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1.
本课题研究RA538、反义c-ymc重组腺病毒对人胃癌(SGC7901)、食管癌(E C109、EC8712)、正常人胚肺2BS(2BS)及bcl-2高表达细胞第的体仙外生物学作用及其分子机制。结果显示Ad-RA538及Ad-ASc-myc对SGC7901细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用,并能抑制其c-myc、bcl-2、cyclinD1基因的表达及刺激bax基因的表达。对EC109、EC8 相似文献
2.
氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
动脉平滑肌细胞(sm ooth m uscle cell,SMC)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块中的主要细胞,它的增殖在AS形成过程中极其重要.利用体外培养的人主动脉SMC,观察了天然高密度脂蛋白(native high density lipoprotein,N-HDL)及氧化修饰HDL(oxidized HDL,OX-HDL)对培养人主动脉SMC cyclin D1(细胞周期蛋白D1)基因转录表达的影响.结果表明:(1)N-HDL对SMCcyclin D1基因表达无影响(P> 0.05);(2)OX-HDL使SMCcyclin D1基因表达显著增强(P<0.01),其表达量随时间(2、12、24 h)延长而增加.上述结果表明,OX-HDL的致AS作用可能与其刺激SMCcyclin D1基因表达增加有关. 相似文献
3.
构建了来自根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) T-DNA 的细胞分裂素基因(T-cyt)启动子驱动下的GUS基因的表达质粒,并用以转化烟草(Nicotiana tabacum cv. W 38)和马铃薯(Solanum tubero-sum L. cv. Desiree),研究其在转基因植物中表达的定位。结果表明,T-cyt启动子在转基因植株的根、茎、叶、块茎和萌发的种子中均可表达。其中在茎和块茎中的表达是不均一的:在维管束部分表达较强,在侧芽或叶柄的生长点及块茎的芽生长点表达活性较高。此外,在培养基中加入0.1 m g/LBAP,转基因烟草茎中GUS基因的表达活性增强,而对NAA 没有明显的反应。看来某些外源植物激素对T-cyt启动子的活性有一定的诱导作用 相似文献
4.
利用RT-PCR方法,从小鼠肝脏组织总RNA中扩增出4.5SRNA的cDNA。该cDNA被克隆到pGEM3Zf(+)质粒上,酶切鉴定并测序。然后将该序列插入以Luc基因作为报道基因的表达载体pSVluc20的PvuⅡ位点,构建了含4.2SRNA逆转座子的表达载体pSVluc20-4.5S。脂质转染法将表达载体导入小鼠骨髓瘤细胞NS-1、SP2/0和人乳腺癌细胞Bca61。结果表明,小鼠4.5SRN 相似文献
5.
以逆转录病毒pLXSL为载体与人细胞介素2基因(IL-2)重组,用电穿孔技术将其重组子pLIL—2SN导入PA317细胞中,建立了逆转染病毒包装体系细胞PA317/pLIL—2SN。应用逆转录病毒包装体系细胞上清液去转染入肺腺癌细胞SPC—A1,经过20天含G418培液的筛选式培养,历经了50代的传代培养,获得了转白细胞介素2基因的人肺腺癌细胞株SPC-A1/IL-2。该细胞(SPC-A1/IL-2)经PCR技术验证外源性目的基因(IL-2gene)导入细胞内,且证明该细胞能表达IL—2基因(有IL-2的分泌)。我们研究的目的是对肿瘤细胞的特异性抗原修饰、对肿瘤细胞进行处理。试图建立肿瘤疫苗。 相似文献
6.
紫云英细胞转化条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了紫云英(AstragalussinicusL.)细胞遗传转化的条件。根癌农杆菌(Agrobacteriumtum efaciens)经含乙酰丁香酮的低pH/PO3-4 诱导培养后,用来感染紫云英下胚轴原生质体,随后的细胞GUS瞬间表达活性显著提高,间接证明了上述预培养诱导活化了细菌vir基因,促进了T-DNA 向植物细胞转移。在PEG介导的DNA 转移中,较高的pH 和Ca2+ 浓度能够提高细胞GUS活性。质粒DNA 浓度及启动子类型对外源基因在植物细胞内表达也有一定影响。采用外植体-农杆菌共培养法,获得GUS和NPT Ⅱ基因稳定表达的紫云英转化植株 相似文献
7.
1植物名称王瓜(Trichosanthescuc-umeroides),采自浙江天目山。2材料类别顶芽、带腋芽的茎段。3培养条件诱导分化培养基:(1)MS+6-BA0.5mg·L-1(单位下同);(2)MS+6-BA1;(3)MS+6.BA2+2,4-D1。诱导生根与生长培养基:(4)MS;(5)MS+IAA2;(6)MS+6-BA1+2,4-D1。每种培养基均附加3%蔗糖,0,7%琼脂,pH5.8。培养温度(25±1)℃,光照每天12h,光照度20001x左右。4生长与分化情况4.1无菌材料的… 相似文献
8.
大鼠iNOS基因上游调控区在转录激活中的作用 总被引:2,自引:2,他引:0
为了探讨大鼠iNOS基因上游调控区不同部位在对细胞因子诱导应答中所起的作用,将调控区不同部位插入pSV0-CAT报告基因载体,转染体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC),经IL-1β诱导后,采用氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性测定和Northern印迹杂交,检查了调控区各部位在IL-1β诱导cat表达中所起的作用.结果表明,被转染的细胞在未经IL-1β刺激时,各种调控区序列启动cat表达的活性均很低.在IL-1β作用下,调控区远端序列(-1037~-438)、近端序列(-437~+46)和全长序列(-1037~+46)均能独立激活cat表达,其中以全长序列的作用最强,表明iNOS基因表达调控区远端和近端序列均具有启动子和增强子样功能.同时证实,远端序列和近端序列单独启动cat表达的活性分别为全长序列的91.3%和67.1%,揭示大鼠iNOS基因调控区远端序列在介导IL-1β的应答反应中发挥更重要作用. 相似文献
9.
体外研究汉滩病毒(HTNV)S基因及其5'端表达的意义,为核蛋 白T细胞表位的研究奠定基础。设计2套引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出S 基因全读码框(37-1326bp)及S基因5'端(37-501bp),用TA克隆将其克隆入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,成功构建pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N真核表达载体,并通过脂质体转 染至Vero细胞中,进行了瞬时表达。间接免疫荧光成功检测到pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N在Vero细胞中的表达。pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N真核表达载体有较高的转染效率,目 的基因能在宿主细胞中表达,有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义。 相似文献
10.
一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo … 总被引:3,自引:0,他引:3
在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮(NO)对血管紧张素Ⅱ(AⅡ)和内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达的影响。用Bradford法测定心肌细胞总蛋白含量(作为心肌细胞肥大的指标);用基因特异性引物和SuperScript一步法进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测大鼠心肌细胞原癌基因c-fos的表达(以GAPDH为内标)。结果显示,AⅡ和ET-1分别作 相似文献
11.
Bcl——2基因表达对TNF及OA诱发的细胞编程死亡的不同效应 总被引:1,自引:0,他引:1
用TNF和OA(Okadaicacid)诱发人神经母细胞瘤SK细胞死亡,并证明细胞死亡为编程死亡(ProgrmmedCellDeath,简称PCD)。将编码Bcl-2全长蛋白的cDNA植入PJX41neo载体中,使其表达由HCMV病毒起动子控制。形成的顺义(pBcl-2-S)及反义(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明顺义转染子表达大量的26kdBcl-2蛋白,而反义转染子则不表达。增强表达的Bcl-2蛋白能抑制由TNF引发的PCD,但不影响OA引发的PCD,从而证明了Bcl-2基因产物抗细胞死亡效应的特异性。 相似文献
12.
乙肝前S2(HBVPreS2)肽段由55个氨基酸组成,其N端肽段含Th和B细胞抗原决定簇。我们将化学合成的PreS2epitope(120-145)基因与HBcAg基因不同位点进行融合,融合基因在大肠杆菌中获得表达,并对融合蛋白进行了纯化。经ELISA和Western-blot实验表明,融合蛋白具有PreS2和HBcAg两者的抗原性。此外,研究还表明,强启动子能使表达水平有一定提高。 相似文献
13.
目的:探讨针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的小干扰RNA(siRNA)对口腔鳞癌细胞(OSCC)化疗敏感性的影响。方法:用Western印迹检测OSCC和针对HIF-1α基因的siRNA导入OSCC后的HIF-1α蛋白表达水平;用MTT法检测细胞对化疗敏感性的影响;用流式细胞术检测化疗诱导细胞凋亡的凋亡率。结果:HIF-1α在OSCC中高表达,HIF-1α-siRNA转染后HIF-1α表达水平明显下降,细胞对化疗敏感性明显提高,化疗诱导肿瘤细胞凋亡率明显增加。结论:针对HIF-1α基因的siRNA能明显降低HIF-1α的表达,增强化疗对OSCC的凋亡诱导作用,有效提高OSCC对化疗的敏感性。 相似文献
14.
以药物敏感型细胞株K562/S和耐药型细胞株K562/A02为对象.观察原癌基因Bcl-2的表达量在两种细胞中的差异,以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力,并利用酪氨酸激酶抑制剂genistein,酪氨酸磷酸酯酶抑制剂vanadate,观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系.结果显示:在K562/A02中Bcl-2的表达量明显高于K562/S;外源性神经酰胺能成功地诱导K562/S,K562/A02细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的形态学改变和DNA“Ladder”形成,FCM检测出现凋亡细胞峰,但在同样的诱导条件下,K562/S细胞凋亡明显高于K562/A02细胞.FCM检测genistein能显著改变这两种细胞生长周期,但细胞阻滞于G2/M期,便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用,vanadate单独对细胞地明显作用,但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率.以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Bcl-2基因起重要作用,神经酰胺能诱导K562/S和K562/A02细胞调亡. 相似文献
15.
利用番茄(Lycopersicum esculentum Mill.)县浮培养细胞为材料,以^32P标记的寡核苷酸(40bp)为探针检测了细胞外钙调素对番茄细胞rbcS-3A及rbcS-3C基因表达的影响。当向暗中培养的番茄悬浮细胞(第7天)中加入外源纯化钙调素(10^-7mol/L)并处理24h后,rbcB-3A基因的表达明显增加,而相同深度的S-100蛋白和BSA则没有作用。加入外源钙调素(1 相似文献
16.
c-fos基因在内皮素-1促肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质合成中的作用 总被引:17,自引:0,他引:17
应用反义技术探讨c-fos基因ET-1调控肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)表面活性物质(PS)合成的胞内信号转导中的作用,结果显示:(1)内皮素-1(ET-1)可提高ATⅡ细胞的^3H-胆碱掺入。(2)蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA可使ATⅡ细胞的^3H-胆碱掺入量增加,PKC抑制剂H7可抑制ET-1的促PS合成效应。(3)ET-1和PMA可显著提高Fos蛋白表达量,H7和c-fos反义寡核苷酸(ODN) 相似文献
17.
冬瓜的组织培养及快速繁殖 总被引:3,自引:0,他引:3
1植物名称台湾冬瓜(Benincasahispida)。2材料类别顶芽、带腋芽的茎段。3培养条件(1)预培养的培养基:1/2MS和1/2MS分别添加0.1、0.5、1.0mp·L~(-1)(单位下同)NAA、6-BA、ZT、2,4-D。(2)诱导丛生芽培养基:①MS+NAAI+6-BA4;②MS+NAA2+6-BA3;③MS+NAA3+6-BA2;④MS+NAA4+6.BA1。(3)生根培养基:⑤1/2大量元素减半的MS培养基;⑥1/2MS;⑦MS。培养温度:25~28℃,光照度2000~250… 相似文献
18.
本工作观察了体外环境中不同水平的维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞株(SMMC-7721)生长、分化和其癌基因(N-ras、c-myc)表达水平的影响。实验结果表明:高水平维生素E(2.4、9.2、24.0nmol/L)和Se(0.15、0.30、0.60nmol/L)对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素E和微量元素Se均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Se对癌细胞甲胎蛋白的分泌有明显的抑制作用,而维生素E作用不明显。细胞原位杂交发现维生素E浓度为2.4和9.2nmo1/L时对细胞癌基因N-ras的表达具有明显抑制作用;Se浓度为0.15和0.30nmol/L时对癌基因c-myc的表达明显抑制。实验还观察了维生素E和Se之间的叠加效应,结果显示除对环境中脂质过氧化的抑制作用具有叠加效果外,对其他指标没有明显作用。 相似文献
19.
PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失 总被引:2,自引:0,他引:2
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酰胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响,利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体载体PSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体PSV2neo-beta-gal将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的H 相似文献
20.
用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)基因,与pPUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2基因.PAI-2基因与表达载体pPIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选和PCR扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组PAI-2以分泌型表达,占分泌总蛋白的30%,具PAI-2抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗SDS复合物,具抑制纤溶的活性(91.4AIU/ml).对培养条件也进行了探讨. 相似文献