链分离凝胶电泳技术

由于某些原因,(例如,用Maxam—Gibert方法测定序列;与低含量RNA杂交。)有时需要获得双链相互分离的DNA分予片断。通常采用的方法是让变性的DNA在中性琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。许多DNA片断的两条互补链在凝胶中有不同的迁移率,其原因尚不清楚。     

人胃液乳酸脱氢酶同工酶定量电泳测定方法

本文介绍一个琼脂糖凝胶电泳定量测定胃液乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的简易方法。包括一个灵敏的染色程序和光密度扫描,或洗脱比色。并完全适用于血清和组织抽提液中LDH同工酶分析。血清和组织提取液LDH同工酶的分离检测,最初用淀粉凝胶和琼脂凝胶电泳,四氮唑蓝(NBT)染色,以后用醋酸纤维薄膜电泳1961年提出的琼脂糖凝胶电泳,优于纸电泳和琼脂电泳的是:(1)无吸附作用,(2)含荷电基团少,电     

甜樱桃品种SSR-PCR反应体系的优化

以甜樱桃品种那翁为试材,研究了樱桃SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响,并比较了采用聚丙稀酰胺凝胶及琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异.结果表明:在PCR反应体系中,DNA最适浓度30～45 ng;Mg2+的最适浓度范围为1.5～3.0 mmol/L;dNTP最适浓度为0.2～0.3 mmol/L;引物的最适浓度为0.3～0.4 μmol/L;Taq聚合酶在20 μl反应体系中宜加入0.5 U.利用此反应体系,对24份樱桃代表资源进行了SSR反应,用6%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测,扩增产物在100～250 bp之间,不同品种间DNA谱带多态性丰富.琼脂糖电泳检测的DNA多态性不如聚丙稀酰胺凝胶丰富.     

琼脂糖电内渗对电泳的影响

用电内渗不同(0、0.03、0.08、0.20mr)的琼脂糖制成凝胶或电极缓冲液凝胶条,观察对电泳行为的影响.结果表明等电聚焦电泳必须使用无电内渗琼脂糖.不同电内渗的琼脂糖制成的电极缓冲液凝胶条对SDS电泳无显著影响,但对常规聚丙烯酰胺凝胶电泳有不同程度的影响,电内渗越高,越不利于电泳的进行.     

快速简易凝胶板干燥方法

琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳广泛应用于生物化学及免疫化学等研究方面。人们希望能将电泳凝胶板制成干片,以便进行放射自显影或使电泳结果可以长期保存。国内外已有凝胶真空干燥器生产,可以使凝胶板在加热和真空情况下迅速干燥。但价格昂贵,而且每次只能干燥1—2片,不能适应大量干燥凝胶板的需要。虽然Ginlian和王育东在室温下用简易方法干燥凝胶板,但凝胶板需先用甘油预处理     

实验2 回收DNA限制性酶切片段

一、琼脂糖凝胶电泳洗脱回收 1.DNA经限制性内切酶消化后,琼脂糖凝胶电泳。在紫外灯下检测确定需要回收的DNA条带,用刀片将含此条带的凝胶切下。 2.透析袋里装满电泳缓冲液,将切下的凝胶条块装入透析袋,挤出多余的缓冲液,袋里只留下少量缓冲液且无气泡。 3.让透析袋里的凝胶切断面同电流方向垂直。透     

在葡聚糖G—200凝胶柱上的垂直电泳

本文作者Tedesco等阐述的在葡聚糖凝胶过滤柱上的垂直电泳法,提供了一个各分级成份快速回收的多面技术,而不涉及被分离成份的移动速率。文中报导了此种方法在两个方面的应用:(1)自人肝脏中分离电泳均一性的半乳糖—1—磷酸尿甙转移酶,(2)分离由凝胶过滤得到的人血清组成部分的各单一成份。     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。     

PCR-SSCP分析方法的优化

目的：优化PCR-SSCP分析方法。方法：选择野生型Kir2．3质粒和突变型Kir2．3（2123L）质粒为样本,其PCR结果的鉴定采用2％的琼脂糖凝胶EB显色,SSCP分析采用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶DNA银染显色。PCR产物变性比较了三种方法：即碱变性、SDS变性、直接变性。聚丙烯酰胺凝胶根据丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺及甘油的比例设计了六个实验组,每组采用两种条件电泳,即：30mA恒流快速电泳和100V恒流过夜电泳。结果：选择直接变性的PCR产物作为变性上样液,并确定了三种凝胶配及该条件下适用的电泳条件。即：丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为49比1,凝胶中含1％甘油,4℃,500V高压电泳3min接着30mA恒流快速电泳3h;丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为49比1,凝胶中含5％甘油,4℃,500V高压电泳3min接着30mA恒流快速电泳3h;丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29比1,凝胶中不合甘油,4℃,500V高压电泳3min接着100V恒流过夜电泳12h。结论：条件优化的PCR-SSCP是一种筛查基因突变简便、有效的实验方法。     

云南省元江县白族人红细胞EsD和PGM_1分型的调查

采用淀粉/琼脂糖混合凝胶同步电泳法,对云南省元江县126例白族人红细胞EsD和PGM_1作了分型调查,计算出这两种红细胞同乙酶的基因频率及识别能力,结果表明云南省元江县白族与上述两地居民(汉族)的红细胞EsD和PGM_1表型分布无显著性差异。     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小麦基因组DNA RAPD扩增产物的方法学比较

通过20%(wv)的琼脂糖凝胶和5%(wv)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对小麦白粉病抗、感特性品种基因组DNA的RAPD检测结果表明:5%聚丙烯酰胺凝胶对线性DNA分子(01～20kb)和长度相差100bp以下的DNA分子的分离较20%的琼脂糖凝胶电泳效果好。因此,我们研究出了一项利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测小麦白粉病抗、感特性的新技术,在工作中建立了一种适合于检测小麦基因组DNA结构差异的电泳方法。该方法主要包括:(1)丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比;(2)分离DNA片段的最佳凝胶浓度;(3)电泳条件;(4)脱色、漂洗、银染、显色过程。实验发现,该技术对于小麦白粉病抗、感特性检测中的小片段和长度相差100bp以下的线性DNAPCR扩增结果的分辨效果较好。应用该技术在抗感品种间已经发现了DNA水平上的差异。     

16份石榴RAPD扩增产物的两种电泳方法检测及其序列特征

本实验以16个石榴品种为实验材料,筛选出10个重复性及多态性均较好的引物进行RAPD分析。分别采用琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测方法对PCR扩增结果进行检测并对其结果进行比较,结果显示,两种电泳方式均能得到较为清晰的扩增条带,且两种电泳方式获得的条带总数及多态性条带数均有所不同,琼脂糖凝胶电泳方法共检测出76条带,其中有43条为多态性谱带,多态性比率为56.4%;而在PAGE电泳方法共检测出123条谱带,多态性谱带数为87条,多态性比率为70.95%。PAGE电泳方法检测出的条带数约为琼脂糖凝胶电泳方法检测出条带数的1.5倍。基于两种电泳方法所得RAPD标记的多态性位点,利用NYSYS软件计算遗传相似系数,并构建遗传关系聚类图,分析结果显示,石榴遗传多样性丰富,两种电泳方法所得聚类结果大致相同,可以利用RAPD分子标记及两种电泳检测方法对不同数量的石榴进行分子水平的品种鉴定和遗传多样性的分析。同时通过对来自几个引物随机挑选的17个片段进行克隆,测序结果显示17个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,其中有3条是编码蛋白的基因片段,表明了RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时也可以扩增编码蛋白的基因片段,这为更好地认识RAPD技术的实质以及促进石榴产业的发展提供了理论依据。     

江豚MDH与ADH同工酶电泳研究

用琼脂糖凝胶载玻片电泳方法测定了江豚(Neophocaena phocaenoides)体内几种组织的MDH和ADH同工酶。测定结果表明,各组织MDH同工酶酶谱基本相同,ADH同工酶酶谱呈现一定的组织特异性,且各同工酶活性可因底物或pH的改变而变化。     

拟南芥SSR检测体系的优化

以拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼苗为实验材料,采用单因素筛选法及L16(45)正交实验方法,对简单序列重复(SSR)技术中聚合酶链式反应(PCR)组分、扩增程序、电泳检测等环节进行优化。优化25μl反应体系为:1×PCR Buffer、20ng模板DNA、1.5mmol.L-1Mg2+、0.3μmol·L-1引物、150μmol·L-1dNTPs和1.0U Taq DNA聚合酶。扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸45s,共30个循环,72℃延伸10min。用非变性聚丙烯酰胺凝胶(EB染色)电泳检测并取得较好效果。利用该体系进行扩增,所得谱带清晰、稳定、非特异性带少。     

人参果胶中蛋白质与多糖关系的研究

从人参（Panax ginseng)热水根取物中,分离出两个蛋白多糖级份（PA,PB）,琼脂糖4B凝胶柱层析结果表明,二者均为单一分布峰,通过氨基酸分析,气相色谱分析,β-消去反应,部分酸水解,果胶酶水解,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳等生化分析,确定PA,PB均含有苏氨酸与多糖中糖残基以－O－糖甙键相连的共价结合蛋白质;另外PB中尚存在另一种形式蛋白质,其中精氨酸等碱性氨基酸丰富（占PB中蛋白质59．9％）,圆盘电泳结果表明：这部分蛋白质与多糖中的半乳糖醛酸残基靠静电力结合,等电点为9．1。     

’93国际电泳学术会议在挪威召开

’93国际电泳学术会议(International Council ofElectrophoresis Societies,ICES-ELPHO 93)于1993年6月1日至4日在挪威美丽迷人的海滨小城 Sandefjord举行.我作为唯一的中国代表(由瑞典 Pharmacia LKB公司资助)参加了会议.参加会议的共有200多人.大多来自欧洲各国,其次是美国和日本.世界上著名的电泳权威都出席了会议.会议的第一天有四个专题学习班可任意选择参加.这四个专题是:“用固相 pH 梯度等电聚焦作为第一向的双向电泳”,“毛细管电泳”,“使用琼脂糖凝胶的滴定曲线技术和快速转移”,“电泳谱带的图像分析”.学习班介绍的内容都是当前电泳的前沿技术,在学习班上每个学员都可以进行操作练习.会议有八个专题报告:     

人珠蛋白信使核糖核酸的制备及其体外翻译

本文以新生儿ABO血型不配溶血换得的血网织红细胞为材料,用酚-氯仿提取及Oligo(dT)纤维素亲和层析制备了人珠蛋白mRNA。并在变性条件下经琼脂糖凝胶电泳鉴定,证明它是9～10S的RNA。人珠蛋白mRNA在兔网织红细胞溶解物与麦胚体外翻译体系中的翻译活性与其浓度均有依赖关系。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳及萤光显影鉴定了无细胞体系的翻译产物为人珠蛋白;并以醋酸纤维膜电泳分析了体外合成的人珠蛋白肽链组成,结果表明新生儿血中珠蛋白mRNA合成的α、β、γ珠蛋白肽链之比为3:1:2。     

人珠蛋白信使核糖核酸的制备及其体外翻译

本文以新生儿ABO血型不配溶血换得的血网织红细胞为材料,用酚-氯仿提取及Oligo(dT)纤维素亲和层析制备了人珠蛋白mRNA。并在变性条件下经琼脂糖凝胶电泳鉴定,证明它是9～10S的RNA。人珠蛋白mRNA在兔网织红细胞溶解物与麦胚体外翻译体系中的翻译活性与其浓度均有依赖关系。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳及萤光显影鉴定了无细胞体系的翻译产物为人珠蛋白;并以醋酸纤维膜电泳分析了体外合成的人珠蛋白肽链组成,结果表明新生儿血中珠蛋白mRNA合成的α、β、γ珠蛋白肽链之比为3:1:2。     

人参果胶中蛋白质与多糖关系的研究

从人参（Panax ginseng)热水根取物中,分离出两个蛋白多糖级份（PA,PB）,琼脂糖4B凝胶柱层析结果表明,二者均为单一分布峰,通过氨基酸分析,气相色谱分析,β-消去反应,部分酸水解,果胶酶水解,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳及等电聚焦电泳等生化分析,确定PA,PB均含有苏氨酸与多糖中糖残基以－O－糖甙键相连的共价结合蛋白质;另外PB中尚存在另一种形式蛋白质,其中精氨酸等碱性氨基酸丰富（占PB中蛋白质59．9％）,圆盘电泳结果表明：这部分蛋白质与多糖中的半乳糖醛酸残基靠静电力结合,等电点为9．1。     

新疆大麦条纹花叶病毒的研究——Ⅰ.病毒株系类型的鉴定及核酸的体外翻译

我国大麦条纹花叶病毒(BSMV)新疆分离物的RNA,在50％甲酰胺6％甲醛中,50℃处理15分钟,使RNA分子链呈真正的均一状态后,在含甲醛的琼脂糖凝胶上电泳,核酸变性电泳结果显示该病毒为三组分RNA株系,编号为RNA_1,RNA_2,RNA_3,分子量分别为1.40—1.44×10~(?),1.20—1.28×10~0,1.06—1.09×10~6。经制备凝胶电泳分离出的各RNA组分在兔网织红细胞溶胞液的无细胞体系中,RNA_1的翻译产物为120K的蛋白,RNA_2翻译产物主要为25K和一个85K蛋白,其中25K蛋白由于与天然BSMV外壳蛋白共电泳,该蛋白中没有甲硫氨酸,以及能被BSMV抗血清沉淀,而被确定为BSMV外壳蛋白。RNA_3的翻译产物为75K蛋白。