实验室繁育树鼩生理指标的检测分析

对实验室繁育的22只成年树鼩进行生理指标的检测,并与正常人参考值进行对比分析。结果显示,树鼩红细胞数8.19×1012/L,高于人参考值上限;白细胞数2.21×109/L,低于人参考值下限;肌酐16.63μmol/L,低于人参考值下限;丙氨酸氨基转移酶77.92U/L和天门冬氨酸氨基转移酶179.9U/L,都高于人参考值上限;HBsAg均为阴性0.022ng/ml±0.005。表明树鼩作为更接近人类的低等灵长类动物,适合应用于研究人类疾病的动物模型。     

树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

目的：探讨树鼩骨髓间充质干细胞（ BM-MSCs）的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞的可行性。方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼩骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化,倒置相差显微镜进行形态学观察。用成脂诱导液（ DMEM/F12＋10％FBS＋100 U/mL青霉素＋100μg/mL链霉素＋1.0μmol/L地塞米松＋0.2 mmol/L吲哚美辛＋0.01 mg/mL胰岛素＋0.5 mmol/L IBMX）和成骨诱导液（高糖DMEM＋10％FBS＋100 U/mL青霉素＋100μg/mL链霉素＋50 ng/mL BMP-2）对分离的树鼩BM-MSCs分别定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞。结果原代和传代细胞为梭形或三角形,可增殖形成克隆。 BM-MSCs成脂诱导后油红O染色细胞内出现红色脂滴,成骨诱导后茜素红染色可观察到矿化结节。结论密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养树鼩BM-MSCs简便可行,获得的BM-MSCs可体外诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。     

树鼩的动物福利措施探讨

树鼩在生物学特性、生理生化、新陈代谢和基因组等方面近似于人类,被广泛应用于生理学、病理学、病毒学、免疫学、药理学及遗传学等多个领域。迄今为止用于生物医学研究的树鼩大部分来自野生,实验树鼩尚无国家质量控制标准。为了保证树鼩引种、驯化、饲养、繁殖、质量控制及福利的规范化和科学化,提高树鼩繁殖率和成活率,本文从兽医公共卫生及实验动物科学的角度,对野生树鼩的捕捉、运输、检疫、饲养及繁育等方面的基本原则及技术操作和福利要求作一简述,为从事树鼩工作的有关人员及树鼩实验动物化研究提供参考。     

树鼩血压和心率的无创测定

目的建立健康树鼩的心率、血压正常值参考范围,并探讨不同来源、不同性别、不同年龄树鼩心率、血压的差异。方法随机挑选实验树鼩180只,按来源分为野生成年组、F1代自繁成年组和青幼年组三个组,每组雌雄各半,共60只。采用智能无创血压计（鼠仪）逐只测定HR（心率）、SBP（收缩压）、DBP（舒张压）和MBP（平均动脉压）。结果野生成年树鼩、自繁成年树鼩和青幼年树鼩心率分别为394.33±37.74 BPM、351.61±72.76 BPM和378.19±69.04 BPM,野生和自繁成年树鼩组差异有显著性（P〈0.05）。自繁成年树鼩收缩压、舒张压和平均动脉压均明显低于青幼年树鼩,差异有极显著性（P〈0.01）。野生成年树鼩和自繁成年树鼩相比,收缩压、舒张压和平均动脉压差异均无显著性（P〉0.05）。结论大鼠无创血压计适合于树鼩的血压、心率的测量。通过测定,获得了野生成年树鼩、F1代自繁成年树鼩和青幼年树鼩的心率和血压参考值范围,丰富了树鼩基础生理数据,可为相关研究提供科学参考。     

雌性树鼩的麻醉和生殖器官解剖与卵母细胞形态特征的观察

目的对雌性树鼩的麻醉、生殖器官解剖与卵母细胞形态特征进行观察,为制备转基因树鼩奠定基础.方法用1%的戊巴比妥钠(10-3ml/g体重)肌内注射对树鼩麻醉,比较在不同环境温度下对麻醉效果的影响.对雌性树鼩生殖器官解剖结构、卵母细胞形态特征等进行观察.结果①在25～28℃、18～20℃下麻醉的持续时间分别为80 min、130 min;②雌性树鼩的子宫为双角子宫,卵巢外有包膜;③卵母细胞富含色素,卵母细胞的透明带与质膜的韧性较山羊强.结论在25～28℃下,用1%的戊巴比妥钠(10-3ml/g体重)对树鼩麻醉时间比较适中,便于实验操作而且苏醒快.雌性树鼩生殖器官解剖结构、卵母细胞形态特征观察表明,树鼩的胚胎移植、转基因等实验操作与小鼠类似,但树鼩的受精卵须进行离心处理.     

树鼩呼肠孤病毒的分离鉴定

致病性病毒严重危害树鼩(treeshrew,Tupaia)生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜观察显示该病毒为球形,双层衣壳,完整直径~75nm。纯化病毒经核酸PAGE电泳后呈现10个核酸节段,并为典型的3:3:4排列。哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)L1基因保守区RT-PCR检测、序列分析及进化树构建结果表明,该病毒株属于MRV,且与来源于蝙蝠的呼肠孤病毒分离株(T3/Bat/Germany/342/08)同源性最高。MRV是人兽共患病病毒,该实验首次从树鼩体内成功分离到MRV,对今后研究制定实验树鼩病毒学控制标准具有指导意义,同时为有效预防该病毒在树鼩与人类之间传播提供了实验依据。     

昆明城郊中国树鼩群体线粒体DNA遗传多样性

由于树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究.然而,目前对树鼩的群体遗传结构还知之甚少,这极大地限制了其在疾病动物模型研究的应用,也是其品系资源创制的瓶颈.本研究通过分析80只采自于云南省昆明周边地区的野生树鼩(Tupaia belangeri chinensis)线粒体DNA(mtDNA)多态性,结合国外报道的2个树鼩(Tupaia belangeri)序列比较后发现,在604 bp的mtDNA控制区片段中兵检测到29个核苷酸替代变异,这些变异共界定了13种单倍型,表现较高的群体遗传多样度.另外,昆明地区的树鼩与国外报道的2个树鼩间存在较大的遗传分化,mtDNA控制区单倍型之间的核苷酸替换数大于18个,远高于昆明地区树鼢群体内部不同单倍型之间的差异.选择含有代表性的mtDNA控制区单倍型的17个昆明地区树鼩个体进一步测定了细胞色素b基因片段(1134 bp),结合前人报道的数据分析,结果进一步支持mtDNA控制区数据反映的遗传格局及揭示的昆明地区树询与国外报道树鼩之间的明显差异.本研究结果提示,昆明地区树鼩与国外树鼩之间存在较大遗传差异,在将树鼩用于人类疾病动物模型研究中要注意这些遗传差别.昆明城郊的树鼩群体具有较高的遗传多样度,在开展近交系建立等工作时须考虑选取群体内部具有代表性的mtDNA世系.

Abstract：

Due to their special phylogenetic position in the Euarchontoglires and close affinity to primates, tree shrews have been proposed as an alternative experimental animal to primates in biomedical research. However, the population genetic structure of tree shrews has largely remained unknown and this has hindered the development of tree shrew breeding and selection. Here we sampled 80 Chinese tree shrews (Tupaia belangeri chinensis) in Kunming, China, and analyzed partial mtDNA control region sequence variation. Based on our samples and two published sequences from northern tree shrews (T. belangeri), we identified 29 substitutions in the mtDNA control region fragment (～ 604 bp)across 82 individuals and defined 13 hapiotypes. Seventeen samples were selected for sequencing of the cytochrome b (Cyt b; 1134 bp) gene based on control region sequence variation and were analyzed in combination with 34 published sequences to solidify the phylogenetic pattern obtained from control region data. Overall, tree shrews from Kunming have high genetic diversity and present a remarkable long genetic distance to the two reported northern tree shrews outside China. Our results provide some caution when using tree shrews to establish animal models because of this apparent genetic difference. In addition, the high genetic diversity of Chinese tree shrews inhabiting Kunming suggests that systematic genetic investigations should be conducted before establishing an inbred strain for medical and biological research.     

滇西亚种树鼩体外寄生虫自然感染状况及分析

目的调查滇西亚种树鼩体外寄生虫的自然感染状况,为建立树鼩质量控制标准提供依据。方法对野生的滇西亚种树鼩和自繁F1代树鼩各60只分别用尸检法和活体法检测,随即采用拔毛或用透明胶带粘取腋下、耳根、腹股沟、肛门附近等处的毛发制片,置于体视镜和显微镜下观察虫体和虫卵。结果野生滇西亚种树鼩和自繁F1代树鼩体外寄生虫自然感染率分别为：虱子25%/6%、蚤5%/0、蜱1.6%/0、水蛭1.6%/0、虱子和蚤混合感染1.6%/0。结论野生树鼩体外寄生虫的自然感染多为虱子和蚤,其次还有蝉、水蛭,总感染率明显高于自繁F1代。使用灭虱灵对于驱除树鼩体外寄生虫具有较好的疗效。     

树鼩模型在人类病毒性疾病研究中的应用进展

由于树鼩在进化上接近于灵长类动物,在生理、生化及解剖学等生物学特性方面与人类有着相似之处,树鼩得到越来越多的关注,研究人员运用与其他动物相比具有多种优势的树鼩建立了一系列的疾病模型,如病毒类疾病、神经系统、肿瘤等,本文着重就树鼩在人类病毒疾病方面的研究进展进行概述。     

树鼩驯养繁殖实验动物标准及丙型肝炎动物模型技术平台建设的探讨

目前用于生物医学研究的树鼩大多数来源于野生捕获,由于个体间的差异较大,其实验结果的均匀性和可重复性较差,亟待解决树鼩人工饲养设施条件、繁殖关键技术、动物质量标准等一系列基础科学问题。许多文献报道了树鼩与其他实验动物比较,在肝病研究中具有巨大的开发应用潜力,在丙型肝炎动物模型研究中,亟待解决丙型肝炎病毒(HCV)细胞培养体系、HCV病毒感染剂量与感染途径、HCV病毒对树鼩体外、体内感染后病毒核酸检测、抗体检测和病理检测等技术方法的建立及动物模型评价标准问题。本文就上述问题系统性地进行初步报道,旨在为树鼩早日实现实验动物化和丙型肝炎疾病研究中应用提供科学依据。     

中国树鼩实验动物化研究进展和展望

该文回顾了我国树鼩驯养繁殖和研究的发展历史,介绍了树鼩实验动物化研究的最新进展,并结合我国目前的状况,提出了今后的工作建议:加强实验树鼩标准化(包括地方和国家标准)的研究、近交系动物的研制、达到商业化树鼩的基础分子与细胞生物学研究工具的研制、人类重大疾病树鼩动物模型研究和建设国家实验树鼩种源基地等。     

树鼩资源的开发利用与标准化研究——我国实验动物资源建设发展战略探讨

树鼩（Tupaia belangeri）作为人类疾病动物模型,被应用于人类医学实验研究的多个领域,如各种类型的病毒性肝炎模型,流感病毒、登革热病毒、轮状病毒、疱疹病毒模型,糖尿病、胆结石、癌症病模型。但是,目前我国用于实验研究的树鼩几乎全都来自野外,对它们的微生物学、寄生虫学、遗传学、环境学等质量标准没有进行控制,它们本身携带的许多病原体会对实验结果的准确性造成影响,这既不符合国家对实验动物许可证管理的要求,也不利于我国实验动物科技工作与国际接轨的发展要求。因此,应该同步开展树鼩资源的开发利用和标准研究,使之纳入实验动物许可证的有效监控和管理,改变目前使用在前、质量控制标准研究在后的被动局面。     

几种冷冻稀释液与单胺类防冻剂对中缅树鼩精子冷冻存活率的影响

该文实验精子采自昆明地区经笼养驯化的树鼩(Tupaia belangeri),检测其冷冻前后运动度、顶体完整率以及检测部分冷冻精子的受精能力。实验一:选用8种已报道的冷冻稀释液TTE、TCG、TCF、TTG、BWW、BTS、DM、SR稀释鲜精,并添加0.4mol/LDMSO,4℃预冷平衡2h后,TTE、DM和SR稀释液的精子的运动度与鲜精无差别(P>0.05),其余处理组均显著下降(P<0.05)。冷冻复苏后,各组的运动度显著低于预冷平衡处理后的运动度(P<0.05);DM组的复苏运动度显著高于其他稀释液组(P<0.05),BWW组最低(P<0.05)。对于顶体完整率,与鲜精相比,4℃平衡2h后,TTE和DM组精子的顶体完整率显著高于BWW、BTS和SR组(P<0.05)。冷冻复苏后,DM组精子的顶体完整率显著高于其它(除了TTE)冷冻组(P<0.05)。实验二:在DM稀释液基础上分别添加4种浓度0.2、0.4、0.8和1.2mol/L的二甲基甲酰胺(DF)、甲酰胺(F)、二甲乙酰胺(DA)和乙酰胺(A)以及0.4mol/LDMSO,经过预冷平衡处理后,与鲜精相比,各防冻剂组的精子运动度没有下降(P>0.05);冷冻解冻后,各冷冻组精子的运动度显著低于预冷平衡处理后的精子运动度(P<0.05);0.8mol/LDF和0.4mol/LDMSO组精子的运动度显著高于其它冷冻组(P<0.05)。对于顶体完整率,预冷平衡处理后各高浓度组的比率显著下降;冷冻复苏后,0.4mol/LF和0.4mol/LDF组精子的顶体完整率相对较高。实验三,人工授精实验中,DM+0.8mol/LDF冷冻精子的受精率为16.7%,DM+0.4mol/LDMSO的受精率为50.0%。以上实验结果提示,含卵黄的非离子冷冻稀释液对树鼩精子冷冻保护效果好,但单胺类防冻剂的防冻效果还需进一步深入研究。     

自发性树鼩乳腺肿瘤的特性(英文)

乳腺癌是严重危害女性健康的常见恶性肿瘤,建立合适的乳腺癌动物模型对于研究人类乳腺癌的生物学机制及发展新的防治方法至关重要。相对于常用的啮齿类动物,树鼩(Tupaia belangeri chinensis,tree shrew)因在进化层次上更接近于人类而可用于建立更适合的乳腺癌模型。该文详细了介绍一例树鼩自发性乳头状良性乳腺肿瘤。免疫组化结果显示该例肿瘤孕激素受体阳性且Ki-67阳性细胞比例显著增加;而活化的Caspase3阳性细胞比例较低;且肿瘤的形态和病理与人导管内乳头状肿瘤非常接近。提示利用树鼩建立乳腺肿瘤模型的可行性。     

Establishment of basal cell carcinoma animal model in Chinese tree shrew (Tupaia belangeri chinensis)

Basal cell carcinoma (BCC) is the most common skin cancer worldwide,with incidence rates continuing to increase.Ultraviolet radiation is the major environmental risk factor and dysregulation of the Hedgehog (Hh) signaling pathway has been identified in most BCCs.The treatment of locally advancedand metastatic BBCs is still a challenge and requires a better animal model than the widely used rodents for drug development and testing.Chinese tree shrews (Tupaia belangeri chinensis) are closely related to primates,bearing many physiological and biochemical advantages over rodents for characterizing human diseases.Here,we successfully established a Chinese tree shrew BCC model by infecting tail skins with lentiviral SmoA1,an active form of Smoothened (Smo) used to constitutively activate the Hh signaling pathway.The pathological characteristics were verified by immunohistochemical analysis.Interestingly,BCC progress was greatly enhanced by the combined usage of lentiviral SmoA1 and shRNA targeting Chinese tree shrew p53.This work provides a useful animal model for further BCC studies and future drug discoveries.     

Creating animal models,why not use the Chinese tree shrew (Tupaia belangeri chinensis)?

The Chinese tree shrew (Tupaia belangeri chinensis),a squirrel-like and rat-sized mammal,has a wide distribution in Southeast Asia,South and Southwest China and has many unique characteristics that make it suitable for use as an experimental animal.There have been many studies using the tree shrew (Tupaia belangen) aimed at increasing our understanding of fundamental biological mechanisms and for the modeling of human diseases and therapeutic responses.The recent release of a publicly available annotated genome sequence of the Chinese tree shrew and its genome database (www.treeshrewdb.org) has offered a solid base from which it is possible to elucidate the basic biological properties and create animal models using this species.The extensive characterization of key factors and signaling pathways in the immune and nervous systems has shown that tree shrews possess both conserved and unique features relative to primates.Hitherto,the tree shrew has been successfully used to create animal models for myopia,depression,breast cancer,alcohol-induced or non-alcoholic fatty liver diseases,herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and hepatitis C virus (HCV) infections,to name a few.The recent successful genetic manipulation of the tree shrew has opened a new avenue for the wider usage of this animal in biomedical research.In this opinion paper,I attempt to summarize the recent research advances that have used the Chinese tree shrew,with a focus on the new knowledge obtained by using the biological properties identified using the tree shrew genome,a proposal for the genome-based approach for creating animal models,and the genetic manipulation of the tree shrew.With more studies using this species and the application of cutting-edge gene editing techniques,the tree shrew will continue to be under the spot light as a viable animal model for investigating the basis of many different human diseases.