大肠杆菌O_(157):H_7实验诊断的研究进展

大肠杆菌Ｏ１５７Ｈ７是近年来新认识的肠道疾病病原体。随着认识的深入,对大肠杆菌Ｏ１５７Ｈ７实验诊断显得尤为重要。本文对近年来大肠杆菌Ｏ１５７Ｈ７的细菌培养、免疫磁分离法、ＥＬＩＳＡ、热解质谱测定、多聚酶链反应等方法的研究情况作了介绍,并对其在流行病学和临床上的应用作了讨论。     

大肠杆菌O157：H7毒素的研究进展

大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７是肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）的主要病原血清型,它可通过特殊的粘附因子粘附靶器官,产生类志贺毒素Ⅰ,Ⅱ（ＳＬＴ－Ⅰ,Ⅱ）和肠溶血清（ｈｌｙ）等发挥作用,可引起肠出血性腹泻、溶血性尿素综合征（ＨＵＳ）、血栓形成性血小板减少性紫癜（ＴＴＰ）等疾病。     

两种能引起人类严重疾病的食物传染病原菌

出血性大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｌａｃｏｌｉ０１５７：Ｈ７）和单核细胞增生性李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）是由食物传染的病原菌，能够引起人类严重疾病并往往误诊，本文综述了这两种病原菌的传染途径、致病性、生物学特性和主要的鉴定方法。     

环状芽孢杆菌C—2几丁酶基因在大肠杆菌中的表达

对已克隆的环状芽孢杆菌Ｃ－２的几丁酶基因片段所作的亚克隆分析表明,该几丁酶基因位于１．７ｋｂ Ｐｓｔ Ｉ－Ｓｔｙ Ｉ片段 。ＣｈｉＩ基因在大肠杆菌ＪＭ１０７,ＤＨ５α,ＸＬ１－ｂｌｕｅ,ＴＧ－１等菌株中均能表达,但表达水平不同,其中ＪＭ１０７的表达活性最高,其胞外几丁酶活性与供体菌Ｃ－２菌株的胞外酶活性几乎相当。     

酵母PAP1与PHO85激酶复合物对PHO4的磷酸化

酵母ＰＨＯ８５结合蛋白ＰＡＰ１与其它的ＰＨＯ８５结合蛋白ＰＨＯ８０、ＰＣＬ１及ＰＣＬ２有较高的同源性。我们上ＰＡＰ１与ＨＡ抗原的融合基因,利用抗－ＨＡ抗体进行免疫沉淀。体外翻译的融合ＨＡ标记肽的ＰＡＰ１与体外翻译的ＰＨＯ８５的免疫共沉淀证明了ＰＡＰ１与ＰＨＯ８５的结合。同时纯化了大肠杆菌表达的ＰＨＯ４蛋白,并构建了Ｐ９ＨＯ８５：：ＰＲＰ１缺失株。ＰＡＰ１与ＨＡ的融合基因被置于酵母ＡＤＨ１启动子的控     

中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物中克隆了ＩＦＮ－ｒ－ｃＤＮＡ,序列分析证实了分子进化规律对ＩＦＮ－ｒｃＤＮＡ序列存在多态性的推论。在此基础上应用ＤＮＡ重组技术,将去信号肽中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ克隆到原核表达质粒ｐＢＶ２２０ ＰＲＰＬ启动子下游,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ,其表达水平占全菌可溶性总     

重组大肠杆菌高密度培养研究进展

大肠杆菌是基因工程中常用的宿主菌,许多有价值的多肽和蛋白在大肠杆菌中已成功地进行了表达,表达水平有些高达细胞总蛋白的３０％以上,为了提高单位体积设备产物的产量,除了提高表达水平外,还需提高重组大肠杆菌的培养密度。大肠杆菌高密度培养的早期工作主要是以宿主菌为模型进行研究的,而近年来,重组大肠杆菌高密度高表达的研究已经有了较大进展。本文着重综述了培养基成分、溶氧、比生长速率和代谢副产物乙酸等因素对工程菌生长和表达的影响,及提高菌密度和表达水平的培养方法。     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究：I.碱性蛋白酶高产菌的筛选及产酶条件初探

从成都佳丰食品厂等处采集的样品中平板分离初筛到１２４株碱性蛋白酶产生菌,进一步复筛出一株高产,且稳定的碱性蛋白酶产生菌株Ｂ．Ｌ．ＪＦ－ｌｄ初步鉴定为地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）。该菌的最适产酶条件为：培养基（％）为麦芽糖７．５,酵母膏３,ＮａＣｌ０．５,Ｋ２ＨＰＯ４·３Ｈ２Ｏ０．５３,ＮａＨ２ＰＯ４·２３Ｈ２Ｏ０．０３,Ｎａ２ＣＯ３０．０５６,ＭｎＳＯ４ｌ×１０＾－４     

大肠杆菌L型生物学特性及致病性的研究

我们对人工诱导的大肠杆菌L型从生物学特性、致病性以及耐药性R质粒传递等方面进行了初步的研究。结果表明:L型菌从菌体形态、菌落特征、生化反应等方面与原型菌有较大差别;原型大肠杆菌和相应的L型菌接合试验均阳性,但后者接合频率较前者明显低;将L型菌经膀胱和尾静脉感染小鼠,引起实验鼠脏器的间质性炎症,通过病理学和细菌学检查证明,L型菌可直接引起脏器感染,并非只有返祖后才能致病。     

重组人血小板生成素在大肠杆菌中表达的研究

采用化学法全合成了编码人血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ,ＴＰＯ）成熟肽Ｎ端１５３氨基酸的基因序列,构建基于该合成基因的表达质粒,结果以谷胱甘肽转硫酶－ＴＰＯ１５３（ＧＳＴ－ＴＰＯ１５３）融合蛋白的方式获得了占全菌蛋白４０％的高效表达．进一步采用ＰＣＲ方法分别对ＴＰＯ合成基因及ＴＰＯｃＤＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）序列进行定点突变,以降低这一区域的Ｇ－Ｃ含量．将突变序列分别插入到ｐＢＶ２２０表达载体中,重组质粒在转化大肠杆菌ＪＭ１０９后,均获得了表达,其中ＴＩＲ区突变后的合成基因表达产物约占全菌蛋白的１５％．为研究基因下游结构对表达的影响,在不改变氨基酸组成的基础上,构建了ＴＰＯ合成基因与ＴＰＯｃＤＮＡ的杂合序列表达质粒．研究结果表明翻译起始效率是影响ｒｈ－ＴＰＯ在大肠杆菌中表达的重要因素之一,同时基因下游序列的组成对表达水平也会产生影响．     

大肠杆菌DNA聚合酶I的“碱基选择”作用

用双脱氧核苷酸研究了大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ的Ｋｌｅｎｏｗ片段的“碱基选择”作用。当引物末端为３＇ＯＨ时，Ｍｎ＾２＋代替Ｍｇ＾２＋对ｄＮＴＰ的Ｋｍ影响不大，而使ｄｄＮＴＰ的Ｋｉ大大降低，非配对的ｄｄＮＴＰ仍无抑制作用。当引物末端为ｄｄＮＭＰ且与模板配对时是ＤＮＡ合成的抑制剂，与模板配对的下一个ｄＮＴＰ可增强这一抑制作用，Ｍｎ＾２＋代替Ｍｇ＾２＋使ｄＮＴＰ的诱导作用大大增强而ｄｄＮＴＰ无诱导作用。这些     

双歧杆菌的耐药性与质粒

目的：研究双歧杆菌的耐药性与质粒的关系。方法 对１７株５种来自微生态制剂的双歧杆菌进行抗生素药敏试验和质粒检测,利用溴化乙锭消除其质粒;比较质粒消除前后耐药性的改变。结果１７株双歧杆菌对氨基糖式类和多肽类抗生素呈强抗性;除１株短型双歧杆菌Ｂ１５７存有２．７Ｋｂ和５．６Ｋｂ两种质粒外,其余菌株均未质粒,消除后持粒的Ｂ１５７株菌对抗生素的敏感性并未改变。结论 此１７株双歧杆菌的耐药性与质粒无直接相关性     

健康人肠道双歧杆菌和大肠杆菌数量在不同季节的动态观察

本文研究了季节因素对肠道重要菌群双歧杆菌和大肠杆菌的影响。在春、夏、秋、冬四季分别定量检测Ｔ２０名健康青年粪便中的上述两种菌,结果表明：两种细菌数值均有明显的季节变动规律,双歧杆菌秋季显著高于春、夏冬三季;大肠杆菌夏季显著高于冬、春季,而与秋季的差异无显著意义。ｚＬ歧杆菌与大肠杆菌在一年四季中的比值也有明显的季节特征,即秋季明显高于其它三季。     

海藻酸钠/壳聚糖微胶囊固定化大肠杆菌的研究

本文以大肠杆菌ＤＨ5α为模型体系 ,探索了大肠杆菌ＤＨ5α用海藻酸钠 壳聚糖 (ＡＣＡ)微胶囊培养的可行性 ,并观察了微囊化大肠杆菌ＤＨ5α细胞生长与物料渗透性能 ,通过将ＡＣＡ微胶囊移植到实验组小鼠体内 ,考察了ＡＣＡ微胶囊作为口服药物载体的可能性。1　材料和方法1.1　材料壳聚糖 ,本实验室改性所得 ;海藻酸钠 ,ＫｅｌｃｏＤｉｖｏｆＭｅｒ ｃｋＣｏ .Ｉｎｃ .ＵＳＡ ;其它试剂均为国产分析纯。大肠杆菌ＤＨ5α ,长春生物制品所 ;ＬＢ培养基 ,华美生物制品公司提供。昆明系小白鼠 18～ 2 0ｇ ,解放军大连高等医学专科学校实验动物中…     

多孔菌液体发酵的研究

多孔菌Ｐｏｌｙｐｒｏｕｓｅｌｅｇａｎｓ（Ｂｕｌｌ）Ｆｒ。是一种新开发的真菌类中药材资源,经对其几个主要液体发酵培养条件的筛选研究,初步得出多孔菌深层发酵的基础参数：ＰＨ５．６～０．１;温度２４～２８℃;培养基为麦麸２．５％,蔗糖４％,ＮＨ４ＮＯ３０．０５％,ＫＨ：ＰＯ４０．０５％,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０２５％。另外,摇瓶种子培养条件是：ＰＨ５．６～６．１;温度２８℃;培养基为ＰＤＡ＋ＶＢ１,添加３‰琼脂,时间为９６ｈｒ。     

正常仔猪肠道内大肠杆菌定居的研究II．正常仔猪肠道内大肠杆菌血清型排除机制的探索

通过给26头仔猪口服大肠杆菌NY—10菌林(O33,：K．H)和ST-A菌株(未定型,但与前者血清型不同),研究了不同日龄仔猪肠道内大肠杆菌定居的规律。 给不同日龄仔猪口服109一3×1010个细菌,定期从各猪的直肠粪样中分离大肠杆菌,并崩相应抗血清对所分离的各株大肠杆菌加以鉴定。结果表明,NY-10或ST-A菌液经初生仔猪口服后,两者在肠道内的定居模式基本相同;NY-10菌株在不同日龄仔猪肠道内的定居曲线也大体一致。一个血清型大肠杆菌在肠道内占100％的优势期为5—6天,而总的定居期约10天,以后则被其它血清型大肠杆菌更替。在最初接种的NY 10株菌于定居肠道中消失后7一12天,给仔猪再次口服该栋菌4×1010个。发现该株菌迅速被排除,或者不篚从这些仔猜的直肠棉拭中分离到,或者仅在肠遒中定居很短的时期。与此相反,初次口服过ST-A菌株的仔猪,在口服NY一10株苗后,则后者在这些仔猪肠道内的定居模式与初次口服NY一10株菌的定居曲线相似。本试验证实,仔强肠道对大肠杆菌的排斥具有抗原特异性,其机制可能主要是寄上肠道对定居菌的主动免疫应答所致的免疫排除。     

053肠聚集性大肠埃希菌的聚集黏附性菌毛引起肠上皮细胞的炎性反应

肠聚集性大肠埃希菌（大肠杆菌）是导致腹泻的病原菌，在发展中国家儿童中常引起水样腹泻。最近，有学者认为肠聚集性大肠杆菌是引起旅行者腹泻的最主要原因。感染肠聚集性大肠杆菌后，最典型的症状是黏性水样便，同时伴有发热、恶心、呕吐等。肠聚集性大肠杆菌的发病机制包括3步：①黏附到肠黏膜；②诱导黏液生物膜的产生与沉积；③炎症反应和细胞因子的释放。肠聚集性大肠杆菌黏附在人的肠黏膜上需要聚集黏附性菌毛（AAf），     

大肠杆菌卷曲菌毛的生物合成和致病性

大肠杆菌卷曲菌毛是其菌体表面的一种含纤维素样蛋白质附着器官,出现在大肠杆菌生理和病理过程中。卷曲菌毛可以通过黏附等作用介导大肠杆菌侵袭宿主;作为一种细菌淀粉样蛋白,卷曲菌毛有可能引起淀粉样蛋白相关疾病;卷曲菌毛可以诱导宿主炎症因子水平升高,引起脓毒血症;卷曲菌毛可以和纤维素等一起构成菌外基质,参与生物膜的形成。我们简要综述了大肠杆菌卷曲菌毛的生物合成、生物学功能和致病性。     

白腐菌产锰过氧化物酶条件的研究

白腐菌ＰｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍＭＩＧ．３８３降解桉木时具有显著的选择性,３０天内降解３７．２３％Ｋｌａｓｏｎ木素,７．２９％综纤维素。该菌株产胞外锰过氧化物酶,并在高碳低氧培养基中显示较高酶活,静置液体培养的优化培养条件是（Ｌ＾－１）：１０ｇ葡萄糖,２ｍｍｏｌ酒石酸铵,１０ｍｍｏｌｐＨ４．５醋酸钠缓冲液;１ｇ吐温８０,２ｇＫＨ２ＰＯ４,０．５ｇＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ,０．     

高氧预适应增强大鼠心肌Mn—SOD基因表达及缺血梗塞心肌 …

本文报告了一种新的心脏预适应途径即高氧预适应（ｈｙｐｅｒｏｘｉｃｃ ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＨＯＰ）。为观察高氧预适应对鼠心肌抗氧化酶的影响,我们给大鼠吸入８０％￣８５％氧气,１ａｔｍ,每天６ｈ,连续７ｄ（ＨＯ组）,然后进行实验并与室内空气环境下喂饲７ｄ的大鼠（对照组）进行比较。３０只Ｗｉｓｔｅｒ大鼠随机分为６组,每组５只：ＨＯ－１和对照－１组,ＨＯ吸入结束后直接处死,采用Ｎｏｒｔｈｅｎ杂