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相似文献
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1.
黄瓜中LFY同源基因CFL的克隆和分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
LFY同源基因在高等植物花分生组织的发生中发挥着重要的作用。克隆了黄瓜( Cucumissativus L.) 中的LFY同源基因CFL,Southern 杂交的结果显示它在黄瓜基因组中为单拷贝基因,Northern 杂交结果显示它主要在花芽和幼叶中表达。讨论了CFL基因在黄瓜开花和营养生长中可能发挥的作用  相似文献   

2.
黄瓜花叶病毒(CMV)运动蛋白基因介导的抗病性   总被引:4,自引:0,他引:4  
利用Fny_CMV株系RNA3cDNA克隆,构建了含有全长和编码区缺失501个核苷酸的运动蛋白(MP)基因植物表达载体pBMPR和pBMPK。在土壤农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)LBA4404介导下转化烟草(NicotianatabacumL.)品种“NC89”,分别经Southernbloting、RT_PCR或Westernbloting分析,外源基因已整合到再生植株中并得到表达。抗病性分析表明,含有缺失型MP基因的R0代转基因植株抗性较好,接种50d后,10株转化植株中仍有5株不表现症状。在自然发病条件下,这5个含有缺失型MP基因转基因株系在R1代都表现了一定的抗病性。抗性主要表现为症状出现推迟,严重度减轻。利用PCR筛选、种子卡那霉素抗性试验和温室抗病性测定等方法,初步认为R2代转基因烟草K_6_5株系为转基因抗病纯合系。而含有全长MP基因的R0代转化植株,前期没有表现明显的抗病性,但在接种40d后部分发病植株有恢复健康的趋势。  相似文献   

3.
氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨   总被引:7,自引:0,他引:7  
以过氧化氢(H2O2)诱导人慢性髓细胞白血病(K562)细胞为凋亡模型,采用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)和激光共聚焦扫描显微镜(laserconfocalscanningmicroscopy,LCSM)研究细胞凋亡,形态观察出现核固缩,核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征.DNA电泳图谱出现“Ladder”.FCM检测在G0/G1峰前出现一低DNA含量的凋亡峰.LCSM显示凋亡细胞c-Fos.c-Jun和NFκB表达量均有不同程度的增加.该结果提示上述三种转录因子可能参与氧化诱导凋亡过程中基因的调控作用.  相似文献   

4.
CD40配体(CD40L)是TNF超家族成员,表达于人活化的CD4^+T细胞表面,与存在于B细胞、抗原递呈细胞表面的相就受体CD40分子相互作用,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用PCR法从CD40L全长cDNA质粒中扩增CD40L胞外段编码cDNA,即可溶性CD40L(sCD40L)编码cDNA,并克隆入pSK质粒;cDNA序列经测序证实后与pPICZαA质粒重组构建成pPICZαA-s  相似文献   

5.
通过有机试剂抽提,CF-11纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株(RRSV-P)的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Segment 1到Segment 10(S1-S10)的10条双链RNA(dsRNA),然后设计合适的引物,用RT-PCR方法得到S9的cDNA并将其克隆到pUC119质粒上扩增,以双链测序法测定该cDNA的全序列。同时又将此cDNA克隆到大肠杆菌表达质粒pGEX  相似文献   

6.
将两株1型犬腺病毒(Canine adenovirus type 1,CAdl)DNA片段(29 ̄40m.u.)和两株2型犬腺病毒(CAd2)DNA片段(28 ̄44m.u.),分别克隆到质粒pBluescript SK中。经核苷酸序列测定和计算机分析表明,在上述克隆片段内,两株CAdl(CLL和Glaxo)的序列相同,两株CAd2(Toronto和China)的序列也相同;CAd1与CAd2具有9  相似文献   

7.
通过有机试剂抽提,CF-11纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株(RiceRaggedStuntVirus,Philippineisolate,简称RRSV-P)的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Segment1到Segment10(S1-S10)的10条双链RNA(dsRNA),然后设计合适的引物,用RT-PCR方法得到S9的cDNA并将其克隆到pUC119质粒上扩增,以双链测序法测定该cDNA的全序列。同时又将此cDNA克隆到大肠杆菌表达质粒pGEX-3X上,在大肠杆菌菌株DE3中用IPTG诱导表达,经超声波破菌、离心、Glutathione-sepharose4B亲和层析,得到纯化的分子量为64kD的融合蛋白。  相似文献   

8.
人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
从诱导的人胚肺细胞HFL株中提取总RNA.经RT-PCR反应获取了人GM-CSFcDNA,DNA序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用PCR改造了人GM-CSF的cDNA5’端核苷酸序列,并将改造的人GM-CSF基因插入含T7启动子的质粒pET-11d构建成表达质粒pETC-5,将此质粒转化大肠杆菌株BL21(DE3)得到表达菌株BLEC4。表达菌株用0.5mol/LIPTG诱导2小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。SDS—PAGE电泳图谱扫描结果表明,rhGM-CSF产量占菌体总蛋白量的16%。ELISA和TF-1细胞培养测定表明,初步纯化和复性的rhGM-CSF具有天然的hGM-CSF生物活性。  相似文献   

9.
纯化鸡胚成纤维细胞培养的犬瘟热病毒(CanineDistemperVirus,CDV),获得病毒基因组RNA后,反转录合成双链病毒F基因cDNA。将此双链cDNA平端插入PUC19质粒SamⅠ位点构建重组质粒,进行cDNA克隆。以重组克隆质粒为模板PCR扩增,获得CDV全长F基因。将此F基因插入表达载体PBV220,在大肠杆菌中表达,通过对表达产物的最终鉴定,可确认所获片段为CDV全长F基因.  相似文献   

10.
同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用   总被引:11,自引:0,他引:11  
血中同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)浓度的升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子.为进一步阐明HCY促进血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecels,VSMCs)增殖,从而引起动脉粥样硬化发生的机理.本实验采用细胞计数、3H-TdR参入、细胞周期分析、Northern杂交方法证明,一定剂量的HCY可促进离体培养的WKY大鼠血管平滑肌细胞增殖,使其DNA合成增加,细胞周期中S期细胞所占比例增加43%,并促进c-myc与c-fos原癌基因mRNA表达增加.提示HCY可能通过促进VSMCs增殖而诱发动脉粥样硬化  相似文献   

11.
报道生于夹竹桃科(Apocynaceae)植物上的链格孢新种2个、新变种2个,即络石链格孢(Alternaria trachelospermi T.Y Zhang,X,F,Lin et W.Q.Chen)、细极链格孢络石生变种[A.tenuissima(Neesex Fr.)Wiltshirevar.trachelospermicola T.Y.Zhang,X.F.LinetW.Q.Chen]、细极链格孢长春花变种[A.tenuissima(NeesexFr.)Wiltshirevar.catharanthiT,Y.ZhangetX.F.Lin]和长春花生链格孢(A.catharanthicolaT.Y.Zhang),及生于番木瓜科(Caricaceae)植物上的番木瓜链格孢(A.caricae T.Y.Zhang,W.Q.Chen et X.F.Lin).新种和新变种均有拉丁文特征描述,并附绘图.新分类单位的模式标本分别存放在西北农业大学真菌标本室(HMUABO)和山东农业大学植物病理标本室(HSAUP).  相似文献   

12.
根据法呢基焦磷酸合酶(FPS)保守域设计简并引物,应用NestPCR和PCR96孔板筛库技术分离到亚洲棉(GosypiumarboreumL.)法呢基焦磷酸合成酶的cDNA。序列分析表明,该cDNA全长1280bp,开放阅读框共编码342个氨基酸残基,推断蛋白质分子量约为39kD,推测的氨基酸顺序与拟南芥和青蒿的FPP合酶序列同源性为789%和807%。应用RTPCR定量分析fps1基因在“苏棉6号”(G.hirsutumL.cv.“Sumian6”)种子发育过程中的表达特征,发现从胚珠开始形成种子(开花后20d)至种子成熟(开花后40d),fps1mRNA转录水平发生明显变化。在种子发育早期,开花后20d至27dfps1基因保持相对稳定的表达水平;但从开花后27d到种子成熟,fps1mRNA的转录水平迅速增高,此期倍半萜棉毒素在种子中的积累亦呈明显的增长趋势,完全风干成熟的种子中倍半萜棉毒素的含量可达13mg/g。推测fps1基因在转录水平参与种子中倍半萜类物质合成的调控。  相似文献   

13.
三种被孢霉的电泳核型分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
利用等强度均一电场(Contour-clamped Homogeneous Electric Field,CHEF)凝胶电泳技术比较了三种被孢霉菌株及两株诱变菌株的电泳核型。结果显示深黄被孢霉AS3.3410(Mortierella isabellina AS3.3410)及其诱变株M6-22、MH23具有相同的染色体DNA分子的数目和大小,而与拉曼被孢霉AS3.3411(M.ramanniana  相似文献   

14.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关.  相似文献   

15.
利用等强度均一电场(Contour-clamped Homogeneous Electric Field,CHEF)凝胶电泳技术比较了三种被孢霉菌株及两株诱变菌株的电泳核型。结果显示深黄被孢霉AS3.3410(Mortierella isabellina AS3.3410)及其诱变株M(6-22)、MH(23)具有相同的染色体DNA分子的数目和大小,而与拉曼被抱霉AS3.3413(M.ramanniana AS3.3413)和葡酒色被孢霉AS3.3414(Mvinacea AS3.3414)显示出明显的差异。三种被抱霉明显的染色体带数分别为15条,10条和11条,分离的染色体DNA大小范围大约为390kb-2660Kb,基因组大小分别约为21640Kb、15040Kb、19670Kb。  相似文献   

16.
本文报道9种尾孢菌,其中有2个新种:蟹甲草尾孢 Cercospora cacaliae Y. L. Guo & Y.Jiang和菜蓟尾孢Cercospora  cynarae Y. L. Guo & Y. Jiang,中国新记录种有迪氏尾孢Cercosporademetrioniana  G. Winter,田菁生尾孢 Cercospora  glothidiicola  Tracy &  Earle,甘草尾孢 Cercosporaglycyrrhizae  (Savulescu & Sandu)Chupp,野桐尾孢Cercospora malloti Ellis &  Evsrh,木薯尾孢Cercospora manihobae Viegas,补骨脂尾孢 Cercospora psoraleae-bituminosae Savul.& Sandu和香豆尾孢Cercospora traversiana Sacc。文中为新种提供了拉丁文描述并附图,研究的标本保存在中国科学院微生物研究所菌物标本馆(HMAS)。  相似文献   

17.
在丝瓜和黄瓜发育过程中肌动蛋白基因的表达   总被引:4,自引:0,他引:4  
对肌动蛋白基因在丝瓜(Luffa cylindrica L.)和黄瓜(Cucum is sativum L.)各器官的表达进行了研究.Northern blot和Dotblot结果表明,肌动蛋白基因在丝瓜和黄瓜中表现出器官特异性表达. 首先,肌动蛋白基因在丝瓜幼苗发育过程中表现明显的发育阶段特异性. 30 d 苗茎的m RNA 水平为8 d 苗的根、子叶和15 d 苗的根、下胚轴的4~6 倍, 同时为开花植株茎和叶片的m RNA 水平的10~12 倍. 其次,肌动蛋白基因在黄瓜中表现器官特异性表达,它们倾向于在黄瓜幼嫩果实中(开花后15 d)特异表达  相似文献   

18.
木兰亚纲的分子系统学研究进展(一)叶绿体rbcL基因序列的分支分析王艇,苏应娟,C.R.Parks(中山大学生物系,广州510275)(美国北卡罗来纳大学生物系)PROGRESSINMOLECULARSYSTEMATICSOFTHEMAGNOLIID...  相似文献   

19.
为了观察凋亡与喉粘膜癌变的关系,本实验应用原位末端标记(ISEL)方法检测喉粘膜正常(normallaryngealmucosa,N)、炎症(inflammation,IF)、不典型增生(dysplasia,DYS)及鳞癌(squamouscelcarcinoma,SCC)中细胞凋亡情况。标记后的凋亡细胞通过计数以凋亡指数(AI)表示。结果表明:DYS组的凋亡指数(AI)在所有病变中最高;DYS及SCC组的AI值较正常N及IF组明显增多,且有显著性差异(P<005);对SCC的计数显示,AI值随着SCC的分化程度下降有逐渐减少的趋势。SCC转移组与非转移组的AI值间无显著性差异(P>005)。结论:细胞凋亡在喉粘膜癌前病变和癌变中发挥着重要作用,与喉癌的发生发展密切相关  相似文献   

20.
通过组织培养从普通小麦(TriticumaestivumL.)与八倍体小黑麦(×TriticosecaleWitmack)杂种F0幼胚再生植株后代中获得2个代换系930498、930483和1个附加系930029。以黑麦(SecalecerealeL.)基因组DNA为探针,采用荧光原位杂交(FISH)证实了黑麦染色体的存在。在有丝分裂中期,经FISH处理的黑麦染色体为黄绿色,明显区别于红色的小麦染色体。染色体配对、C分带、麦谷蛋白电泳分析,证明两个代换系为1D/1R代换,附加的也是黑麦1R染色体  相似文献   

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