虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛（岛津ＤＩＯＬ－１５０柱）和阳离子交换（岛津ＷＣＸ－１柱）高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）毒液中分离提纯透明质酸酶（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ,ＥＣ３．２．１．３５）．经等电聚焦电泳为一条带,ｐＩ＝７．２．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ,经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ｐＨ３．５─５．５范围内有较大活性,最适ｐＨ值为４．０;在ｐＨ４．５─６．０范围内稳定,在反应温度为３０─６０℃时有较大活性,最适温度为５０℃;对热稳定,０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活性有一定的稳定作用．３％的肝素、５００μｍｏｌ／Ｌ的Ｈｇ~（２＋）、Ｆｅ~（２＋）、Ｃｕ~（２＋）对酶活性有明显的抑制作用。     

纯化超氧化物歧化酶的新工艺

为探索简便实用纯化ＳＯＤ的工艺路线,以人或猪血红细胞溶血上清液,经铜胺中空纤维透析器（分子量截留值为１５ｋＤ）透析和超滤,收集分子量大于１５．０ｋＤ的物质,再加热６０℃１０ｍｉｎ,离心取上清即得。Ｃｕ、ＺｎＳＯＤ和ＭｎＳＯＤ分子量分别为３２．０ｋＤ和８０．０ｋＤ。人血和猪血纯化的ＳＯＤ总收率分别为８８．２％和８９．２％,比活性分别为１７４２９Ｕ／ｍｇ和１８２２８Ｕ／ｍｇ。工艺简便实用,适于工业纯化生产。     

贻贝（Perna viridis）超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

采用５５－６０℃热处理,硫酸铵分级深沉和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析将贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ纯化到均一程度。每１００ｇ鲜贻贝肉可得到ＳＯＤ制品,总活力３６８９ｕ,比活力７８２ｕ／ｍｇ,回收率为２１％。测得该酶分子量为３２ｋＤ,亚基分子量约为１６．４ｋＤ,最大紫外吸收波长为２６８ｎｍ,,贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。     

柑叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质的研究

柑（Ｃｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃｏ）幼叶中存在高活性的酸性蔗糖酶。经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－琼脂糖离子交换层析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析纯化,活性回收率６．４％ ,纯化倍数１７９．２ 倍。纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示１ 条蛋白带,其亚基分子量４０ ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析法测得分子量为８０ ｋＤ。推测该酶由两个相同亚基构成。以蔗糖为底物测定该酶的表观Ｋｍ 为１．６×１０－ ２ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,Ｖｍ ａｘ为１００ ｍ ｇ 还原糖·ｍ ｇ－ １蛋白质·ｈ－ １。最适ｐＨ ５．０,酸碱稳定区在ｐＨ ４．５—５．５ 之间。最适温度５５℃     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

中温碱性脂肪酶的研究：Ⅲ.扩展青霉PF868变株碱性脂肪酶的纯化及其…

扩展青霉ＰＦ８６８变株发酵液经硫酸铵盐析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００及Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析纯化,获得纯化倍数为３２．４的酶粉。该酶分子量为２３４４２Ｄａｌ,酶学特性表明：该酶的最适作用温度为３２℃,５０℃保温３０ｍｉｎ仍保留５０％酶活性,最适ｐＨ为９．０,作用ｐＨ稳定范围在７．０－１０．０之间,Ｃａ＾２＋和Ｍｇ＾２＋对酶有激活作用,Ｆｅ＾２＋,Ｃｕ＾２＋和Ｍｎ＾２＋酶活力有抑制作用。     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

虎纹捕鸟蛛毒液中透明质酸酶的纯化和部分性质的研究

用分子筛和阳离子交换高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛毒液中分离提纯透明质酸酶。经等电聚焦电泳为一条带,ＰＩ＝７．２,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为４０ｋＤ,经凝胶过滤测得分子量为４０．７ｋＤ。以透明质酸为底物时在ＰＨ３．５－５．５范围内有较大活性,最适ＰＨ值４．０,在ＰＨ４．５－６．０范围内稳定,在反应温度为３０－６０℃时有较大活性,最适温度为５０℃;对热稳定。０．１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ对酶活     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２ 株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４２ 产脂肪酶活力为５９６ｕ／ ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ） 为：糊精１０ 、黄豆饼粉３０ 、尿素１０ 、Ｋ２ＨＰＯ４ ０－５ 、ＭｇＳＯ４ ０－５ 、ＮａＣｌ １ 和ＡＥＯ９ ０ ．５ ,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９ ．５ ～１０－０ ,在２６ ℃培养４８ｈ 。用ＰＶＡ 橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９ ．８ ,最适温度３７ ℃,在ｐＨ８－６ ～１０－２ 于５ ℃存放２４ ｈ ,酶活力不变。０－１４ｍｏｌ／Ｌ 的氯化钙有较大的激活作用。     

花生根瘤菌类菌体氢酶的分离提纯及特性

花生根瘤菌类菌体经超声波破碎,ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶解,正已烷－硫酸铵处理后,再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ凝胶柱层析等纯化步骤,获得凝胶电泳纯的膜结合态氢酶,比活为７１．４μｍｏｌＨ２ｍｇ－１Ｐｒｏｔｍｉｎ－１,为类菌体吸Ｈ２活性的２１１倍。纯化的氢酶分子量为１１０ｋＤ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后,呈现两个蛋白带,分子量分利为６５ｋＤ和３５ｋＤ。纯酶的Ｎｉ含量为０．６２ｍｏｌＮｉ／ｍｏｌ氢酶。在磷酸缓冲液中其活性的最适ｐＨ为６．５。ＤＣＩＰ、亚甲蓝、铁氰化钾、细胞色素Ｃ均可作为氢酶的电子受体,其中以ＤＣＩＰ为最适。     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４－２产脂肪酶活力为５９６ｕ／ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ）为：糊精１０、黄豆饼粉３０、尿素１０、Ｋ２ＨＰＯ４０．５、ＭｇＳＯ４０．５、ＮａＣｌ１和ＡＥＯ９０．５,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９．５～１０．０,在２６℃培养４８ｈ。用ＰＶＡ橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９．８,最适温度３７℃,在ｐＨ８．６～１０．２于５℃存放２４ｈ,酶活力不变。０．１４ｍｏｌ／Ｌ的氯     

蚕豆种子超氧物歧化酶的纯化及性质

蚕豆种子粗提液经乙醇－氯仿混合物处理、丙酮沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ层析,获得比活性为２８５２单位ｍｇ－１蛋白的超氧物歧化酶．经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明酶已纯化到均一程度．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２敏感,说明它为Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ．酶分子量和亚基分子量分别为３１０００和１４４００,说明它是由两个相同亚基组成。该酶在７０℃以下和在ｐＨ５—９条件下稳定．紫外区最大吸收峰为２７３．５ｎｍ。     

猴头子实体锰型超氧物歧化酶的纯化及其性质鉴定

猴头子实体的超氧物歧化酶仅Ｍｎ－ＳＯＤ１种,有其资源和学术研究上的意义。其粗酶液经（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析,ＤＥ５２和ＣＭ５２离子交换柱层析,纯化到电泳单斑点均一程度,其比活性为３０９６．５ｕ／ｍｇ,活性回收率为１４．８％。纯化的Ｍｎ－ＳＯＤ分子量为４７．０ＫＤ,亚基分子量为２３．３ＫＤ。金属元素分析表明每个亚基含１个Ｍｎ原子。该酶在紫外区有２个吸收峰,分别在２１８．４ｎｍ和２７６．０ｎｍ。该酶的理     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

地衣芽孢杆菌β－甘露聚糖酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＮＫ－２７菌株发酵产生的β－甘露聚糖酶（β－ｍａｎｎａｎａｓｅ）经硫酸铵盐析沉淀,两次ＤＥＡＥ纤维素和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００离子交换柱层析以及制备ＰＡＧＥ筹步骤,获得了凝胶电泳均一的样品。用ＳＤＳ－凝胶电泳测得纯化后的β－甘露聚糖酶分子量为２６ｋＤ,用凝胶聚焦电泳测得等电点ＰＩ为５．０。酶反应的最适ｐＨ为９．０,最后温度为６０℃,稳定ｐＨ为６．０—９．０,稳定温度为４０℃。金属离子中Ｍｇ￣（２＋）、Ｃａ￣（２＋）、Ｆｅ￣（２＋）、Ｎｉ￣（２＋）对该酶有一定的激活作用;而Ｓｎ￣（２＋）、Ｚｎ￣（２＋）、Ａｌ￣（３＋）、Ａｇ￣＋和Ｈｇ￣（２＋）对该酶有强烈的抑制作用。ＮＫ－２７菌株的β－甘露聚糖酶对魔芋葡萄甘露聚糖和角豆胶半乳甘露聚糖的Ｋｍ值分别为７．１４和５．５６ｍｇ·ｍｌ￣（－１）;Ｖ＿（ｍａｘ）分别为２００．５３和１５７．４５μｍｏｌ·ｍｇ￣（－１）·ｍｉｎ￣（－１）。     

微生物生产弹性蛋白酶的研究

从１０个不同省区采集的５００多个土样中,分离得到了多株产弹性蛋白酶的菌株,主要集中在黄杆菌属和色杆菌属中。经过细胞工程技术处理后,黄杆菌属中的Ｆ－１２２菌在摇瓶发酵中的产酶能力达到２４０ｕ／ｍｌ,比出发菌株提高了１．５倍。该酶在Ｔｒｉｓ—ＨＣｌ缓冲液中最适ｐＨ为８．０,最适酶解温度４３℃。在ｐＨ６．０—９．５范围内稳定。ＣｕＳＯ４、ＺｎＳＯ４和ＦｅＳＯ４强烈抑制酶的活性,ＮａＣｌ、ＫＣｌ对酶活影响微弱。６０℃,３０ｍｉｎ酶活完全丧失。     

人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究

用硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶,酶纯化１９３２４倍,比活力为５７９７Ｕ／ｍｇ蛋白．提取酶液经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为４１．２ｋＤ,等电点为ｐＨ４．８．氨基酸组成分析表明该酶由３８８个氨基酸残基组成,Ｎ端氨基酸为精氨酸。酶的最适ｐＨ为６．５,ｐＨ小于５．０或大于９．０时不稳定;最适温度为３７℃,对热不太稳定,以腺苷及２－脱氧腺苷作为底物,其Ｋｍ分别为８７μｍｏｌ／Ｌ和４１μｍｏｌ／Ｌ。     

与光系统Ⅱ颗粒结合的对DTT敏感的蛋白酶的纯化和性质

菠菜光系统Ⅱ颗粒的１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ抽提液经ｂｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｍ疏水层析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析分离得一种对ＤＴＴ敏感的蛋白酶。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２凝胶过滤测得该酶的分子量为３７ｋＤ,其为单体酶。该酶可降解１８ｋＤ和２４ｋＤ水溶性蛋白质,分别产生１３．２ｋＤ、１２ｋＤ、１０．５ｋＤ和２３ｋＤ、２２ｋＤ、２０ｋＤ片段,最适ｐＨ为８．０,对ＮａＣｌ不敏感,对ＤＴＴ和β－Ｍｅ敏感。抑制实验表明该酶不属丝氨酸类蛋白酶。     

用国产微孔玻璃珠初步纯化人u-PA

用国产微孔玻璃珠从ＣＤ－１工程细胞株培养上清中纯化ｕ－ＰＡ,摸索了微孔玻璃珠结合ｕ－ＰＡ的条件和洗脱方法,比较了硫酸铵线性梯度洗脱或２５％乙二醇洗脱ｕ－ＰＡ活性的结果,最后确定洗脱的条件为０．２５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ、１～２ｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ９．３。经此一步纯化,ｕ－ＰＡ比活性达到１５３２９ＩＵ／ｍｇ,回收率７８％,还原条件下ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分子量为５２×１０３的单链ｕ－ＰＡ占７４％。     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ５２等层析步骤,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂。纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍ值为１．２４×１０４ｍｏｌ／Ｌ。此外还探讨了部分金属离子对该酶的影响。