沪农灵芝一号生长过程中子实体各部位糖醇和海藻糖积累及其代谢酶的表达变化

食用菌子实体通常会在生长过程中积累较高含量的糖醇及海藻糖,这些碳水化合物的积累能够促进食用菌的生长,而在灵芝中的同类研究较少,本研究通过高效阴离子-脉冲安培法对沪农灵芝一号子实体发育过程中不同部位的糖类成分的含量变化进行分析,发现灵芝子实体中主要的可溶性糖类成分是阿拉伯糖醇、甘露醇和海藻糖,甘露醇在子实体成熟时的菌盖中的含量达到最高值,阿拉伯糖醇在产孢子期的子实体中含量较高,两种糖醇的含量呈现相反的变化趋势,一种糖醇积累的同时会消耗利用另一种糖醇,而海藻糖在灵芝子实体的整个生长过程中含量处于较低水平,仅在子实体初期的菌基部位检测到较高的含量;同时通过qRT-PCR技术检测灵芝子实体不同部位中这几种糖类的主要代谢酶基因的表达变化,发现这些代谢酶在子实体的菌基部位的表达水平相对其他部位较高,且随着子实体生长这一差异更加显著,这一结果表明灵芝中的糖醇和海藻糖分布差异可能是先由菌基的菌丝体中合成产物并转运到子实体不同部位,再经过一段时间的积累和代谢之后产生。     

莲子壳主料对代栽灵芝生长及其生产效益的影响

莲子壳作为农业副产物体量较大,可用作食用菌栽培原料。本研究以资源化利用莲子壳和拓展灵芝栽培原料来源、降本增效为目的,以10%、20%、40%、60%和80%的莲子壳替代基础配方(杂木屑45%、玉米芯45%、麦麸5%、玉米粉4%、石膏1%)的木屑和玉米芯,研究各试验配方的灵芝农艺性状、品质及生产效益,从中优选出莲子壳基质高效配方,为探究莲子壳在代料灵芝生产中的应用提供依据。结果表明,培养料添加一定比例莲子壳可促进灵芝菌丝生长,60%处理的菌丝生长速度最快,达4.44mm/d;基料添加莲子壳会减少菌柄长度、菌盖厚度和子实体含水量,对菌盖大小、菌柄直径和单朵鲜重无明显影响。活性成分测定结果表明,随栽培料莲子壳比例的增加,灵芝子实体多糖和蛋白质含量明显增加,80%处理的多糖含量(10.57mg/g)是对照的1.66倍、蛋白质含量(15.14%)显著高于对照(14.12%);而栽培料莲子壳对灵芝子实体三萜酸的影响呈“低比例促进、高比例抑制”趋势。另外,莲子壳配方会显著提高灵芝子实体氨基酸总量,以10%处理最高,氨基酸总量为32.44%,该处理检测到13种氨基酸的含量最高值。生产效益分析表明,栽培...     

环腺苷酸在灰盖鬼伞子实体发育中的效用研究

通过测试ｃＡＭＰ,子实体浸提液对灰盖鬼伞（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ　ｃｉｎｅｒｅｕｓ）双核体菌丝的子实体诱导测试研究及通过用腺苷分别抑制ｃＡＭＰ在子实体发育各阶段的合成,对ｃＡＭＰ在灰盖克伞子实体发育中的影响进行了研究。结果表明：ｃＡＭＰ及子实体浸提液对灰盖鬼伞双核体菌丝的子实体形成并无诱导信号作用,阻止ｃＡＭＰ的合成延缓了子实体原基的发生,菌盖的形成,担孢子梗的形成,也延缓了质配和担孢子的发生,但菌柄的延长,子实体的成熟,担孢子的着色与释放则不受ｃＡＭＰ合成受阻的影响。     

桑黄栽培子实体成分分析及其显微形态观察

采用扫描电子显微镜观察人工栽培桑黄子实体的显微形态及其结构,如菌管、子实层、担孢子、锥形刚毛及离散菌丝结构等。分析结果表明:桑黄幼嫩子实体中全氨基酸含量可达11.22%,是成熟子实体(4.28%)的2.62倍,其多糖含量(1.18%)也较成熟子实体(0.64%)高许多。其多糖组分主要为甘露糖、半乳糖、葡萄糖,摩尔比分别为3.820:0.314:1.000(幼嫩子实体)和3.260:0.112:1.000(成熟子实体)。     

培养温度对滑菇子实体阶段胞外纤维素酶活性的影响

本文研究了培养温度对滑菇子实体形成期间胞外羧甲基纤维素酶活性的影响。实验结果表明:1,低温(9—11℃)培养,菌丝体能分化形成子实体,并且在子实体担孢子释放期左右,培养物中有CMC酶活性高峰出现,酶峰期活力为40—100u左右。2、在23—25℃培养300天期间,培养物不能形成子实体,在相应于子实体生长期间(以有子实体生长的低温培养组为对照),培养物中无明显酶峰出现,酶活力为0—2u左右。由此可见,培养温度对滑菇子实体形成和胞外CMC酶活性有显著的影响。     

灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)子实体发育及核相观察

采用石蜡切片、压片等方法对灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)子实体发育过程进行了观察,并用核荧光染料Hoechst 33258对灰花纹鹅膏菌子实体发育过程中的核相变化进行了观察。结果表明,灰花纹鹅膏菌子实体发育是典型的半被果型发育,菌褶是子实层同时发育类型,属于同型菌髓。在子实体发育过程中,单倍的二核担子核配后形成短暂的二倍体单核担子,经过减数分裂形成四核担子,有近40%的担子中核再进行一次有丝分裂形成8核担子,担子进一步发育产生担孢子,其中,二核担孢子约占95%,单核担孢子约2.4%,三核孢子2%左右,4核担孢子约0.4%。灰花纹鹅膏菌基因组中染色体数目2n=10条。     

产生担子器的担子菌一新科

作为担子菌的一个新科石花菌科目前包括单属、单种,即新属石花菌属和新种石花菌。新种子实体大型,胶质,石花菜状,具多级分枝;担子器(basidiopycnidium,新术语,用于描述一种内部产生担子的、发育良好的壳状结构)自末端分枝产生,长颈瓶状,具细长的喙,有发育良好的壁,内生担子和担孢子;担子短柱状,具3个横隔,无色,担孢子梗侧生;担孢子椭圆形,无色,单细胞。提供了子实体的形态、担子器形态及解剖结构、担子和担孢子的图解和详细描述,并对新种的分类地位进行讨论。     

香栓菌的驯化栽培及生物学发育特征

为了筛选香栓菌Trametes suaveolens的最佳出菇配方,同时对子实体不同生长阶段的生物学发育特征进行研究。本文用杨树、柳树、秸秆木屑作为培养料设置了8种配比,每种分为对照A、测试组B共计16个配方进行筛选,对不同时期的菌丝发育状况进行显微观察。结果柳树木屑、杨树木屑的配方均能成功栽培出香栓菌子实体,开袋后在90%-95%空气湿度、一定散射光、13-18℃的低温刺激下28d原基发育为菇蕾,继续培养28d后子实体成熟。其中配料为柳树木屑97%、蔗糖1%、石灰1%、石膏1%、含水量65%左右的配方出菇率最高,配料为柳树木屑的配方开袋后子实体长势最佳,采用边缘开袋方式最佳。子实体发育过程中,先分化出白色蜂窝状原基,原基依靠孔状结构吸收营养后,在其上层包被形成黑色菇蕾,同时基部开始形成子实层;菇蕾内部生殖菌丝不断分化和发育,体积逐渐膨大,颜色由深变浅,菌丝分化出担子并产生担孢子,最终形成子实体。     

纳米级灵芝子实体粉末和破壁灵芝孢子粉体外抗肿瘤活性研究

对纳米级灵芝子实体粉末及破壁灵芝孢子粉石油醚提取物(PE)、氯仿提取物(CE)、丙酮(AE)、甲醇提取物(ME)、水提取物(WE)与灵芝子实体及灵芝孢子提取量进行对比,利用GC-MS联用仪对石油醚提取物进行了成分分析鉴定,对水提物中总糖进行了含量测定,并利用宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04进行了体外增殖作用和剂量效应关系研究,为灵芝资源的保护及进一步开发利用提供理论基础。结果表明,纳米化灵芝子实体及破壁灵芝孢子不同溶剂提取量显著增加,纳米级灵芝子实体粉末水提取物具有抑制宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04增殖的作用。破壁灵芝孢子各溶剂提取物对宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04没有明显的增殖抑制作用。     

桦纤孔菌有性生殖相关特征及交配型位点分析

对桦纤孔菌菌株MDJCBS88的显微形态、菌丝及担孢子核相进行了观察。采用棉籽壳培养基对担孢子萌发形成的菌株进行栽培试验,筛选出不形成子实体或子实体发育不完整的菌株,将这些菌株在平板上进行了亲和试验,分析桦纤孔菌的有性生殖方式;并基于基因组序列进行交配型基因克隆验证,分析桦纤孔菌的交配型位点结构。显微观察发现,桦纤孔菌菌丝没有锁状联合结构,菌丝细胞无核到多核;子实层担孢子可含0-4个不等的细胞核,不同时期弹射的担孢子含有的细胞核数量不同。桦纤孔菌担孢子萌发率极低,能萌发的担孢子多为早期弹射的担孢子;培养基也影响担孢子的萌发率,与PDA培养基和CYM培养基相比,桦木屑培养基最适合桦纤孔菌担孢子萌发,萌发率为4.55%。从担孢子萌发的96个菌株中获得了2个不结实菌株和9个结实不产孢菌株,占11.5%,这些菌株间亲和试验出现不同的表现特征,包括形成产孢子实体,产生菌丝纽结,相互融合和相互拮抗等现象,认为桦纤孔菌的有性生殖以次级同宗结合为主,并受交配型基因控制。交配型位点克隆测序后分析发现,桦纤孔菌交配型A位点共14 034 bp,含有一个MIP基因和两组HD1和HD2基因;交配型B位点包含3个疑似信息素受体基因和1个信息素前体编码基因。     

金针菇生活史各阶段核相研究

对金针菇Flammulina velutipes生活史各阶段的菌丝体、子实体、担孢子等进行荧光显微观察。结果表明,金针菇单个担孢子发育而来的同核体菌丝为单核,无锁状联合,部分单孢菌株能形成同核子实体,同核子实体的原担子中只有1个核,该核在担子中进行一次有丝分裂形成纵向排列的2个子核,担子发育停止,同核子实体不产生担孢子;具有可亲和交配型的两个同核体菌丝经过质配形成异核体菌丝,异核体菌丝双核,具有锁状联合,能形成异核子实体,异核子实体的原担子中具有2个核,这2个核经过核配融合为1个二倍核,二倍核在担子中进行减数分裂形成4个单倍子核,4个子核分别进入4个担孢子中,随着担孢子继续发育,其中的单核再进行一次有丝分裂,成熟担孢子为双核,但这2个核是同质的。单核菌丝和双核菌丝都能产生粉孢子,且产生的粉孢子均为单核。     

栽培条件对灵芝子实体的三萜组成及其活性的影响

以不同灵芝品种、不同栽培基质、不同管理方式、不同生长时期获得的灵芝子实体为原料,用95%乙醇超声提取,对提取物进行了含量测定、三萜组成分析和体外抗肿瘤实验。结果表明,不同子实体醇提物中三萜和甾醇类物质的含量在4.60-6.20mg/g之间;高效液相分析发现10种三萜化合物的种类和含量在样品间存在明显差异。所有灵芝子实体醇提物对肿瘤细胞L1210的增殖均有一定的抑制作用,开伞期的灵芝子实体醇提物抑制肿瘤增殖的活性优于其他生长时期。     

盆栽条件下暗褐网柄牛肝菌人工菌塘及其子实体的培养

在土壤中添加促进暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）菌丝及其宿主咖啡生长的营养液,用暗褐网柄牛肝菌纯培养种接种盆栽件下的咖啡苗根系,结果表明：92.5%以上的小粒咖啡（Coffea arabica）苗形成菌根,菌根上外延菌丝向根尖、侧根及根系周围的土壤延伸生长,与土粒相互交结形成菌塘。接种20天后,菌塘中子实体紧贴咖啡苗茎基或于咖啡苗株间生长,共生长162个子实体,发育成熟52个。子实体菌柄基部菌索与咖啡苗主根表面菌套连接。     

彩绒革盖菌超微结构的研究

利用电子显微镜对彩绒革盖菌[Coriolus versicolor(L.:Fr.)Quél.],俗名云芝的人工培养的菌丝和野生的子实体进行超微结构的研究。结果表明:子实体由三种类型的菌丝(生殖菌丝、骨架菌丝、联络菌丝)组成。菌丝和子实体菌丝的细胞壁由两层结构组成。担子和担孢子的细胞壁由多层结构组成,至少有三层。菌丝顶端细胞的细胞质中有顶泡复合体(AVC)和顶体。菌丝细胞和子实体菌丝细胞都有桶状隔膜,在细胞质中有丰富的糖原贮存。担孢子与担子的小梗连接处出现初生壁溶化现象。     

野生有柄灵芝生物学特性及驯化栽培

为了充分开发利用灵芝资源,本研究对采自西藏墨脱县的一份野生灵芝子实体标本进行了分离纯化培养,并通过形态学观察和分子生物学分析鉴定为有柄灵芝Ganoderma gibbosum。将此菌株作为试验菌株,从碳源、氮源、温度、pH这4个因素进行生物学特性研究,从中选择3个较优水平进行正交试验。结果表明,有柄灵芝菌丝生长的最佳碳源为果糖,氮源为酵母,最适温度为25℃,适宜pH为7.0。驯化出芝栽培基质配方选用杂木屑58%、玉米芯20%、麦麸20%、石灰1%、石膏1%,40 d左右菌丝满袋,覆土一周后出现原基,50 d左右子实体成熟。初步成分分析表明,有柄灵芝粗多糖、氨基酸含量分别为1.5%和10.8%。本试验成功对野生有柄灵芝进行了人工驯化栽培,为有柄灵芝作为新的药用菌进行开发利用提供了参考。     

鬼笔属3种真菌的个体发育及形态观察

为揭示鬼笔属真菌子实体各器官的发育过程和形态特点,采用石蜡切片法对驯化栽培出菇的超短裙竹荪Phallus ultraduplicatus、冬荪P. dongsun和红托竹荪P. rubrovolvatus不同发育阶段的菇蕾进行切片显微观察,结合菌丝、孢子和子实体形态比较3个种的个体发育及形态特点。结果表明：3个种的菌丝和孢子形态差异不明显,超短裙竹荪子实体的菌裙质地较薄、长约4 cm、带有不规则形状的网孔;红托竹荪的菌裙质地较厚、长约7 cm、带有圆形网孔;冬荪仅有1层薄菌幕。3个种的菇蕾内部发育顺序一致,最先发育的都是胶质腔,接着是子实层、菌柄腔、菌盖、菌柄、菌裙（菌幕）;发育过程中菌丝形态经历从疏松到紧密、从交织状到组织状的变化过程;各器官发育完成的时间不同,在菇蕾直径相同的条件下,冬荪发育最快,在菇蕾直径为2 cm时,各器官基本发育完成,红托竹荪在菇蕾直径为3 cm时发育完成,超短裙竹荪的菇蕾发育最慢,在直径达到4 cm时各器官才能发育完成。为鬼笔类真菌的分类研究和亲缘关系探索提供了依据。     

有害疣孢霉菌与双孢蘑菇的互作关系

通过菌丝对峙、双重培养,以及对发病双孢蘑菇子实体的显微观察,探讨有害疣孢霉菌Mycogone perniciosa（MP0012）与双孢蘑菇Agaricus bisporus（As2796）之间的互作关系。结果表明,在菌丝对峙生长阶段有害疣孢霉菌菌丝不侵入双孢蘑菇菌丝体内,两者可交叉生长,对双孢蘑菇生长影响不显著;对峙与双重培养均显示有害疣孢霉菌菌丝会产生对双孢蘑菇菌丝生长的抑制作用的挥发性物质,造成双孢蘑菇菌丝扭结断裂。同时试验证实了双孢蘑菇菌丝会促进有害疣孢霉菌厚垣孢子的产生和萌发、菌丝生长和发育。侵染实验结果表明,有害疣孢霉菌可直接侵染双孢蘑菇子实体,引起双孢蘑菇子实体病害;对罹病子实体显微观察结果发现,发病前期双孢蘑菇子实体表面长出绒毛状病原菌丝,菌柄中空,菌褶褐变腐烂并长出病原菌丝;发病中期双孢蘑菇子实体内菌丝组织会出现萎缩裂解现象,在近有害疣孢霉菌菌丝一侧的双孢蘑菇子实体菌丝细胞壁被降解;发病后期双孢蘑菇子实体菌丝组织基本消失。由此初步判断有害疣孢霉菌对双孢蘑菇的寄生类型偏向于死体营养型。     

HPLC法测定仿野生栽培灵芝中多糖肽和灵芝酸含量

本研究目的是探讨仿野生栽培灵芝的多糖肽和灵芝酸含量变化,为规范灵芝栽培及产品质量提供依据。本研究采用RP-HPLC测定灵芝酸含量和HPLC-ELSD法测定灵芝多糖肽含量。结果显示:(1)低分子物质(以灵芝酸A+B+C2计):菌蕾0.52%,菌盖0.25%,菌柄0.13%,菌盖比菌柄高48%;(2)多糖肽提取得率比较:菌蕾提取得率为2.12%,菌柄0.70%,菌盖1.23%;(3)含量(以GLPPSQ计)比较:菌蕾1.30%,菌盖0.3%,菌柄0.2%;(4)以上醇溶性灵芝酸和水溶性多肽结果:菌蕾菌盖菌柄。上述结果说明仿野生栽培灵芝不同发育期的有效成分提取率和含量都存在明显差异,这对灵芝的合理应用提供一定的科学依据。     

不同类型灵芝品种的农艺性状、显微结构以及功能成分的比较

以育粉灵芝‘G-HN01’、‘G-XZ01’、‘G-LQ01’和育芝灵芝‘G-LQ02’两类品种为比较研究对象,进行袋料栽培实验。观测比较发现4个灵芝品种的菌丝生长速度和袋料栽培模式的子实体农艺性状差异显著;利用扫描电镜观测比较两种类型灵芝品种子实体显微结构差异,无孢子品种在显微结构上与其他3种育粉灵芝有着明显的区别;测定4个品种代料栽培子实体中功效成分及总的抗氧化能力,结果显示3个育粉品种之间功效成分和抗氧化活性上有显著差异,但育粉品种和育芝品种之间含量差异不显著。     

灵芝的培养

灵芝(Ganoderma lucidum)是担子菌纲,多孔菌目,多孔菌科的一种高等真菌。60年以前,我们对灵芝的生态习性还了解甚少。进入七十年代,经过科技工作者的努力,逐步揭开了灵芝神秘的面纱,并广为人工培植。灵芝由菌丝体和子实体组成。菌丝无色透明,直径约1—3微米,子实体又分化为菌柄和菌盖。长成后的灵芝,子实体木质化,皮壳革质化,呈现漆色光泽,经久不腐,但极易遭虫蛀食,丧失药用价值。灵芝种类较多,培植种有黄芝、赤芝、紫芝、