几种丝状真菌原生质体的形成与再生

本文报道从黑曲霉、米曲霉、酱油曲霉、康宁木霉、拟青零等工业上有重要用途的7种丝状真菌菌丝制备原生质体,以及对这些真菌原生质再生过程中形态学变化进行观察的结果。实验表明用商品纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶配成的混合酶液,可成功地对上述丝状真菌制备出原生质体。在所有供试菌株中均观察到由原生质体直接长出菌丝,及原生质体先形成酵母状物再长出菌丝这两类再生方式。     

黑曲霉原生质体的形成、分离与再生的研究补*

本文研究了从黑曲霉中获得原生质体的各种条件（例如渗透压稳定剂、温度、菌龄、培养基的成分、 酶索统等）。结果表明,采用0.5lo蜗牛酶和1％ 纤维素酶的混合溶液酶解菌丝体,可获得大最的原生 质体。该原生质体用。．8mol/L N“ 作为渗透压稳定剂在再生培养基上再生率为50 %.     

米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验*

采用1%溶壁酶加1%玛瑙螺酶(褐云玛瑙螺消化液的冷冻干粉)的混合酶,自米曲霉(Aspergillus oryzae)的两株营养缺陷型中获得了大量的原生质体,并比较了渗透压稳定剂、温度、菌丝体的培养基成分等因素对原生质体形成和再生的作用。无机盐类稳定剂(NaCl、KCl)获得了高产量的原生质体,而有机类(蔗糖、甘露醇、山梨醇)做为稳定剂不甚理想。对120和720菌株的原生质体在高渗再生培养基上进行再生试验,再生率分别为52%和65%。     

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件,用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞,原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１,渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中,酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响,可确定最佳再生条件,再生率达３０％以上．     

康氏木霉B—7和黑曲霉X—15原生质体的形成和再生

研究了康氏木霉B－7和黑曲霉X－152株纤维素酶高产菌株的原生质体制备与再生。结果表明,采用纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合酶液,可成功地制备2株真菌的原生质体。其中,B－7以这3种酶的配比6：5：2为最佳,X－15以8：4：2为最佳。原生质体形成的缓冲液系统均以0．2mol/L,pH6．0磷酸盐缓冲液为宜,渗透压稳定剂则分别以0．6mol/LNaCl和0．6mol/L蔗糖为宜。以菌龄18h（B-7）和16h（X－15）2株真菌的菌丝体,在37℃下酶解90min可获得最适量的原生质体,产量分别达9×106个／ml和1．9×107个／ml,且其再生率也较高,均达95％左右。     

灰绿拟青霉U—2原生质体形成和再生条件研究

发绿拟青霉U－2原生质体形成和再生的较为适宜的条件为：YD培养48～52h,用0．15％流基乙醇预处理0．5h,以pH650．6MKCl作为渗透压稳定剂,用1％真菌治壁酶于28℃酶解4h;在合1％琼脂的再生培养基上再生。     

灵芝原生质体分离与再生研究*

首次详细、系统地探讨了灵芝原生质体分离与再生的条件,结果表明：用0．6mol／L甘露醇配制成含2％溶壁酶和0．5％崩溃酶的复合酶,在30℃,pH为6.0时酶解3小时,可得到最高的原生质体得率。但考虑到原生质体的再生,以酶解2．5小时为最适。酶解2．5小时所得原生质体经精制,用纤维二糖培养基（以0.6mol／L甘露醇为渗透压稳定剂）进行双层平板（上层平板含0．2％琼脂）培养法再生,原生质体的再生率最高。本研究为以后进行灵芝原生质体的融合以及灵芝的转基因研究打下了基础。     

羊肚菌原生质体制备与再生*

羊肚菌原生质体制备的最佳条件为以培养3d的菌丝体为材料,0.6mol/L蔗糖溶液为稳渗剂,1.5%浓度的溶壁酶30℃条件下酶解3个小时,可得原生质体产量最高为3.35×106个/100mg.以0.6mol/L的蔗糖溶液做稳渗剂,CYM再生培养基上得到原生质体再生率为0.171%.这一研究结果为羊肚菌通过原生质体技术进行菌株的遗传改良提供了重要技术参数.     

米曲霉原生质体的营养互补融合及二倍体的诱发分离*

采用1％溶壁酶加1％蜗牛酶的混合液获得的原生质体,以30％聚乙二醇(MW=6,000)、0.01M CaCl_2、0.05M Gly做为融合剂,对米曲霉进行了原生质体的营养互补融合,融合频率为0.27—0.47％。自4个菌株的4对杂交组合中获得了异核体,并分离到97株绿色融合株。二倍体的孢子经PFA和UV诱发分离后,获得了二株生长速度快、蛋白酶活性高和产孢能力强的单倍体菌株。     

固定化原生质体生产葡萄糖氧化酶*

用溶壁酶处理对数生长前期的黑曲霉GP 024细胞,分离得到原生质体,再用光交联树脂包埋制备固定化原生质体,用于生产葡萄糖氧化酶。其胞外葡萄糖氧化酶的比产率几乎达到相应的游离细胞生产的胞内和胞外全部葡萄糖氧化酶的比产率。用光交联树脂制备的固定化黑曲霉细胞的产酶特性与游离细胞相似,而用溶壁酶处理过的固定化细胞的产酶特性与固定化原生质体相似。     

米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验

采用1%溶壁酶加1%玛瑙螺酶(褐云玛瑙螺消化液的冷冻干粉)的混合酶,自米曲霉(Aspergillus oryzae)的两株营养缺陷型中获得了大量的原生质体,并比较了渗透压稳定剂、温度、菌丝体的培养基成分等因素对原生质体形成和再生的作用。无机盐类稳定剂(NaCl、KCl)获得了高产量的原生质体,而有机类(蔗糖、甘露醇、山梨醇)做为稳定剂不甚理想。对120和720菌株的原生质体在高渗再生培养基上进行再生试验,再生率分别为52%和65%。     

古尼虫草小孢变种无性型原生质体制备及再生条件的研究

以从古尼虫草小孢变种Cordyceps gunnii var.minor上分离的无性型古尼拟青霉小孢变种Paecilomyces gunnii var.minor G106M为出发菌株,进行原生质体制备及再生条件的研究。将培养16h的菌丝体用溶壁酶和蜗牛酶的混合酶液于28℃酶解1.5~2h,原生质体产量可达3.74×107/mL。以培养12h的菌丝制备的原生质体在0.6mol/L氯化钠的SDAY培养基上再生率最高,为17.92%。     

多变小冠花(豆科牧草)原生质体和外植体胚状体的形成和植株的再生

EM-5游离大量的多变小冠花实生苗子叶原生质体。Kao的原生质体培养基使子叶原生质体分裂形成细胞团。MSD_4诱导多变小冠花原生质体愈伤组织产生胚状体、苗和植株的分化。MS-1诱导多变小冠花实生苗根、下胚轴和子叶愈伤组织的形成,胚状体、苗和值株的分化。根愈伤组织胚状体形成的频率(60%)高于子叶和下胚轴的(<23%)。组织切片的观察表明多变小冠花原生质体植株的再生通过胚状体形成的途径。     

食用菌原生质体巨大化及其再生的初步观察

通过观察几种食用菌原生质体的巨大化过程,发现含有细胞壁裂解酶的高渗营养液是比较理想的巨大化反应液;巨大化反应不同时间的原生质体再生率有“高→低→高”的起伏变化;巨大化后原生质体再生率普遍提高。最后测定了巨大化时间、渗透压稳定剂、培养基及其碳源等对巨大化原生质体再生率的影响。     

山东海岸木生海洋真菌的研究I.(英文)

为调查中国黄海海域的丝状海洋真菌,从山东威海潮间带海滩收集了沉没木、附着木和沙埋木,并从其上分离到7种高等海洋真菌。Arenariomycestrifurcata,Corollosporamaritima,Alternariamaritima,Trichocladiumachrasporum为中国大陆新记录种,Chaetomiunglobosum,Tetraploaaristata,Torulasp.为中国大陆新生境报道。对每个种作了描述并对分类和形态进行了讨论。     

细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞壁再生的研究

采用透射电镜术、电镜多糖细胞化学染色、细胞壁荧光染色以及香豆素抑制细胞壁再生等方法,对细叶黄芪（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｍ ｅｌｉｌｏｔｏｉｄｅｓ ｖａｒ．ｔｅｎｕｉｓ）叶肉原生质体细胞壁的再生及其化学特点进行了研究。结果表明,离体培养２４ 小时的原生质体表面产生一些突起小泡,有时可见少量纤维组分的形成。培养３ 天时这种纤维组分明显增多。至５ 天时可清楚看到再生壁是由纤维和颗粒构成。六亚甲四胺银染色证明它们都是由多糖组分组成的。另外,培养３６ 小时的原生质体有相互粘连的现象。电镜观察、荧光染色及香豆素处理的研究表明粘连与再生壁的形成有关。根据上述观察结果,对原生质体再生壁的结构及其化学性质等问题进行了讨论     

小麦外稃和内稃愈伤组织直接再生小穗和雌蕊状结构的研究

以小麦稃片为外植体,在MS附加不同外源激素的培养基上,成功地从愈伤组织上直接诱导了小穗和雌蕊状结构的再生。实验表明,附加2,4-D 2mg/L和6-BAP 0.1mg/L有利于外植体形成愈伤组织;附加2,4-D 1.0mg/L和6-BAP 2mg/L有利于外稃和内稃愈伤组织直接再生小穗;附加2,4-D 0.01mg/L和6-BAP 1.0mg/L有利于内稃愈伤组织直接再生雌蕊状结构。本文还观察了小穗和雌蕊状结构再生过程的形态学变化,并对诱导花芽和性器官再生的某些要点进行了讨论。