseb.)Turcz.ex Stapf)的基因组DNA中扩增同源片段。PCR产物经克隆后,分别以菰和水稻的基因组DNA为探针,通过点杂交对所得克隆进 相似文献
15.
对急性早幼粒细胞白血病中t(15;17)染色体易位的分子生物学研究显示,17号染色体上的维甲酸受体α(RARA)基因与15号染色体上的PML基因并置,并产生PML-RARA融合基因。我们以前的工作证明APL患者中PML基因断裂点集中于2个限区域,即PML-bcr1和PML-bcr 2,二者相距约10kb。本文确定了PML-bcr 1的DNA顺序,并确定了一例APL患者染色体相互易位接合部的基本结构 相似文献
16.
黑麦2R染色体的显微分离与回收 总被引:4,自引:0,他引:4
建立了利用显微担任技术分离植物单个染色体的方法。以黑麦(Secale cereale L)为材料,以其标准染色体组型图为依据,识别出黑麦含抗病基因的1R染色体。经显微操作,将单条1R染色体放入Ep-pendof管中。研究表明,用α-溴萘饱和液对细胞进行预处理,可快速鉴别出黑麦1R染色体。采用去壁低渗制片技术,可明显地改善显微分离意境染色体的条件。 相似文献
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杂交水稻及其“三系”线粒体DNA的AP—PCR指纹图谱 总被引:22,自引:1,他引:22
为了研究水稻(Oryza sativa L.)细胞质雄性不育(CMS)与线粒体基因组的关系,应用AP-PCR 分析,用7 个任意单引物对6 种水稻品系线粒体DNA 进行了扩增。水稻线粒体DNA 的AP-PCR 产物可分为三种类型:(1)所有供试品系均能扩增的片段,它们代表了线粒体DNA 在进化上的保守性序列。有4 个引物检测到这类片段。(2)2 个以上水稻品系共同出现而在全部供试材料间存在差异的扩增片段,这类片段是检测水稻线粒体DNA多态性的主要来源。(3)一种细胞质类型所特有的扩增片段,从引物R2 和V5 的扩增产物中发现了这类片段,它们可能与CMS有关联。另外,WA型不育系珍汕97A 与其杂种之间在6 个引物的扩增图谱上均存在不同程度的差异,说明两者的线粒体DNA序列结构可能存在某种差别 相似文献
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普通小麦基因组最可能的4个供体的ITS1和ITS2序列及其亲缘关系 总被引:4,自引:0,他引:4
对普通小麦(TriticumaestivumL.)基因组(AABBDD)最可能的供体-T.uratrtuThum.(AA)、T.monoccumvar.boeoticum(Boiss.)MK(AA)、AegilopsspeltoidesTausch.和Ae.tauschii(Coss.(DD)的核糖体RNA基因ITS区进行了PCR扩增和克隆,并测定了ITS1和ITS2的DNA序列,讨论和纠正了前人 相似文献
20.
牛生长激素基因在马铃薯中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
将牛生长激素基因cDNA 与Patatin ClassI启动子及NOS3终止子连接,构建了表达载体pPBGT. 用直接法将表达载体转入农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) LBA4404(pRAL4404)菌株, 用此菌株转化马铃薯(Solanum tuberosum )得到再生植株. 经NPTⅡ活性检测,总DNA PCR和Southern blot证明目的基因已整合到马铃薯基因组中.RNA 点杂交和Western blot表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达 相似文献