人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用

卵泡刺激素（FSH）对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生命作用已被普遍接受,但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同,关于表皮生长因子（EGF）对腔前卵泡的作用尚不确切,本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素（rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用,利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞－颗粒细胞复合体（OGCs)(Fig.1)。体外每孔30－40个培养物并分别添加胎牛血清（FBS）,rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径,并每天照相,结果显示,rechFSH显著促进小鼠OGCs 及其卵母细胞的体外发育,这一作用可被EGF进一步增强（P＜0．05）（Fig.2),但到第八天培养结束时,培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内期生长对照组（P＜0．05）（Fig.3),说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。     

卵泡刺激素和表皮生长因子对小鼠精原细胞增殖的影响

利用生殖细胞-体细胞体外无血清共培养模型研究了卵泡刺激素(FSH)和表皮生长因子(EGF)对小鼠A型精原细胞增殖的影响。精原细胞在ITS培养液(添加胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠的DMEM)中培养24h后进行c-kit免疫细胞化学鉴定和EGF及其受体(EGFR)免疫细胞化学检测,72h后测定其形成集落数的情况。结果表明:ITS培养液能维持生殖细胞的活性,增殖细胞核抗原(PCNA)的表达增高。A型精原细胞呈c-kit阳性,EGF和EGFR主要表达于精原细胞。单独的FSH(1～100ng/ml)或EGF(1～10ng/ml)显著促进精原细胞集落数的增加。此外,EGF(0.1ng/ml)联合FSH(10ng/ml)具有加性效应,但更高剂量的EGF(1～10ng/ml)则降低了FSH的刺激作用。结果说明FSH可联合适量的EGF促进精原细胞的增殖。     

重组人表皮生长因子对大鼠表皮细胞促生长作用的观察

利用体外培养的自体表皮细胞来覆盖烧伤切痂创面已成为当前烧伤整形领域的一个研究课题。其中一个重要的问题是如何促使培养的表皮细胞尽快地增值,扩展成片,以应用于创面的修复和愈合。 人表皮生长因子(hEGF)是存在于人体内的一种重要的多肽生长因子,对多种组织来源的上皮和表皮     

高尔基体对小鼠卵母细胞体外发育进程的影响

目的初步探讨高尔基体在小鼠卵母细胞体外发育进程中的作用。方法布雷菲德菌素A（Brefeldin A,BFA）处理小鼠未成熟,成熟卵母细胞,利用特异性标记物阻COP标记高尔基体。激光扫描共聚焦显微镜观察BFA处理对高尔基体产生的影响;同时。观察并比较不同处理组小鼠未成熟／成熟卵母细胞的体外成熟率、孤雌激活率、体外受精率及2-细胞率。结果GV期卵母细胞经BFA处理后,高尔基体的形态和分布发生明显改变。其体外成熟率（2．5％）与对照组（70．4％）比较统计学差异显著（P〈0．001）;洗掉BFA后,其体外成熟率（67．2％）与对照组无统计学差异（P〉0．05）。另外,成熟卵母细胞经BFA处理后。其体外受精率及2．细胞率均与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论小鼠卵母细胞体外成熟的正常进行需要高尔基体主导的膜运输。而体外受精和受精卵卵裂过程中不需要功能性的高尔基体。     

小鼠卵巢冷冻移植后卵泡发育和卵母细胞成熟的研究

本研究探讨了冷冻保存的1日龄小鼠卵巢异体异位移植后,其原始卵泡重新启动生长发育的能力。一日龄B6C2F．小鼠卵巢分离冷冻后置液氮中保存,保存1周。6个月后解冻,并将卵巢移植到8-12周龄B6C2F．受体鼠。肾脏包膜下,移植至少14d。每侧肾囊移植2枚卵巢的40只受体鼠中卵巢的回收率为45．00％（72／160）,而每侧。肾囊移植l枚卵巢的20只受体鼠的回收率为82．50％（33／40）。移植卵巢上卵泡的发育基本与体外自然生长鼠的卵巢卵泡发育情况一致。对卵巢移植19d的受体鼠用孕马血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG）处理后,从移植卵巢上发育成熟卵泡中获得的卵母细胞在MEM0c培养基中培养16-17h,有40．90％的卵母细胞发生生发泡破裂（germinal vesicle breakdown,GVBD）,其中89．02％的卵母细胞发育到第二次减数分裂中期（metaphaseⅡ,MⅡ）。将剩余的卵母细胞继续培养到20～21h,又有50．83％的卵母细胞发生生发泡破裂,但其中只有21．40％的卵母细胞能够发育到MII期。以上结果说明,小鼠早期卵巢经过冷冻．解冻并异体异位移植后,其原始卵泡能够重新启动生长发育,发育后的卵泡卵母细胞能够在体外培养成熟。这些结果意味着原始卵泡或卵巢冷冻一移植技术有可能充分利用雌性生殖细胞用于濒危动物保种、建立动物基因库和人类辅助生殖等。     

猪卵泡内环境对其卵母细胞体外成熟与发育的影响

目的：研究猪卵泡内环境对卵母细胞体外成熟,受精及受精卵体外发育的影响。结果：直径≥5mm,4-4.9mm,3-3.9mm,2-2.9mm的卵泡内卵母细胞体外成熟率分别为90．5％,89．7％,85．4％和67．4％。体外受精后,受精卵的发育能力随卵泡直径的增大而增强,来自直径≥5mm和4－4．9mm卵泡的受精卵发育到2－细胞,3－4细胞的比率显高于来自直径2－2．9mm的卵泡受精卵（P＜0．05或0．01）,体外成熟培养36,42,48小时,直径2－2．9mm卵泡卵的体外成熟率,体外受精后的卵裂率差异不显（P＞0．05）。在体外成熟培养液中添加5％或15％的不同直径卵泡的卵泡液,各组间卵母细胞的体外成熟率,受精卵的体外发育率均无显差异。结论：卵泡大小对猪卵母细胞体外成熟,受精及受精卵体外发育有重要影响。     

猪卵泡内环境对其卵母细胞体外成熟与发育的影响

猪卵泡内环境对其卵母细胞体外成熟与发育的影响@钱云$南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室! 中国 南京210029 @丁家桐$扬州大学畜牧兽医学院!　　中国扬州225009 @刘嘉茵$南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室! 中国 南京210029 @沙家豪$南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室! 中国 南京210029 @周作民$南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室! 中国 南京210029 @范必勤$江苏省农科院! 中国 南京210024     

小鼠胚胎卵巢卵泡体外无血清培养体系的建立(英文)

调节原始卵泡形成、起始生长的信号目前仍知之甚少。一个重要的原因就是缺乏一个良好的研究模型。我们以妊娠１３天昆明白小鼠胚胎卵巢为研究材料,经过５天的贴壁培养后,分别用牛血清（ＦＢＳ）、无血清（ＩＴＳ）和含有人卵泡刺激素（ＦＳＨ－ＩＴＳ）培养液继续体外培养到第１９天,发现ＩＴＳ组培养的胚胎卵巢卵泡发育要显著优于ＦＢＳ组（Ｐ＜０．０１）,如：培养至第７天时（Ｐ１,相当于出生日）,卵泡数分别为２９５±１８和 ２０６±１７;培养至第１３天时（Ｐ７）,卵泡数分别为 ５９４±３１和 ２６２±２８;培养至第１９天时（Ｐ１３）,卵泡数分别为 ３７１±２５和 ５０±１１（Ｆｉｇ．１,２＆４）。ＩＴＳ处理组的绝大部分卵巢在培养早期（如：Ｐ５前）都形成了皮质－髓质样的卵泡生长模式,而ＦＢＳ处理组超过半数卵巢不能形成皮质一髓质样的卵泡生长模式;ＦＳＨ－ＩＴＳ处理组和ＩＴＳ处理组的胚胎卵巢卵泡发育并无显著差异（Ｆｉｇ．２,４＆５）。 结果提示所建立的以ＩＴＳ为血清替代物的无血清培养模型更益于小鼠胚胎卵巢卵泡的体外发育;ｈＦＳＨ不是小鼠胚胎卵巢早期发生发育所必须的。     

蛋白水解酶复合体抑制剂lactacystin对小鼠卵母细胞减数分裂和初次卵裂的作用

为探讨泛素-蛋白水解酶复合体通路(UPP)在小鼠卵母细胞减数分裂和卵裂中的作用, 使用蛋白水解酶复合体特异性抑制剂lactacystin作用于减数分裂不同时期的卵母细胞和受精卵, 结果发现, lactacystin对GVBD的发生无明显影响, 但可明显抑制随后的减数分裂进程, 使极体排放受阻, 引起超排卵母细胞的孤雌激活率下降, 并抑制第一次卵裂. β-tubulin免疫荧光染色显示lactacystin抑制减数分裂微管的组装和纺锤体的形成; 对已进入中期的卵母细胞使用lactacystin, 则对中期纺锤体形态无影响. lactacystin还可使受精卵阻滞于间期或第一次有丝分裂中期. 免疫荧光染色还显示蛋白水解酶复合体催化亚单位PA700在GV期定位在GV及其周围区域, 在中期定位于纺锤体区域. 以上结果表明UPP对小鼠卵母细胞减数分裂和早期卵裂是必需的, 且对减数分裂的作用是多方面的, 在前期与纺锤体的正常形成有关, 而在中期则为染色体的分离和进入后期所必需.     

绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响

目的　利用在培养液中添加绵羊卵泡液和次黄嘌呤 ,抑制卵母细胞GVBD发生 ,延长转录活性 ,从而使卵母细胞真正成熟 ,提高胚胎质量及生产效率。方法　利用体外成熟技术对有屠宰采集的绵羊卵母细胞进行培养 ,培养液中添加卵泡液及次黄嘌呤 ,检查成熟效果。结果　将卵母细胞培养在 5 0 %和 10 0 %的卵泡液中 ,2 4h后处于GV期的卵母细胞分别为 19% (8 4 2 )和 33 3% (13 39)。在含有 4mmol L次黄嘌呤的培养液中 ,2 4h后有2 1 6 % (16 74 )的卵母细胞处GV期 ,而对照组中只有 6 % (3 5 0 ) ,经过次黄嘌呤处理的卵母细胞多数都停滞于PⅠ期(44 6 % ,33 74 )。在 4mmol L次黄嘌呤培养液中添加FSH并未使受到抑制的卵母细胞诱导成熟。结论　卵泡液和次黄嘌呤只能在有限的程度上抑制减数分裂的重新启动 ,并对减数分裂的全过程都有影响 ,这种影响程度与抑制因子的浓度相关 ,存在明显的剂量效应。     

大肠杆菌表达重组人生长激素的纯化

目的 :获得具有生物学活性的重组人生长激素 (rhGH)。方法 :PBV -GH/DH5α菌体经超声破菌、反复洗涤后获得包涵体。将包涵体变性、复性 ,用硫酸铵盐析 ,离子交换层析和凝胶层析进行纯化。产物经SDS -PAGE、HPLC、N末端 15个氨基酸序列检测验证。结果 :终产物rhGH纯度达 98.2 % ,比活性大于 3.0IU/mg。分子量为 2 2kDa ,N末端氨基酸序列与DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。结论 :从自构建的PBV -GH/DH5α工程菌中获得高纯度、高活性重组人生长激素。其纯化工艺为中试生产提供可靠依据。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的:通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法:实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素+奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC-7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果:体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC-7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素+奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性(P>0.05),细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加(P<0.01),同时重组人类生长激素+奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素+奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论:体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

表皮生长因子对精原干细胞的作用机理

为了探究表皮生长因子(EGF)对体外培养的精原干细胞增殖的调控作用及其作用机制.应用不连续Percoll梯度液和选择性贴壁法分离纯化精原干细胞,c-kit细胞免疫组化鉴定细胞,MTT法研究EGF对精原干细胞增殖的效应,再加入JAK-STAT信号通路特异性抑制剂AG490,探究EGF对精原干细胞增殖作用的可能机制.c-kit细胞免疫组化结果显示分离得到细胞为精原干细胞;MTT结果显示各实验组比对照组细胞数量均有显著增多(P0.01);与对照组相比,加入AG490组的活细胞数有显著下降(P0.01).实验结果表明EGF能够促进精原干细胞的增殖,并且可以通过JAK-STAT信号通路起作用.     

人表皮细胞生长因子及其研究进展

表皮细胞生长因子是人体内一种重要自分泌/旁分泌的生长因子。人表皮细胞生长因子及其受体调控细胞增殖、分化、迁移、生存等与细胞命运密切相关的过程,在细胞发育、伤口愈合、器官发生中发挥重要作用。本文将对人表皮细胞生长因子的合成、分泌、生化特性、分子结构、家族、受体、信号通路、生物学活性、生理功能、应用及制备方法等方面进行综述。     

Structural Conversion from Non-native to Native form of Recombinant Human Epidermal Growth Factor by Brevibacillus choshinensis

Brevibacillus choshinensis (Bacillus brevis) HPD31 is a very efficient producer of recombinant human epidermal growth factor (EGF). The produced EGF is secreted into the medium with high efficiency. However part of the EGF that accumulates in the medium, exists as multimeric forms which are biologically inactive. We found the bacterium has the activity to structurally convert multimeric forms to the monomeric, native ones. Optimal temperature and pH for the conversion were 40°C and pH 9, respectively. The reaction was promoted in the presence of reduced glutathione or cysteine. But the cells which had been sonicated or exposed to moderate heat treatment completely lost the activity. Thus, it was presumed that the activity might be due to the enzyme(s) that catalyze the protein disulfide exchanging reaction, and that they resides on the surface of viable cells.     

不同EGF和胰岛素水平对体外培养的大熊猫皮肤成纤维细胞的影响

用DME∶Ham sF12(1∶1)培养液,添加3个水平的EGF和2个水平的胰岛素,组合成6种培养体系(CS)分别培养大熊猫皮肤成纤维细胞。通过对细胞生长速度和染色体数目变异率进行测定,测得在添加10μg/ml的胰岛素和40 ng/ml的表皮生长因子的培养体系中,以1.673±0.185×105/ml密度接种细胞,经3.5天,密度达到6.890×105/ml,其生长速度最快;染色体数目为二倍体的百分率为75.77%。综合衡量,CS-5在本研究中更适合大熊猫皮肤成纤维细胞的培养。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的：通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法：实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素＋奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC．7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果：体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC．7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素＋奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性（P〉0．05）,细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加（P〈0．01）,同时重组人类生长激素＋奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素＋奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论：体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

阿霉素肾病大鼠表皮生长因子及其受体的表达

目的研究阿霉素肾病大鼠肾组织中表皮生长因子(EGF)及其受体EGFR的表达分布以及表达量与尿蛋白之间关系。方法选择第5天、14天、28天作为动态观察的时点,同期设立正常对照。采用荧光定量RT-PCR、免疫组织化学及计算机图像定量分析EGF mRNA以及EGF、EGFR蛋白在肾组织的表达,同时测定24 h尿蛋白定量。WT1和EGFR双重免疫组化确定EGFR在肾小球内确切细胞定位。结果阿霉素注射后第5天,EGFmRNA即较正常增高,28 d明显增高并高于5 d和14 d。正常对照组EGF阳性细胞主要分布于远曲小管和髓袢,阿霉素组EGF还在集合管和近曲小管上表达;EGF阳性表达范围和强度随尿蛋白增加而增加;EGFmRNA表达量以及EGF在肾小管中的表达强度与24 h尿蛋白量呈正相关。肾小管上皮细胞广泛表达EGFR,阿霉素组EGFR在小管表达均高于正常,但组间各时点差异无显著性;随尿蛋白增加EGFR在肾小球内表达逐渐增多。EGFR在肾小球和肾小管中的表达强度均与24 h尿蛋白量呈正相关。WT1和EGFR双重免疫组化显示阿霉素肾病组EGFR可在足突细胞上表达,正常组则无。结论阿霉素肾病大鼠的肾小球脏层上皮有EGFR的表达。EGF/EGFR可能参与了阿霉素肾病的发病过程以及蛋白尿的形成。     

人的重组促黄体生成素对小鼠卵母细胞体外受精的影响

目的探讨人的重组促黄体生成素(r-hLH)对性成熟前的小鼠卵母细胞体外受精(invitrofertilization,IVF)后的分裂、以及IVF胚的体外培养(invitroculture,IVC)过程中发育状况的影响.方法选用性成熟前的清洁级昆明小鼠,分别用r-hFSH(人的重组促卵泡素20IU),r-hFSH+r-hLH(各20IU)或20IUr-hLH对其进行超排处理,通过对从各处理组小鼠卵巢中手工器械分离出来的卵丘-卵母细胞复合体(cumulusenclosedoocyte,CEO)进行体外受精之后,进一步观察这些CEO经IVF后的受精分裂状况,以及IVC后的发育情况.结果r-hFSH+r-hLH处理组小鼠卵母细胞IVF率(72.2%)极显著高于r-hFSH单独处理组(39.9%)或r-hLH单独处理组(37.2%)的相应指标;r-hFSH+r-hLH处理组和r-hFSH单独处理组的IVF胚,发育至8～16细胞阶段的比例(8～16细胞率)趋于一致(25.15%∶27.18%),但是都极显著高于r-hLH处理组的8～16细胞率(17.24%);r-hFSH处理组IVF胚发育至16～32细胞阶段的总比例(16～32细胞率∶33.01%),极显著高于r-hFSH+r-hLH处理组及r-hLH单独处理组的指标(1.75%和0).结论在IVF条件下,r-hLH对小鼠卵母细胞的受精有明显的促进作用,同时却对相应IVF胚的进一步发育产生明显的抑制作用.