尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子X的结合性质

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ（ＡＣＦⅡ）与活化凝血因子Ⅹ（ＦＸａ）在钙离子作用下形成了１：１的复合物,从而延长凝血时间。这个复合反应是依赖于钙离子的,ＡＣＦⅡ在没有钙离子存在条件下不能与ＦＸａ形成复合物。ＡＣＦⅡ是凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合蛋白家族中一个新发现的成员,其相对分子质量为２９４６８．１。ＡＣＦⅡ分子中含有２５１个氨基酸残基,其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似。ＡＣＦⅡ在抗凝血反应中     

凝血因子Ⅸ/凝血因子Ⅹ结合蛋白家族的研究进展

凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族.它们存在于蝰科蛇毒中,不具有酶活性,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间.在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ/Ⅹ分子中γ-羧基谷氨酸区域.它们彼此之间具有很高的序列同源性,都是由两条同源的肽链通过一对二硫键相连.两条肽链都具有C型糖识别区的二硫键构型,各含一个钙离子结合位点.其中habu凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白的晶体结构已经测定,除掉相互交叠的中心环外,两条肽链都具有类似于鼠甘露糖结合蛋白的结构.     

尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACFⅡ的纯化及特性

利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法,从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ＡＣＦⅡ（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒⅡ）。纯化的ＡＣＦⅡ在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ－ＰＡＧＥ图谱上均呈单一区带。ＡＣＦⅡ由两条分子量为１４．６ｋＤ的肽链通过二硫键连接在一起,其等电点为７．０。ＡＣＦⅡ具有显著的抗凝血活性,在体外延长ＰＰＴ时间的最终浓度为０．４ｍｇ／Ｌ。Ａ     

尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACF II 的纯化及特性

利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法, 从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ＡＣＦＩＩ（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒＩＩ） 。纯化的ＡＣＦＩＩ在ＰＡＧＥ、ＳＤＳＰＡＧＥ和ＩＥＦＰＡＧＥ图谱上均呈单一区带。ＡＣＦＩＩ由两条分子量为１４．６ ｋＤ 的肽链通过二硫键连接在一起, 其等电点为７．０。ＡＣＦＩＩ具有显著的抗凝血活性, 在体外延长ＰＰＴ 时间的最终浓度为０ ．４ ｍｇ／Ｌ。ＡＣＦＩＩ不具有类凝血酶活性、磷脂酶Ａ２ 活性和纤溶活性,也没有出血活性和毒性, 是一种潜在的高效抗凝药物。     

尖吻蝮蛇毒内一种新的抗血小板凝集蛋白agkisacutacin的纯化及其性质

从皖南尖吻蝮蛇毒中经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化得到抗血小板凝集蛋白agkisacutacin ,纯化的agkisacutacin由分子量为 1 4kD和 1 5kD的 2条肽链通过二硫键连接 ,能有效抑制ristocetin诱导的血小板凝集 (IC5 0 为 1 8.5mg/L) ,能轻微抑制凝血酶诱导的血小板聚集 (IC5 0 为 1 .2 2 g/L) ,但对ADP、胶原诱导的血小板聚集无影响。agkisacutacin不具有纤溶活性、抗凝活性、磷脂酶A2 活性和出血活性 ,是一种潜在的安全、有效的抗血小板性栓塞的药物     

尖吻蝮蛇毒内一种新的抗血小板凝集蛋白agkisacuta …

从皖南尖吻蝮蛇毒中经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化离纯化得到抗血小板凝集蛋白ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉｎ,纯化的ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉｎ由分子量为１４ｋＤ和１５ｋＤ的２条肽链通过二硫键连接,能有效抑制ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ诱导的血小板凝集（ＩＣ５０为１８．５ｍｇ／Ｌ）,能轻微抑制凝血酶诱导的血小板聚集（ＩＣ５０为１．２２ｇ／Ｌ）,但对ＡＤＰ、胶原诱导的血小板聚集无影响。ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉ     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅳ的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素（简称ＡａＨⅣ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ,等电点为ｐＨ５．０．从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇＡａＨⅣ纯品．ＡａＨⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ．     

用尖吻蝮蛇毒蝮蛇毒及抗蛇毒血清处理小鼠S180,EAC腹水癌的初步观察

本文报道了尖吻蝮蛇毒、蝮蛇毒及抗蛇毒血清能使接种S180、EAC腹水癌的小鼠明显延长存活时间、降低接种率,但不能完全阻止癌细胞生长。体外具有较明显的导致癌细胞肿胀、膜破裂、核纤维化、坏死等。从腹水酶活力测定及抗血清初步研究结果表明,癌细胞病变中产生的某些抗原物质可能与蛇毒中的酶和毒蛋白相近。因此注射蛇毒后可在体内产生相关抗体,中和癌细胞产生的毒素以达到治疗目的。     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素IV的纯化与初步鉴定

从皖南尖吻蝮蛇毒液中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量血毒素（简称ＡａＨⅣ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为４４ｋＤ,等电点为ｐＨ５．０。从５００ｍｇ粗毒中可获得２０ｍｇ ＡａＨⅣ纯品。ＡａＨⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量（ＭＨＤ）为０．４μｇ。     

尖吻蝮蛇毒中一种具有抗补体活性金属蛋白酶的分离纯化及部分性质鉴定

通过离子交换和凝胶过滤层析从湖南产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出1个抗补体活性蛋白AACI-I.还原与非还原SDS-PAGE测得其表观分子质量分别为26 kD和22 kD,等电聚焦电泳显示其等电点为pH 8.9.它能抑制补体经典途径和替代途径的溶血,且该作用具有量效和时效性.AACI-I可依次水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链,此活性能被EDTA、EGTA和1,10-phenanthroline完全抑制,不受PMSF、SBTI作用影响.同时,该蛋白无精氨酸酯酶活性,提示AACI-I是金属蛋白酶.另外,AACI-I具有azocasein水解活性和水肿活性,当0.01μg/g AACI-I注射小鼠足趾,其诱导肿胀率约为(14.06±6.78)%,而小鼠皮下注射2.6μg/g AACI-Ⅰ后没有发现其有出血毒活性.     

蕲蛇蛇毒抗凝血因子的分离纯化与特性

目的 寻找蕲蛇蛇毒中的抗凝血因子。方法 利用硫酸铵沉降、阴离子交换层析、阳离子交换层析及高效液相色谱层析,从蕲蛇蛇毒中分离纯化到一个抗凝血因子。结果 纯化的这一组份在PAGE、SDS—PAGE上均呈单一区带,分子量约为25．4kD,由两条分子量分别为15．0kD和16．0kD的肽链通过二硫键连接在一起。这一组份在体外显著地延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,但不延长牛凝血酶时间,也不具有磷脂酶A2活性、纤溶活性和出血活性。结论 蕲蛇蛇毒中舍右一种新的抗凝血因子。     

尖吻蝮蛇毒中精氨酸脂酶的分离纯化与性质研究

目的：从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出精氨酸脂酶并进行性质研究。方法：利用亲和层析、DEAE—Sepharose FF、Superdex 75柱对尖吻蝮蛇毒进行分离纯化。结果：分离纯化出的2个精氨酸脂酶活性组份分子量分别为36000、30000,它们的HPLC纯度也都达到97％以上。结论：为其临床应用打下了基础。     

尖吻蝮蛇毒的聚丙烯酰胺凝胶电泳，冬眠特异蛋白的发现

目的 比较冬眠期、冬眠前后、活动期尖吻蝮蛇毒的组分.方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果 发现了冬眠期尖吻蝮蛇毒中有一个特异性增强的蛋白质成分,进入冬眠几天后,该成分就可以检测到,出眠几天后及活动期蛇毒中不可见.结论 该成分应该与尖吻蝮冬眠密切相关,暂且称其为"冬眠特异蛋白".     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2Ⅱ的表达及其生化特征

将尖吻蝮蛇毒酸性磷酯酶 A2 ( A.a APLA2 )基因克隆至温敏表达载体 p BLMVL2 ,在大肠杆菌 RR1中成功诱导表达 .表达产物 A.a APLA2 约占细菌蛋白质总量 2 5 % ,并以包涵体形式存在 .纯化包涵体后 ,将产物变性、复性 ,然后用 FPLC Superose TM1 2纯化 ,产物经过 SDS- PAGE检测只有单一条带 .对纯化后的表达 A.a APLA2 进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定 .结果显示 ,A.a APLA2 的酶活性处于变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶 A2 和碱性磷脂酶A2 的酶活性之间 ,没有抑制血小板聚集活性 ,只有微弱溶血活性 .最后对 PLA2 的结构与这些活性的关系进行了讨论     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮蛇毒中纯化出两个出血毒素。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸分别占２３％和２４％。ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具     

尖吻蝮蛇毒活性肽K组分对血小板聚集和超微结构的影响

目的应用电镜研究尖吻蝮蛇毒活性肽(K组分)对血小板聚集和超微结构的影响,以探讨其抗血小板聚集的机制。方法取2周内未服任何药物健康志愿者静脉血,观察K组分对二磷酸腺苷(ADP)和胶原(collagen)诱导的血小板聚集作用的影响。将已调好的PRP分为5组,A组为空白对照组,B、D组为加入等体积的生理盐水组,C、E组为加K组分组。B、C组分别加血小板聚集诱导剂ADP,D、E组分别加血小板聚集诱导剂胶原,各组分别制成超薄切片样品进行电镜观察、摄片,测出其聚集抑制率。结果K组分能抑制由ADP和胶原诱导的血小板聚集,剂量与抑制率成量效关系,IC50经直线回归分别为0.067和0.088μmol/L。ADP和胶原组血小板形态不规则,突起明显增多。K组分组血小板形态基本规则,膜表面清晰光滑,颗粒较ADP与胶原组明显增加,胞浆空泡化现象减轻。结论K组分明显抑制ADP和胶原诱导的血小板聚集反应及其超微结构的改变。     

抗蝮蛇毒血清所致血清病的中西医结合治疗

血清病是指注射动物免疫血清后所并发的一种免疫复合物性疾病。抗蝮蛇毒血清由马血清提炼制成．我们在使用抗蝮蛇毒血清治疗蝮蛇咬伤过程中,经常遇到血清病病例。其临床主要表现为发热、各种形态的皮疹、淋巴结肿大、关节痛等．严重者可出现肝、肾等重要脏器功能损害、