三氧化二砷诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bcl-2保护作用的机制研究

探讨三氧化二砷 (As₂ O₃)对人宫颈癌HeLa细胞的生物学效应和Bcl -2的高表达对这一效应的影响 .通过MTT ,克隆形成实验 ,形态观察 ,流式细胞仪 ,DNA凝胶电泳 ,细胞凋亡原位检测 (TUNEL) ,RT PCR ,Northernblot,Westernblot等方法发现As₂ O₃明显降低HeLa细胞存活率 ,并诱导其凋亡和细胞周期G2 /M期阻滞 ,分析显示As2 O3可能主要通过抑制c -myc基因和病毒致瘤基因的表达来诱导HeLa细胞凋亡 .Bcl -2的高表达也可能正是通过降低As₂ O₃对G2 /M期阻滞 ,逆转As₂ O₃对c -myc基因的降调节 ,减轻As₂ O₃对病毒致瘤基因的表达抑制作用 ,来部分阻止这种凋亡的发生 .我们还发现As₂ O₃能引起Bc1-2高表达HeLa细胞G2 /M期的弱阻滞 ,降调Bcl -2的表达以及略微抑制病毒致瘤基因的表达 ,这可能是As₂ O₃仍能诱导Bcl -2高表达HeLa细胞凋亡的原因 .     

Fas ligand在宫颈癌形成中的作用及机制研究进展

FasL(Fas ligand)是一种II型膜蛋白,属于肿瘤坏死因子家族,在体内参与诱导细胞凋亡,发挥一定生理作用。同时, FasL在许多肿瘤组织中高表达,在宫颈癌的发生发展、转移及侵袭中发挥重要作用,其具体作用机制涉及多条信号通路,包括参与肿瘤细胞的被动逃逸与主动攻击、维持机体炎症状态以及发出非凋亡信号促进肿瘤发生等。FasL高表达会导致不良的肿瘤预后,降低患者生存率。由于FasL可参与肿瘤细胞免疫逃逸,因此,针对FasL的靶向治疗可能为肿瘤基因治疗或免疫治疗提供一个新的方向。该文对FasL在宫颈癌发生发展中的作用机制及其在治疗方面的应用加以综述,从而为探索新的宫颈癌治疗靶点提供科学依据。     

miRNAs表达异常在宫颈癌转移机制中的研究进展

原发宫颈癌(cervical cancer,CC)的早期转移是导致其治疗效果差的主要原因之一.因此,全面了解宫颈癌的转移机制至关重要.miRNAs(microRNAs)是一种小的非编码RNA分子,主要通过转录调控基因的表达,在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用.miRNAs通过调节上皮-间质转化(epithelial-...     

宫颈癌差异表达基因筛选及功能分析

目的:筛选参与宫颈癌发生、发展的关键基因,为临床诊疗提供新的靶点。方法:在NCBI-GEO数据库中筛选多组宫颈癌基因表达检测数据集,利用GEO2R分析工具筛选各组数据集的差异表达基因;应用R分析筛选不同数据集之间共有的差异表达基因;利用DAVID在线分析对差异表达基因进行功能聚类和通路分析;利用STRING分析差异表达基因编码蛋白之间的相互作用关系。结果:共选择6组表达数据集,筛选得到59个差异表达基因(宫颈癌组织vs正常组织),表达差异至少达2倍,其中包含50个表达上调基因及9个表达下调基因。这些差异表达基因参与细胞周期、DNA复制、细胞分裂等生物进程。蛋白互作分析表明,这些差异表达基因多数存在相互作用。结论:利用生物信息学方法对不同来源的基因检测数据进行整合分析,有助于更准确的筛选对宫颈癌发生、发展过程具有重要作用的关键基因,本文筛选的宫颈癌差异基因为进一步研究宫颈癌发生、发展的分子机制及临床诊疗提供思路。     

p16和bcl-2在宫颈上皮瘤样病变及宫颈癌中的表达

目的探讨p16和bcl-2表达产物在宫颈上皮瘤样病变及宫颈癌中表达的意义。方法对正常宫颈鳞状上皮、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织共69例,采用免疫组织化学EliVision法,对宫颈癌变过程中p16和bcl-2蛋白进行研究,将结果进行统计分析。结果p16蛋白在CIN中的表达高于正常宫颈上皮(P<0.01),在宫颈癌中的表达也高于正常宫颈上皮(P<0.01),且高于CIN中的表达(P<0.05);bcl-2蛋白在CIN中的表达高于正常宫颈上皮(P<0.01),在宫颈癌中的表达也高于正常宫颈上皮(P<0.01),但与CIN中表达无差异。p16和bcl-2两种蛋白在CIN和宫颈癌中的表达无明显差异。结论p16和bcl-2蛋白的表达与宫颈癌的发生有关,提示这两种蛋白有可能作为高危人群早期筛查的一种免疫组化指标。     

HGF和EZH2在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)、果蝇zeste基因增强子2(EZH2)在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:选取2016年10月到2018年1月期间在新疆医科大学附属肿瘤医院接受治疗的宫颈癌患者50例,收集其手术切除的病理组织作为宫颈癌组的检测标本,另选取同期在我院收治的子宫肌瘤患者,收集其行全子宫切除术时切除的宫颈组织,其中上皮内瘤样病变(CIN)组织和正常宫颈组织各50例,CIN组织作为CIN组的检测标本,正常宫颈组织作为对照组的检测标本。比较宫颈癌组、CIN组和对照组标本中HGF和EZH2的阳性表达情况。分析HGF和EZH2的表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系,分析宫颈癌组织中HGF、EZH2表达的相关性。结果:各组标本中的HGF和EZH2的阳性表达率整体比较差异均有统计学意义(P0.05),宫颈癌组、CIN组的HGF和EZH2的阳性表达率均明显高于对照组,且宫颈癌组EZH2的阳性表达率高于CIN组(P0.05)。宫颈癌组织中HGF和EZH2的表达与年龄、肿瘤类型、肿瘤大小无关(P0.05),临床分期II期、有淋巴结转移、病理分级G3的宫颈癌组织中HGF和EZH2的阳性表达率高于临床分期I期、无淋巴结转移、病理分级G1+G2的宫颈癌组织(P0.05)。经Spearman相关分析显示,宫颈癌组织中HGF与EZH2表达呈正相关(P0.05)。结论:HGF和EZH2在宫颈癌组织中呈高表达,且其表达水平与临床分期、淋巴结转移、病理分级有关。     

PLA2G7基因在宫颈癌中的表达及与临床预后和免疫浸润的关系

通过多种肿瘤数据库和生物信息学方法分析磷脂酶A2-Ⅶ(PLA2G7)的基因在宫颈癌中的表达与预后及免疫浸润的关系。利用cBioPortal、GEO、GEPIA2、TCGA数据库分析PLA2G7基因的遗传变异、表达情况及其与患者预后的关系。利用基因集富集分析(GSEA)和基因集变异分析(GSVA)方法研究TCGA中宫颈癌患者PLA2G7表达的生物学功能及参与的信号通路。通过TIMER数据库分析PLA2G7表达与免疫浸润细胞及其标记基因之间的相关性。结果显示：与正常宫颈组织相比,PLA2G7在宫颈肿瘤组织中高表达;PLA2G7的高表达显著富集在趋化因子信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、T细胞受体信号通路等免疫相关通路上;PLA2G7高表达与总生存期(OS)的延长相关(log-rank P=0.030);亚组分析表明,PLA2G7高表达在年老组、stageⅠ&stageⅡ和G3&G4中与较长的OS相关;PLA2G7表达与宫颈肿瘤组织中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞的浸润水平呈正相关,并与免疫细胞...     

hCG嵌合肽在大肠杆菌中高表达的研究

目的：研制基因工程嵌合肽（CP）抗原的科学意义和应用价值，除取决于CP构建物能否体现强免疫原性和光或无MHC遗传限制外，它还应能在生物系统中被高表达，对于后，我们作了多方面的探索，包括在系列hCG CPs(-1,-7,-10,和－11）的N端再接一段25聚肽的研究。方法：插入片段选自可高表达的猪卵透明带（pZP)－4蛋白的N端，在上述hCGCPs的衍生物（CP12，CP15－17）构建中，先合成它的编码序列正负链4个DNA片段，然后配对退火，再连接成一个大片段，由于其5'端为EcoRI(E)粘性末端，3'端接了母体CPs 5'端ATG后至B HI(B)粘性末端的17bp序列，故此合成片段被直接经E和B双酶切构建pBV221/CP系列重组质粒，并分别经DNA测序验证，结果：在SDS－PAGE分析中，新构建的CP衍生物在宿主菌中的表达量均比母体CPs有明显提高，且的特异表达都为单抗OT3A的蛋白印迹试验所证实。另外，用兔抗pZP多抗的检测显示阴性结果，表明所选用的pZP-4肽段内无B细胞表位存在。意义：本工作不仅为今后其他CP分子设计和高表达研究结累了经验，也扩展了可供筛选的hCG CP避孕和／或肿瘤治疗性疫苗原系列。     

FOXP3 在食管癌中表达规律研究

目的:研究FOXP3在食管癌中表达规律。方法:选择2010年1月~2010年10月在我院接受手术治疗的食管鳞癌患者48例,选取所有患者肿瘤组织及正常食管黏膜组织进行免疫组化分析,观察FOXP3在食管癌细胞系Eca-109、正常食管黏膜细胞系Eca-109、人食管癌组织、正常食管黏膜组织的表达,FOXP3在不同年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移上的表达。结果:FOXP3在食管癌组织中阳性表达率(85.42%)显著高于正常食管黏膜组织(14.58%),P0.05。FOXP3在正常细胞系表达为阴性,在食管癌细胞系Eca-109中的表达阳性,FOXP3在正常食管黏膜组织中表达阴性,在食管癌组织中表达阳性。在食管癌组织中,FOXP3阳性表达率和食管癌患者的性别、年龄等不同临床病理特征均无关联(P0.05),和T分期、TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移等存在关联(P0.05)。结论:食管癌细胞能够表达FOXP3,且其表达水平和食管癌的进展关系密切,可以作为临床诊断及治疗食管癌的重要参考指标。     

NS398抑制宫颈癌Hela细胞增殖及MMP2的表达

目的：NS398是非甾体类抗炎药物的一种,它可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,但其在肿瘤发展中的作用机制尚不清楚。宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,其侵袭转移是患者死亡的主要原因。基质金属蛋白酶几乎能降解细胞外基质中的各种蛋白质成分,在肿瘤侵袭转移中起着十分关键的作用。本文则以宫颈癌Hela细胞为研究对象,观察NS398对Hela细胞的增殖及其基质金属蛋白酶2表达的影响,探讨NS398在宫颈癌侵袭转移过程中的作用及可能机制。方法：用不同浓度的NS398（O、25、50、75、100μmol／L）处理宫颈癌Hela细胞48小时,以噻唑蓝（MTT）比色法分析细胞生长抑制率,酶联免疫吸附实验（EuSA）与蛋白免疫印迹技术分别检测MMP2活性及蛋白表达的变化。结果：不同浓度的NS398处理Hela细胞后,MTT法分析显示,NS398可明显降低细胞代谢MTT的能力（P〈0．05）;ELISA检测发现,NS398可减少细胞培养液中活性MMP2含量（P〈0．05）;Western免疫印迹检测显示,NS398可下调细胞MMP2蛋白的表达（P〈0．05）,这些效应均呈剂量依赖性。结论：Ns398呈剂量依赖性抑制Hela细胞的增殖,抑制细胞中MMP2的活性,并下调细胞MMP2的表达。结果提示,NS398可通过抑制肿瘤细胞的增殖而抑制宫颈癌的生长,通过抑制MMP2的活性和下调MMP2蛋白的表达而抑制宫颈癌的侵袭转移,这为NS398在宫颈癌防治中的应用提供了新的实验依据。     

宫颈癌中p53表达和病毒感染的研究

应用PCR对121例宫颈脱落细胞和组织分别检测HPV-16／18和HSV-2DNA。同时应用免疫组化S-P法检测76例宫颈组织中P53过度表达。结果发现,宫颈癌组织中HPV-16／18和HSV-2阳性率分别为61．3％和32．3％,慢性宫颈炎组HPV-16／18和HSV-2阳性率分别为22．5％和20．0％,与正常宫颈组比较均有显著性差异。宫颈癌中HPV-16／18和HSV-2混合感染率为16．1％。p53过度表达率在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌组织中呈梯度递增。另外,宫颈癌组织中P53过度表达与HPV-16／18、HSV-2的感染无相关性。提示：宫颈癌的发生与HPV-16／18关系密切,HSV-2可能与HPV-16／18协同作用导致宫颈癌的发生。宫颈组织中p53过度表达率与宫颈癌的进程有关,这在宫颈癌的防治方面有一定的临床意义。     

Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌形成中的作用机制

<正>宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一,发病率居妇科恶性肿瘤前列,严重威胁女性的健康与生命安全。在全球女性中,宫颈癌为第三大常见肿瘤,是导致肿瘤相关死亡的第四大病因。据最新统计显示,宫颈癌每年新发生病例约52万,死亡病例约28万,其中86%发生在发展中国家[1]。我国每年新发生病例约14万,并逐渐呈年轻化及上升趋势[2]。随着分子生物学方法在肿瘤发生发展研究中的应用,越来越多的基因和信号通路被证明与肿瘤的形成相关,其中Wnt/β-catenin     

基于生物信息学分析宫颈癌中TGFBI的表达及临床意义

为探究转化生长因子-β诱导基因(TGFBI)在宫颈癌(CESC)中的表达及临床意义,利用Oncomine、GEPIA、LinkedOmics、Kaplan-Meier Plotter数据库及Ualcan数据库分析TGFBI在CESC中mRNA及蛋白的表达情况,TGFBI表达与CESC临床特征的关系及其对CESC患者预后的影响,TGFBI在肿瘤组织中的甲基化情况。利用Timer数据库分析TGFBI基因与肿瘤免疫细胞浸润的关系。结果显示:TGFBI在CESC中高表达;在CESC组织中TGFBI甲基化表达水平较正常宫颈组织降低;TGFBI表达与CESC患者的各临床病理参数之间具有一定的相关性,TGFBI表达与CESC患者的组织类型、种族、年龄、肿瘤纯度、放疗、T分期、N分期、M分期、淋巴结转移数量相关(P<0.05)。生存分析表明,TGFBI高表达使CESC患者的总体生存及无病生存率降低(P<0.05)。本研究阐明了TGFBI在CESC组织中高表达可作为CESC诊断、治疗效果及评估预后的判定指标之一。     

宫颈癌相关BLCAP基因的原核表达及条件优化

目的利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件。方法利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL（BLCAP）SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32（a）中,从而构建原核表达重组质粒pET-32（a）-BLCAP,随后将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,所表达的带有His标签目的融合蛋白经Ni^2＋亲和层析纯化回收,并采用SDS—PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定。结果构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主菌经过IPTG诱导表达了分子量约为28ku的融合蛋白,并经优化确定了最佳的诱导表达条件。结论成功构建了pET-32（a）-BLCAP原核表达质粒,表达并经纯化得到了BLCAP目的蛋白,为研究该蛋白的性质及其制备针对该蛋白的抗体奠定了基础。     

FHIT基因在宫颈癌细胞中的表达及其甲基化调控

目的：分析FHIT基因在宫颈癌细胞中表达情况以及甲基化的调控情况。方法：对RJC-1、SiHa、CS1213以及C4-1细胞进行培养,提取这些细胞的DNA并经过亚硫酸氢盐修饰,进行PCR反应和产物的检测。分析FHIT基因在宫颈癌细胞中表达情况以及甲基化的调控情况。结果：RJC-1、CS1213细胞仅有甲基化引物扩增出了目的条带,为完全甲基化状态。其他细胞则是甲基特异性引物与非甲基特异性引物共同扩增出73bp的目的条带,其状态为甲基化杂合性。通过5-aza-CdR处理细胞后,通过实时定量PCR检测FHIT mRNA的表达,显示处理后各种细胞中的FHIT mRNA的表达升高。结论：FHIT基因的甲基化是其表达下调的重要机制之一,是临床研究宫颈癌细胞的重要方向之一。     

bFGF和Endostatin在食管癌中的表达

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮抑素(endostatin)在食管癌侵袭性发生中的作用。方法:应用免疫组化法测定50例食管癌标本中bFGF和endostatin的表达水平。结果:bFGF和endostatin在食管癌组织中的表达均与有无淋巴结转移相关,bFGF与endostatin的表达呈负相关。结论:食管癌侵袭性的发生可能与bFGF的表达增高和endostatin的表达下调有关。     

COX-2在CIN及宫颈癌组织中表达的意义

目的:探讨前列腺素酶COX-2在宫颈癌及癌前组织中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法、半定量RT-PCR法及Western-blot法检测COX-2在35例宫颈上皮肉瘤样病变(CIN)、40例宫颈癌和5例正常宫颈组织中的表达情况.结果:①经免疫组化检测,COX-2蛋白在正常宫颈组织中不表达,在CIN宫颈组织阳性表达率分别为31.4%,在宫颈癌组织中阳性表达率分别为85.0%.三者之间差异具有显著性(P<0.05).②经RT-PCR检测,正常宫颈组织中无COX-2 mRNA表达,CIN宫颈组织中COX-2mRNA相对含量为0.291±0.214,宫颈癌组织中相对含量为0.357±0.173,三者之间差异具有显著性(P<0.05).③经Western-blot检测.COX-2蛋白在宫颈癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中相对含量分别为40.27±13.67,56.98±21.13和84.21±22.74,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05).结论:COX-2蛋白不表达于正常宫颈组织中.COX-2可能参与了宫颈癌早期的发生发展.宫颈组织中COX-2的表达可作为宫颈癌早期诊断及估计宫颈癌患者预后的一个指标.     

三氧化二砷对食管癌细胞增殖和热休克蛋白70表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对食管癌细胞增殖和热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。方法：通过相差显微镜、流式细胞术、免疫细胞化学染色和免疫印迹分析等方法观察As2O3对人食管癌细胞株EC1的作用效果和作用机制。结果：与对照组相比,经2μmol/L和5μmol/Las2O3作用的细胞出现明显的生长抑制,G2/M期细胞比例增加;2μmol/Las2O3作用48h后经Ecl细胞HSP70（heat shock protein70）及HSC70(heat shock cognate protein70)表达均增加。结论：As2O3诱导食管癌细胞G2/M期阻滞抑制细胞增殖和生长;HSP70的升高是细胞对As2O3作用后出现的应激反应,并与细胞周期阻滞相关。     

宫颈癌淋巴结转移相关基因的表达谱研究

淋巴结转移是影响宫颈癌预后因素的首要因素,但分子机理尚不清楚,探讨宫颈癌淋巴结转移的分子机制,筛选可能用于临床诊断和治疗的新的分子靶标尤其重要.BRB-Array Tools软件对基因表达综合数据库(Gene Expression Ominibus, GEO)中有/无淋巴结转移早期宫颈癌的基因芯片表达谱数据进行统计学分析,找出二者的差异基因,利用GenCLip软件进行文献挖掘研究这些差异表达基因的功能关系.筛选出71个差异表达基因,其中35个在有淋巴转移的宫颈癌中表达上调,36个下调.文献挖掘发现FZD10、PDZK1IP1、SERPINB9、COMP、MAGEA1等几个新的宫颈癌淋巴转移相关基因.结果表明生物信息学方法能有效地分析基因芯片数据并获取生物内在信息,为宫颈癌淋巴转移发生机制及治疗靶位开辟新思路.