应用改良CTAB法提取树莓DNA最佳条件的探索

目的:改良CTAB法提取三种树莓叶DNA最佳条件的探索及检测DNA的完整度。方法:通过改良CTAB法提取树莓叶三个品种的基因组DNA。结果:经检测,所提样品OD260/OD280值在1.6~1.9之间,得率为198~396ng/μl,电泳条带较清晰,无明显拖尾现象;提取最佳条件为水浴时间90min、CTAB抽提液浓度3%时,发现DNA完整性较好、纯度较高,可以满足相关的分子生物学研究需要。结论:该研究可以为树莓叶分子生物学的后续研究的开展奠定实验基础。     

狭叶坡垒基因组总DNA的提取和纯化方法研究

以狭叶坡垒叶片为材料,对基因组总DNA的提取和纯化方法进行了研究,并对改良CTAB法、高盐低pH法和改良SDS法进行比较.结果表明,改良的CTAB法更适合狭叶坡垒基因组总DNA的提取,且硅胶干燥30 d的叶样和新鲜叶样所得的DNA几乎没有区别.再对改良CTAB法的水浴时间进行探索,发现150 min是较为合适的水浴时间.对比酚纯化法和试剂盒纯化法,发现试剂盒纯化损失的DNA少,得率高,是一种简便、快速、安全的纯化方法.     

高粱基因组DNA提取方法的比较与优化

目的：比较CTAB法和高盐低pH法提取高粱总DNA效果,进一步优化建立高盐低pH值法提取高粱基因组DNA的方法。方法：采用CTAB法、高盐低pH法对高粱叶片DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率三方面进行比较研究。通过提取缓冲液中SDS浓度的优化,不同组织器官的DNA提取纯化以及不同沉淀方法的优化,比较不同方法对高粱基因组DNA提取的影响。结果：高盐低pH法DNA平均得率为689.36μg/g,略小于CTAB法的718.26μg/g,但其A260/A230平均值为1.854,比CTAB法的2.164更接近标准要求。高盐低pH法提取高粱基因组DNA的适宜条件确定如下：提取液中含有2%SDS、2%PVP、2%β-巯基乙醇;水浴时间30min;沉淀方法采用0.7体积异丙醇室温沉淀的沉淀方法。结论：综合考虑高盐低pH法是提取高粱基因组DNA的最佳方法。     

响应面法优化荷叶离褶伞DNA提取条件

为了高效获得荷叶离褶伞DNA,比较了CTAB法、改良CTAB法、SDS法和改良SDS法4种方法提取DNA的效果,结果表明以SDS法提取率较高且纯度最好。在单因素试验基础上,对SDS法进行优化,选取SDS提取液p H、提取时间和提取温度为影响因子,利用中心组合进行3因素5水平的试验设计,以DNA提取率为响应值,进行响应面分析。结果表明:荷叶离褶伞DNA提取的最优条件为SDS提取液p H 8.2、水浴温度81.7℃、水浴时间56.2 min。在此条件下,DNA的提取率为0.141 9μg/g。     

油用牡丹‘凤丹’叶片DNA提取方法研究

以新鲜的牡丹叶片为材料,采用CTAB法、SDS法以及改良CTAB法提取基因组DNA,通过紫外光谱分析法、琼脂糖凝胶电泳等检测方法对牡丹基因组DNA的提取方法进行筛选。在这三种DNA提取方法中,SDS法略好于CTAB法。SDS法DNA得率虽低,但其纯度高,去糖去蛋白等杂质比较干净,且在未加RNA酶的情况下,RNA污染较少。改良CTAB法浓度比CTAB法增大,但纯度仍低于SDS法。所以,牡丹叶片DNA的最佳提取方法为SDS法。     

短序十大功劳基因组总DNA提取方法研究

以短序大功劳嫩叶为材料,采用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、SDS法和试剂盒法五种方法提取短序十大功劳基因组总DNA,用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的纯度和得率,用ISSR-PCR扩增的方法检测所得总DNA的质量。结果表明,五种方法均能从短序大功劳叶片中提取到基因组DNA,但不同方法提取得的基因组DNA的纯度、浓度和得率存在明显的差异。CTAB改良法2和试剂盒法提取的DNA纯度高,可直接用于下游分子生物学实验,CTAB法、CTAB改良法1和SDS法提取的总DNA质量较差,不利于下游的分子生物学实验;五种方法提取的总DNA的得率在10.836~451.709μg/g之间,呈CTAB法>SDS法>CTAB改良法1>CTAB改良法2>试剂盒法的现象。此实验获得的结果可以为短序十大功劳分子生物学研究提供基础。     

大青杨基因组DNA提取方法的比较

本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定.结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73～1.81.与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质.综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法.     

花生DNA提取方法比较

目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。方法:采用SDS法、改进SDS法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.Fw,略小于SDS的60.3,但其A260/A280平均值为1.81,比SDS的1.55更接近标准要求。结论:综合考虑CTAB法是提取花生DNA的最佳方法,可提取到较高质量的DNA,符合分子检测要求;虽然改良CTAB法也相对好于SDS法,但由于步骤增加反而加剧DNA降解。     

药用植物艾纳香基因组DNA提取方法研究

以药用植物艾纳香为研究对象,以-20℃保存、4℃保存、室温自然干燥和硅胶干燥四种样品保存方式,并采用SDS法、CTAB法、SDS-CTAB法和改良CTAB法4种不同的基因组DNA提取方法进行了对比试验,以期建立艾纳香的较好的样品保存方法和基因组DNA提取方法。结果表明,-20℃保存是艾纳香的较理想的样品保存方式;改良CTAB法是艾纳香基因组DNA提取较适宜的方法,该方法提取的DNA经紫外检测,其A_(260)/A_(280)为1.8左右,明显优于SDS法(1.1～1.5)、CTAB法(1.2～1.5)和SDS-CTAB法(1.4～1.6),琼脂糖凝胶电泳、酶切检测和PCR扩增也得出了同样的结论。     

金丝小枣基因组DNA的优化提取方法

采用SDS和CTAB两种方法分离提取金丝小枣基因组DNA,并比较其提取效果。结果表明,改进后的CTAB法可获得高质量、高得率的基因组DNA,可用于金丝小枣的各种分子生物学研究。     

鸢尾属药用植物总DNA提取方法的比较研究

以鸢尾属（Iris L．）药用植物鸢尾Iris tectorum Maxim．叶片为材料,分别采用CTAB法、高盐低pH法、SDS法和试剂盒法四种方法提取植物总DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、ISSR和RAPD四种方法对所提取的DNA样品进行检测。结果表明,用SDS—I法提取的植物总DNA纯度、浓度和完整性都很高,从经济角度考虑优于用试剂盒提取,从提取效果考虑不亚于用CTAB法和高盐低pH法提取,是比较适合鸢尾属植物总DNA提取的方法。     

超声提取枸杞叶总黄酮的工艺研究

目的：优选超声辅助提取枸杞叶总黄酮的提取工艺并探讨枸杞叶的合理采收时期。方法：分别研究乙醇浓度、乙醇用量、超声提取时间、超声时温度四个单因素对提取效果的影响,设计正交试验,所得结果采用方差分析。利用优选出的最佳超声提取工艺测定比较不同采收时期枸杞叶中的总黄酮含量。结果：确定了最佳单因素水平,通过正交试验法优选出超声辅助提取枸杞叶总黄酮的最佳工艺条件为乙醇浓度75％、乙醇用量1：40、超声提取时间30min、超声时温度50℃。结论：通过比较不同采收时期枸杞叶总黄酮的含量,发现总黄酮的含量随枸杞叶生长而下降,结合枸杞果园生产探讨得出枸杞叶合理采摘时期为4月上旬和11月中旬。     

松科植物基因组总DNA提取方法的比较

目的:研究对比了用不同方法提取红松、樟子松和红皮云杉等3种松科植物叶片基因组DNA的效果,以寻找适合提取松科植物叶片基因组DNA的方法。方法:分别比较了用传统的CTAB法、SDS法以及3种改良的CTAB法提取的上述3种松科植物叶片基因组DNA的电泳、纯度和酶切效果。结果:采用不同方法提取的3种松科植物叶片基因组DNA的质量差异较大。结论:常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量松科植物基因组DNA,而改良后的CTAB法的提取效果较好。     

野生山梨基因组DNA提取方法和部位比较

以野生山梨(Pyrus ussuriensis Maxim)嫩叶、一年生枝韧皮部和成熟叶片为材料,分别用CTAB,改良CTAB+高盐+5%PVP和试剂盒3种方法提取基因组DNA,通过测OD值、DNA琼脂糖凝胶电泳和SSR引物扩增检验.结果表明:韧皮部和嫩叶是最理想的提取DNA材料,改良CTAB法是比较理想的方法,试剂盒是提取DNA最简便快捷的有效方法.     

维吾尔药茶昆仑雪菊ISSR分子标记体系的建立

研究适用于昆仑雪菊的ISSR-PCR反应体系,建立ISSR分子标记技术评价昆仑雪菊生态多样性体系。采用改良CTAB法、CTAB区室法、改良CTAB区室法、试剂盒法提取昆仑雪菊的新鲜叶片、干花以及种子的DNA;以827为引物,研究浓度、循环数、退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响,以不同实验材料检测其适宜性。结果表明,昆仑雪菊新鲜叶片、干花以及种子的DNA的最佳提取方法为改良CTAB区室法,ISSR-PCR反应体系的最适引物浓度为1.0μmol·L-1,退火温度为54.6℃,循环数为30。ISSR-PCR反应体系适用于评价昆仑雪菊的生物多样性。     

胡椒叶片基因组DNA提取方法比较

目的：研究建立胡椒叶片中提取高质量DNA的方法。方法：采用各种CTAB法和SDS法的改良方法,提取胡椒叶片中的总DNA,并对DNA进行紫外和电泳检测。结果：改良CTAB法4和5提取的DNA经电泳检测,有一条明亮主带,且无拖尾现象,样品槽无荧光出现,说明抽出的DNA纯度较高,一致性好;测定其OD260和OD280值,并计算其比值,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,提取率在51.667-60.000μg/g之间,获得的基因组DNA质量高。结论：改良CTAB法4和法5可从胡椒幼叶中提取高质量DNA。     

Evaluation of Five Methods for Total DNA Extraction from Western Corn Rootworm Beetles

Background

DNA extraction is a routine step in many insect molecular studies. A variety of methods have been used to isolate DNA molecules from insects, and many commercial kits are available. Extraction methods need to be evaluated for their efficiency, cost, and side effects such as DNA degradation during extraction.

Methodology/Principal Findings

From individual western corn rootworm beetles, Diabrotica virgifera virgifera, DNA extractions by the SDS method, CTAB method, DNAzol® reagent, Puregene® solutions and DNeasy® column were compared in terms of DNA quantity and quality, cost of materials, and time consumed. Although all five methods resulted in acceptable DNA concentrations and absorbance ratios, the SDS and CTAB methods resulted in higher DNA yield (ng DNA vs. mg tissue) at much lower cost and less degradation as revealed on agarose gels. The DNeasy® kit was most time-efficient but was the costliest among the methods tested. The effects of ethanol volume, temperature and incubation time on precipitation of DNA were also investigated. The DNA samples obtained by the five methods were tested in PCR for six microsatellites located in various positions of the beetle''s genome, and all samples showed successful amplifications.

Conclusion/Significance

These evaluations provide a guide for choosing methods of DNA extraction from western corn rootworm beetles based on expected DNA yield and quality, extraction time, cost, and waste control. The extraction conditions for this mid-size insect were optimized. The DNA extracted by the five methods was suitable for further molecular applications such as PCR and sequencing by synthesis.     

转基因棉籽检测中DNA模板提取方法研究

在转基因棉籽的检测中,需要得到合适的DNA模板,以进行PCR扩增。应用CTAB1,CTAB2,KIT,KIT1,SDS等五种DNA模板提取方法提取转基因棉籽中的DNA模板,根据模板DNA的OD260/OD380值,波长扫描,琼脂糖凝胶电泳,3个基因的PCR扩增结果,评价五种DNA模板提取方法的提取效果,发现以KIT1方法提取棉籽中DNA模板效果为好,可用于实际检测中。     

香蕉RAPD分析初步研究

比较了不同提取方法对香蕉植株不同部位组织提取 DNA的质量及其 PCR扩增结果 ,对香蕉 RAPD分析中引物种类和浓度 ,复性温度 ,d NTPs,Taq DNA聚合酶浓度 ,热循环数等因素进行了比较影响分析。结果表明 ,虽然改良的 SDS法、CTAB法和 PVP法提取的植株嫩叶和吸芽 DNA提取量和纯度各不相同 ,但其 PCR扩增结果基本相同 ;相同克隆不同植株的 DNA其 PCR扩增结果也基本相同 ;建立了适合香蕉大规模 DNA多态性分析 RAPD反应体系 :2 5 μL反应液中 ,含 1倍缓冲液 ,0 .2 m Md NTPs,0 .3 2 p M随机引物 ,IUTaq酶 ,2 0 ng模板 DNA;反应循环数为 45 ,热循环条件为 94°C,1 min;3 7°C,1 min;72°C,1 .5 min;之前为 94°C,5 min;之后为72°C,1 0 min。在筛选的 2 49个随机引物中 ,有 1 8个在 7个品种上都能扩增出 3～ 1 0条比较清晰条带。     

大青杨叶片总RNA的快速提取方法

目的:寻求快速提取大青杨叶片总RNA的方法。方法:分别用改良CTAB法、改良SDS法、改良TRIzol法及某公司总RNA提取试剂盒提取大青杨叶片总RNA,并用紫外光谱分析、凝胶电泳方法对提取的总RNA进行鉴定。结果:用改良CTAB法和改良TRIzol法能有效地去除蛋白及多糖,提取到的总RNA纯度高,D260nm/D280nm分别为2.05和1.78,RNA的完整程度优于试剂盒法。结论:改良CTAB法为大青杨叶片总RNA的最佳提取方法。