混合醇体系中测定氨基酸的茚三酮光度法

氨基酸一般利用自动分析仪定量测定,但需高精密仪器,而基层研究单位一般难以采用,而且分析也不需要如此精密。利用茚三酮能够定量测定氨基酸,除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮形成黄色化合物外,其它所有氨基酸均与茚三酮反应形成蓝紫色物质,溶液颜色深浅与氨基酸含量成正比。据此本文对氨基酸的茚三酮光度法测定进行了研究和改进。在混合醇体系中以醋酸钠-醋酸为缓冲溶液,加入抗坏血酸以增加反应的灵敏度,100℃水浴20分钟完成显色反应。并对酸度、试剂用量、反应时间等因素进行了研究,拟定了用于混合氨基酸总量测定的操作程序。     

121MB型氨基酸分析仪测定羟脯氨酸的经验介绍

羟脯氨酸(Hypro)是脯氨酸的衍生物,它和脯氨酸与茚三酮的反应基本相同,反应不放出NH_3,而直接生成黄色产物,在440nm波长处有最大吸收峰。我们对现在常用     

三氯化钛对氨基酸茚三酮显色的影响

在氨基酸的分析中,常用茚三酮显色法进行定性定量测定。无论用离子交换柱层析和液体色谱法还是用氨基酸自动分析仪分析氨基酸,常在茚三酮显色剂中加入二氯化锡还原剂作为增色剂,但由于二氯化锡不稳定,配制茚三酮时加入255毫克/升的三氯化钛代     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的实验研究（一）茚三酮显色剂在不同存放时间内对氨基酸含量的影响

本项目采用新的技术,对茚三酮显色试剂进行了研究,利用国内新引进的６３００黄金系列氨基酸分析仪对不同存放时间内的节三酮显色剂对氨基酸含量的影响进行了实验研究。观察了第１天,第７天,第１４天,第２１天,第２８天内进口茚三酮显色剂与自制茚三酮显色剂对氨基酸含量的影响。并对３８种氨基酸与自制茚三酮试剂和进口茚三酮试剂反应后的实验结果进行了观察。实验结果表明,第１天至第２８天内,自制茚三酮试剂的稳定性、灵敏度,重度性,分辨率等项指标均优于进口的茚三酮试剂,统计结果,说明用自制的茚三酮试剂取代进口的茚三酮试剂是可靠和可行的。     

生化教材中关于脯氨酸与茚三酮反应描述的修改建议

在教学中发现,生化教材里关于脯氨酸与茚三酮反应的描述与植生实验教材指导下的实际实验结果是不一致的。该文通过查找各自的原始参考文献资料及验证实验,证实是生物化学教材编写中的疏漏,因此提出对应修改建议。     

酸性茚三酮法测定非水解食物和饲料中的色氨酸

本文报导了直接测定大豆粉、小麦、玉米、大麦、黑麦、向日葵、鱼粉和肉粉中色氨酸的最佳条件。酸性茚三酮溶液可直接与样品中蛋白质反应,而无需进行蛋白质的预分离或预分解。再现性和回收率的研究表明:测定其色氨酸含量为10—100μg的蛋白质,标准误差为2.7%或2.7%以下。处理过的大豆中色氨酸的减少量是一个不可缺少的应用参数函数。保留的色氨酸含量,以未处理样品中色氨酸含量的百分率表示,结果如下:81%HCl+H_3PO_4(pH～1.8),中和;79%HCL+H_3PO_4(pH～2.0),中和;67%HCl+H_3PO_4(pH～2.0),未中和;63%微波炉5分钟;57%HCl(PH～2.0),未中和。     

测定小麦叶片游离脯氨酸含量的方法

在测定样品游离脯氨酸含量时,现多采用Troll的酸性茚三酮显色法,而对样品的前处理(提取和纯化脯氨酸)却采用了不同的方法,概括起来主要有三种,即Troll的80％乙醇浸提法,Singh的甲醇-氯仿-水浸提法和Hanson的水浸提法。前两种方法的共同点是程序复杂,费时,难以在短时间内处理大批材料,且涉及试剂种类多,用量较大,成本较高。虽然近年来有人作了改     

复合氨基酸注射液中L-色氨酸含量测定方法的研究

利用色氨酸结构中的吲哚基团在酸性条件下与对二甲氨基苯甲醛的特殊反应 ,在 6 10nm处测定复合氨基酸注射液中L 色氨酸的含量 ,获得满意的结果     

脂质体中卵磷脂的氧化产物与溶血的关系

卵磷脂是构成脂质体膜的基本骨架,其化学性质不稳定,易氧化水解,氧化产物直接影响脂质体的包封率,且增加毒性。作者曾用氧化指数作为检测卵磷脂氧化的质量指标,但不理想,无法定量,且易受脂质体中其它组分干扰。根据卵磷脂氧化产物丙二醛(MDA)在酸性条件下可与硫巴比妥(TBA)反应,生成红色颜色(TBA-Pigment),在535nm处有特异吸     

稻米赖氨酸快速测定条件的探讨

以氨基酸自动分析仪测定稻米赖氨酸含量为参照标准。在“茚三酮测定赖氨酸含量”(A法)的基础上,对该法中大米蛋白质的提取温度和时间、色温度和时间及茚三酮用量等条件进行了探讨,提出了稻米赖氨酸含量快速测(B法)。提取条件为90℃5分钟,显色条件为90℃20分钟;茚三酮试剂用1 ml。用B法对10个大米样品进行测定,赖氨酸含量与氨基酸分析仪测得的赖含量基本上一致,无显著差异(P>0.05)。     

水杨醛保护法鉴定生物合成聚赖氨酸的单体连接方式

建立了一种有效、方便的分析和鉴定聚赖氨酸结构的方法。采用水杨醛与游离氨基反应生成席夫碱．用NaBH4将席夫碱C=N还原成C-N,在酸性条件下将还原产物水解,用薄层层析法分析了水解产物,根据生成的N保护氨基酸不同,鉴定了生物合成的聚赖氨酸的结构为ε-型结构。此法也可用于蛋白质或多肽的N-末端氨基酸的分析。     

Fe—S蛋白(MoFe、Fe蛋白)中酸不稳定硫的测定

一、原理 Fe—S蛋白中酸不稳定硫的测定是在碱性条件下,使Fe—S蛋白与Zn(AC),作用所形成的ZnS,在酸性条件下,用对-氨基二甲基苯胺偶联并与FeCl_3作用生成次甲基兰。在670nm处测定光密度。保险粉的干扰可借助于取蛋白样品体积少,浓度高或将蛋白样品见氧等办法来消除。反应式:     

外源脯氨酸对盐胁迫下甜瓜脯氨酸代谢的影响

为探明外源脯氨酸对盐胁迫下甜瓜脯氨酸代谢的影响,以甜瓜品种‘雪美’为材料采用营养液栽培,对盐胁迫(100mmol·L-1 NaCl)、盐胁迫下添加外源脯氨酸(100mmol·L-1 NaCl+0.2mmol·L-1 Proline)以及对照3种处理后甜瓜幼苗叶片脯氨酸(Pro)含量、吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)、鸟氨酸转氨酶(OAT)和脯氨酸脱氢酶(ProDH)活性进行测定,并对OAT和ProDH基因进行克隆及半定量表达分析。结果显示:与对照相比较,盐胁迫条件下甜瓜幼苗叶片内Pro含量显著增加,P5CS活性增幅大于OAT活性,OAT基因表达量大部分时段内没有增加,ProDH活性下降,ProDH基因表达量减少;盐胁迫下添加外源脯氨酸进一步使幼苗叶片内Pro含量增加、OAT、ProDH活性提高、P5CS活性降低,并且使OAT基因表达量迅速增加、ProDH基因表达量先增加后回落。研究表明,盐胁迫条件下,甜瓜幼苗体内脯氨酸积累主要是通过增强脯氨酸的谷氨酸合成途径和抑制脯氨酸降解来实现;适量外源脯氨酸可以增强盐胁迫幼苗脯氨酸的鸟氨酸合成途径,但对谷氨酸合成途径有一定的抑制作用;通过调节合成和降解2种代谢途径进一步提高了脯氨酸含量,从而增强甜瓜幼苗耐盐胁迫能力。     

用旋光法测定L—脯氨酸含量

<正> L—脯氨酸是一种价格昂贵的中性氨基酸,是常州制药厂国内首先生产的治疗高血压和充血性心力衰竭的新药—血管紧张素转换酶抑制剂琉甲丙脯酸(Captoril;SQ—14225)的主要原料,此药并L—脯氨酸的回收工艺都于1983年7月通过鉴定。在琉甲丙脯酸的工业生产过程中,有一半以上的L—脯氨酸要通过水解与离子交换树脂予以提纯和回收,套用。而L—脯氨酸水溶液的含量分析工作是其一个重要环节。为了解决这一难题,我们通过多次摸索建立了一种新的快速有效的含量测定方法—用旋光测定L—脯氨酸含量。     

不同施氮水平对烟草叶片游离氨基酸含量及脯氨酸和苯丙氨酸代谢的影响

人工施氮量是影响烟叶中游离氨基酸含量的重要因素,而后者很大程度上影响着烟叶的品质和风味。为了解不同施氮量对烟叶中游离氨基酸含量的影响,在大田条件下通过设置施氮量为60 kg/hm~2、90 kg/hm~2和120 kg/hm~2 3个施氮水平进行处理,用分光光度法和气相色谱-质谱联用法分析,研究了不同施氮水平对游离氨基酸含量以及脯氨酸和苯丙氨酸代谢关键酶及其基因表达的影响。结果表明,随施氮水平的不同,烟叶中总游离氨基酸、脯氨酸和苯丙氨酸含量随施氮水平增加而增高;而亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸和4-氨基丁酸含量在施氮水平为60 kg/hm~2时最高。脯氨酸代谢相关酶和苯丙氨酸代谢相关酶活性均随施氮水平升高而增强,其基因相对表达量也随之上调。上述研究结果表明施氮水平可显著影响烟叶中游离氨基酸含量、种类及其代谢过程。     

不同生长温度对烟草叶片游离氨基酸含量及脯氨酸和苯丙氨酸代谢的影响

游离氨基酸是烟叶中的重要化合物,它很大程度上影响着烟叶的品质和风味。为了解不同生长温度对烟叶中游离氨基酸的含量及其代谢的影响,通过人工气候室设置均温18.5℃、23.5℃和28.5℃3个动态气温条件,在烟叶从早期生长至成熟的整个时期进行不同生长温度处理,用分光光度法、气相色谱-质谱法和荧光定量PCR分析,研究了不同生长温度下总游离氨基酸含量和单个游离氨基酸含量的变化规律及对脯氨酸和苯丙氨酸代谢的影响。结果表明,不同生长温度对烟叶生长发育过程中游离氨基酸总量和单一游离氨基酸含量有明显影响。其中,随着烟叶生长发育的进行,所含游离氨基酸含量逐渐下降。在不同生长温度处理下,随生长温度升高总游离氨基酸含量下降;各游离氨基酸含量基本上也随生长温度的升高而降低。对脯氨酸代谢相关酶(P5CS,OAT,ProDH)活性以及苯丙氨酸代谢相关酶(PAL,C4H)活性及其基因表达的定量研究表明,其酶活性和基因表达的变化与含量变化的趋势一致。上述研究结果表明,随着烟叶的生长发育和成熟,其游离氨基酸含量逐渐降低,而较低的生长温度有利于烟叶维持较高的游离氨基酸水平。     

用氨基酸分析仪测定棉花幼苗叶片中的还原型谷胱甘肽含量

以3%三氯乙酸提取棉花幼苗叶片中还原型谷胱甘肽(GSH),在2.8mm×80mm色谱柱、柱温54℃、缓冲液流速10mL·h-1、茚三酮溶液流速5mL·h-1、波长570nm的条件下,用Beckman 121 MB型氨基酸自动分析仪测定含量为40~500μmol·L-1的GSH,与色谱峰面积呈良好的线性关系,GSH回收率为99.5%~100.4%,检出限为4μmol·L-1,测定结果的相对标准偏差为0.51%~1.05%。     

焦磷酸显色法检测PCR产物及酶活性

聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是分子生物学领域的一项具有划时代意义的技术,但定量PCR产物或测定能生成焦磷酸的酶活性仍需要新技术的发展。本文提供了一种PCR产物定性及定量检测方法(Color PCR kit)及其用途;该方法通过焦磷酸(pyrophosphate,PPi)显色测定PCR的副产物PPi。利用试剂盒中的试剂与PPi反应,最终生成物为甲暨（formazan）,呈红色。根据显色现象(红色)判断PCR的阳性结果,由目测实现PCR的定性检测;或通过测定490 nm 处的吸光度值定量检测PCR过程中生成的副产物PPi的含量,定量检测PCR 产物的生成量;目测情况下Color PCR kit可检测到2.5 ng水平的PCR产物,用紫外分光光度计可检测到低限为1 pg;Color PCR kit法比琼脂糖凝胶电泳检测法（低限为4 ng）灵敏。Color PCR kit还可用于连接酶和转移酶活性的测定。     

响应面法优化脯氨酸羟化酶转化反应工艺条件

通过优化脯氨酸羟化酶表达条件和转化反应条件,提高其转化反应效率。采用单因素法筛选脯氨酸羟化酶的最佳诱导温度、诱导剂浓度和转化反应条件,并采用响应面法预测影响转化反应各因素的最佳条件。结果显示,经过筛选和验证,蛋白表达最适诱导温度为28℃,IPTG浓度为0.2 mmol/L;转化反应最佳条件为:120 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(pH 6.6)、1.5% Nonidet P-40、200 mmol/L L-脯氨酸、200 mmol/L α-酮戊二酸,6 mmol/L L-抗坏血酸、6.0 mmol/L 硫酸亚铁,最适反应温度为27℃,振荡速率为152 r/min。在最佳条件下,转化反应进行48 h后产物反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率可达100%,为合成反式-4-羟基-L-脯氨酸奠定了坚实的实验基础。     

蛋白质酸水解液用过甲酸氧化处理对胱氨酸的测定

<正> 蛋白质在酸水解过程中,其中的半胱氨酸和胱氨酸易受到氧化而破坏。特别是在用茚三酮显色反应来检测氨基酸的柱层析法中,半胱氨酸不与茚三酮产生显色反应,因而对它无法测定。所以在测定这两个氨基酸时,通常采用过甲酸氧化法。即用过甲酸将蛋白质中的这两个氨基酸氧化为半胱磺酸进行测定。但这一方法操作烦杂,其中的过甲酸不易除去,而会在酸水解过程中使