超甜玉米单倍体悬浮细胞系的建立及其生长特性

从超甜玉米的花药培养物中,筛选出28个具有高度胚胎发生能力的类型Ⅱ愈伤组织系,这种愈伤组织质地松散,易于分散,可以长期进行继代培养。将3个月龄的类Ⅱ愈伤组织接种在液体培养基中进行振荡培养,建立起分散程度很好的8个悬浮细胞系。实验结果说明,培养基中加入酪蛋白水解物(CH)和2-(N-吗啉代)乙基磺酸(MES)对悬浮细胞的生长是有利的。培养基的 pH 迅速下降吋,细胞的增殖十分缓慢,当培养基的 pH 值开始升高时,细胞的增殖也显著加快。利用滋养培养法,可以使悬浮细胞的愈伤组织形成率大大提高(比对照高11.8—19.7倍),并在低密度下达到较高的(41.3%)植板率。染色体计数表明,继代培养6个月之后,88.0%的悬浮细胞和95.2%的再生植株的染色体数保持着2n=x=10的单倍性水平。     

三七.人参和西洋参细胞悬浮培养的比较研究

用薄层层析对三七、人参和西洋参愈伤组织进行的初步鉴定表明,三种愈伤组织都含有皂甙和主要皂甙成分Rb_1、Rg_1,三七愈伤组织还含有一种抗癌皂甙Rh_1。对愈伤组织的生长,三七低于人参高于西洋参;对愈伤组织中总皂甙含量,三七均高于人参和西洋参。三种植物细胞悬浮培养结果类似于他们的愈伤组织培养,但生长又进一步提高。三七细胞悬浮培养中皂甙产生的时间进程几乎与生长平行,合适的收获期为培养30天。寡糖素不仅增强三七培养细胞的皂甙形成而且促进细胞生长,较合适的浓度为1.25 ppm。通过以上研究,使三七悬浮培养细胞的生长(干重增加178毫克)为最初培养愈伤组织的4倍以上,总皂甙产率高达20.6毫克,为最初培养愈伤组织的8.5倍。     

水翁悬浮细胞系的建立及其悬浮培养的生长特性

建立了水翁悬浮细胞系,并对其悬浮培养的生长特性作了初步探讨。以水翁新生芽尖作为外植体,接种于添加有不同浓度和配比的生长调节物质及各种附加物的MS固体培养基中,诱导培养产生初代愈伤组织;挑选Ⅰ和Ⅱ型的愈伤组织进行继代培养改良,考察愈伤组织的生长状况和统计生长量来决定最佳继代培养基的配方和得到适合悬浮培养的愈伤组织;将以上得到的愈伤组织转接于最佳继代液体培养基中,于24±1℃,120r/min条件下振荡培养,筛选分散度好、较均匀、生长快、色浅透明的细胞作为种子传代,数次传代后得到性能良好的悬浮细胞系;以细胞生长量(鲜重)为指标,绘制了水翁悬浮细胞的生长曲线。研究表明:2.0mg/L的2,4-D的诱导率最高(92%,初代愈伤组织为Ⅰ型),Ⅱ型愈伤组织的最高诱导率为75%;最佳的继代培养基配方为MS 0.5mg/L 2,4-D 0.5mg/L 6-BA 1.0mg/L IAA 0.5mg/L IBA 0.5mg/L NAA 0.1mg/L KT 700mg/L LH,形成Ⅱ型愈伤组织的生长量可达3.28g/瓶(鲜重);液体继代培养3代后,可得到性能良好的悬浮细胞系;水翁悬浮细胞的生长曲线表明,最佳接种期为培养后的16~18d。     

白桦单细胞培养体系的建立

以白桦花药（单核靠边期）、种子（萌发）及再生苗的茎段诱导愈伤组织,在NT1、NT2和B5三种不同的培养基中进行悬浮培养,筛选出优良的白桦悬浮体系,而后进行单细胞分离的结果表明,白桦花药愈伤组织在B5培养基上生长迅速,分散性好,适合于细胞分离。分离得到的单细胞用不同方式培养,建立了白桦单细胞两步培养法。     

土人参的组织和单细胞培养及试管苗开花结实

以土人参的花梗、茎和叶片为外植体在ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织,诱导率为７５％－９０％。愈伤组织经分化和生根培养再生了完整植株。由组织培养再生苗的幼茎诱导的愈伤组织建立悬浮系。由悬浮系分离的单细胞在２／３ＭＳ液体培养基中振荡培养或振荡培养３周后转入双层培养均再生了愈伤组织,再生率分别为０．２８％和０．４１％。愈伤组织在含有较低浓度６－ＢＡ的培养基上分化出苗。幼苗生长迅速,每３周扩增６．７倍,再生植株     

油樟悬浮培养及次生代谢产物的诱导

以油樟（Cinnamomum longepaniculatum）叶片为外植体在附加6-BA和NAA不同激素浓度组合的MS培养基上筛选质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,分别接种在MS、B5、WPM三种液体培养基中进行细胞悬浮培养,并检测诱导产生的次生代谢产物。结果表明：2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA能诱导质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,B5基本培养基中细胞长势最好;愈伤组织在B5＋2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA中悬浮培养,继代2次后形成均一的单细胞;从油樟悬浮培养物中检测出50%以上的成分是苯甲醇。     

油樟悬浮培养及次生代谢产物的诱导

以油樟(Cinnamomum longepaniculatum)叶片为外植体在附加6-BA和NAA不同激素浓度组合的MS培养基上筛选质地疏松、生长旺盛的愈伤组织, 分别接种在MS、B5、WPM三种液体培养基中进行细胞悬浮培养, 并检测诱导产生的次生代谢产物。结果表明: 2 mg.L-1 6-BA+ 0.5 mg.L-1 NAA能诱导质地疏松、生长旺盛的愈伤组织, B5基本培养基中细胞长势最好; 愈伤组织在B5+2 mg.L-1 6-BA+ 0.5 mg.L-1 NAA中悬浮培养, 继代2次后形成均一的单细胞; 从油樟悬浮培养物中检测出50%以上的成分是苯甲醇。     

紫茉莉悬浮细胞培养体系的建立

为建立紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)悬浮细胞培养体系,以紫茉莉无菌苗叶片诱导的愈伤组织为材料,筛选紫茉莉悬浮细胞的适宜培养体系。结果表明,紫茉莉愈伤组织在MS+2,4-D 1 mg L-1+KT 0.5 mg L-1的液体培养基中悬浮继代培养3~4次,能得到稳定的悬浮细胞系。培养基的pH值为5.5~5.9,蔗糖浓度为30 g L-1更适合悬浮细胞的生长。紫茉莉悬浮细胞的生长曲线大致呈S型。最佳继代培养时间是10 d,培养液的体积为40 mL时,接种量为7.5 mL,可以较好地保持悬浮细胞系。1 L培养液中可提取分泌蛋白(0.42±0.15) g。这些有助于对悬浮细胞提取分泌蛋白的研究。     

野葛细胞培养及其生长特性的研究

目的：以野葛不同器官来源的外植体为材料诱导愈伤组织,建立起悬浮细胞培养体系,研究愈伤组织及悬浮细胞的生长特性。方法：采用细胞生长测定、细胞培养物中有效成分含量测定及细胞的观察。结果：野葛细胞培养过程中异黄酮及葛根素含量随细胞生长逐渐积累,在细胞生长静止期含量最高,次生代谢物与细胞生长呈负相关。不同来源的愈伤组织以根愈伤组织中异黄酮及葛根素含量最高,其中总异黄酮含量为：47．60mg/g Dw、葛根素含量为：3．30mg／g Dw,其次叶、茎、子叶,悬浮细胞中含量最低。不同愈伤组织的细胞及悬浮细胞在生长过程中细胞形态有差异。     

枸杞花药愈伤组织悬浮培养条件下胚状体发生与植株再生

采用枸杞花药进行离体培养,建立细胞系,诱导植株再生,结果在含不同激素的4种培养基上都诱导出了愈伤组织,诱导率为17%～169%。愈伤组织在MS 2,4D05mg/L的固体培养基上,经2～3次培养后,获颗粒状胚性愈伤组织,颗粒状胚性愈伤组织转入含相同成分的液体培养基中进行振荡培养,24h后获得大量单细胞。单细胞液经过多次继代培养,建立起稳定的悬浮系。悬浮细胞在液体培养基中培养8～10d可获得含有大量胚状体的愈伤组织块,收集悬浮培养物转移到MS 6BA02mg/L的固体培养基上,胚状体能够萌发形成大量绿色小芽,小芽转入生根培养基(MS NAA02mg/L)中20d后得到完整植株。植株根尖细胞经细胞学鉴定为单倍体。     

人参细胞悬浮培养中的激素调节及细胞分裂的研究

在人参细胞悬浮培养中,单使用植物生长调节剂时以Zmg/L 2,4—D和2mg/LNAA的效果较好.在不同激素组合的试验中,以2mg/L 2,4—D+2mg/L NAA+0.5mg/L KT的效果最好.悬浮条件下人参细胞的再生方式有有丝分裂、无丝分裂和出芽繁殖,其中直径为50μm以下的小型园形细胞的分裂为有丝分裂,而葫芦形、肾形、长园形及不定形的巨型细胞常表现为无丝分裂和出芽繁殖.植物激素对不同类型细胞的分裂有一定的影响作用.和愈伤组织固体培养相比,细胞悬浮培养可使细胞干重增加近5倍.     

Influence of primary callus induction conditions on the establishment of barley cell suspensions yielding regenerable protoplasts

Summary With the aim of the development of a culture method for efficient plant regeneration from barley (Hordeum vulgare L.) protoplasts, we examined several culture conditions for primary calli from immature embryos of cvs. Dissa and Igri, which were used for initiation of cell suspensions. Among the primary callus culture conditions tested, growth condition of donor plants had a great impact on these efficiencies; Igri protoplasts derived from embryos of plants grown in a greenhouse gave rise to albino plants and few green shoots while several cell lines originating from embryos of plants grown in a growth chamber (16h light, 12°C) yielded protoplasts developing into green plants. In contrast, cell suspensions were produced at higher frequencies from calli derived from embryos of greenhouse-grown Dissa plants. In Igri, increased levels of 2,4-dichlorophenoxyaceticacid (2,4-D) significantly reduced the efficiency of cell suspension establishment and plant regeneration from protoplasts was achieved only with suspension cells derived from calli induced at the lowest level (2.5 mg/l), while the effect of the 2,4-D concentration was not clear in Dissa. The developmental stage of immature embryos also affected the efficiency of cell suspension establishment, and the optimal embryo size was determined to be approximately 1mm in diameter. These results demonstrate the importance of callus induction conditions for successful barley protoplast culture.     

红豆杉细胞培养的研究

从红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｐｉｌｇ）Ｒｅｈｄ）的嫩茎及针叶诱导的出愈伤组织,对愈伤组织培养及细胞悬浮培养进行了研究,利用ＨＰＬＣ方法测定它们合成紫杉醇的能力,发现了能够提高培养细胞生长速率及紫杉醇含量的一些因子,红豆杉愈伤组织及悬浮培养细胞的生长速率已分别达到０．２５ｇ／Ｌ．ｄ和０．２８ｇ／Ｌ．ｄ。而他们的紫杉醇含量分别是０．００２６％和０．０１２％。     

石防风细胞悬浮培养中的体细胞胚发生

石防风试管苗的根经2,4-D诱导可形成具有发生体细胞胚潜能的愈伤组织,用愈伤组织制备悬浮细胞。细胞及组织学的观察表明,体细胞胚发生经历了单细胞、丝状体、细胞团、愈伤组织及胚性细胞团的出现及类胚体的各个发育阶段。丝状体可以经过不同的分裂途径发育为细胞团。愈伤组织表面或者内部的某些细胞演变为胚性细胞,它们不断分裂形成了体细胞胚,一个愈伤组织可形成一个或几个体细胞胚。     

悬浮培养的谷子细胞的胚胎发生和植株再生(简报)

由谷子的胚性愈伤组织在附加2mg/l2,4-D和5%椰乳的UM液体培养基中建立了细胞悬浮培养,降低培养基中2,4-D的浓度,利于胚状体的形成。当液体培养中的细胞转移到MS琼脂培养基上后,通过改变激素的组成及浓度,可以促进胚性细胞团的增殖,进而再生出大量完整植株。这种通过形成胚状体而再生植株的能力,巳在该悬浮培养系中保持一年多,从由幼穗培养建立胚性愈伤组织开始,此细胞系的旺盛的再生能力至今巳保持了近三年。     

细胞培养生产人参寡糖素降低成本的途径

在人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ）细胞悬浮培养中,以无离子水代替重蒸馏水,细胞生长速率和寡糖素产率分别降低２．３％和２．９％。用白糖代替蔗糖,细胞生长速率和寡糖素产生率分别降低１．７４％和１．２３％。综合上述两方面结果,以无离子水和白糖分别替代原培养基中的重蒸馏水和蔗糖组成替代培养基,用替代培养基培养人参培养细胞,其生长速率可达０．５０９ｇＤＷ／Ｌ．ｄ．寡糖素产率可达１．４４３ｇ／Ｌ,和原培养基相     

人参寡糖素对三七悬浮培养细胞生长的效应

从人参培养细胞的细胞壁中分离纯化到不同分子量的单体人参寡糖素。试验结果表明命名为人参寡糖素Ⅶ和人参寡糖素Ⅷ的两种寡糖素对三七悬浮培养细胞的生长具有明显的促进作用,其增长率分别为１９．３４％和１０．５８％,人参寡糖素Ⅶ的适宜浓度为５—１０ｍｇ／ｌ。在高浓度下（大于２５ｍｇ／ｌ）稍抑制培养细胞生长。在细胞培养２２天（指数生长期）后．加入１０ｍｇ／ｌ的人参寡糖素Ⅶ．然后再培养２天。其生长速率即提高,加入人参寡糖素Ⅷ后．缩短了三七细胞悬浮培养生长的延缓期．提前进入对数生长期和指数生长期,并在对数生长期和指数生长期作用最明显,因而最终收获时培养细胞的产率增加。     

高产黄酮苷银杏悬浮培养细胞系选育和继代培养稳定性研究

银杏叶中主要有效成分黄酮苷和萜内酯,具有多种药理作用,银杏叶提取物(EGB)及其加工品具有广阔的市场前景[1,2].为满足市场需要,Carrier等[3]在90年代初就开始细胞培养生产黄酮苷和萜内酯的研究.细胞大规模培养生产黄酮苷的关键技术之一是选育性状稳定、生产能力强的细胞系.     

网纹瓜单细胞固-液双层培养及体细胞无性系建立(简报)

网纹瓜(Cucumis melo Var.reticulatus)是名贵的优质甜瓜,为葫芦科、甜瓜属植物。我国引种后生长良好,产量高,经济效益好,每年从日本购进大量杂交种子。但由于种子不纯,基因型差异较大,植株不整齐,产量不稳定,而且价格昂贵。因此,选育适合我国种植的