产酯酶微生物菌种的筛选研究

研究了产酯酶微生物的筛选,包括筛选模型、酶活力检测方法及菌株的分布。对30多份土样以及实验室保存的菌种进行了大量的筛选,以添加三醋酸甘油酯、乳酸乙酯酯类物质对土样等样品富集,采用添加显色剂溴甲酚紫的快速简便平板显色法,观察水解变色圈直径和菌落直径的大小进行初筛。获得两者直径之比相对大的菌株174株,采用平板打孔检测法和摇瓶发酵比色法测酶活力相结合进行复筛,最终得到酯酶活力较高的24株菌株。就初筛和复筛方法及结果加以比较分析,复筛菌株做不同底物的酶活力检测,建立了一个有效、简便及快速的微生物酯酶的筛选模型。并对酯酶产生菌的立体选择专一性进行了初步考察。     

脂肪酶活力测定研究进展

脂肪酶催化作用发生在油-水界面上,是一种典型的界面酶,因此其活力测定有别于其他的水相酶。如何准确测定酶活力的大小,对于研究该酶的特性及应用具有重要的意义。本文对脂肪酶检测的常用方法进行了综述与评价。     

微生物脂肪酶及其应用

自然界中有许多微生物能利用天然油脂和脂肪作为自身生长的碳源,这是由于脂肪酶作用使其分解成能被直接利用的小分子物质,脂肪酶（Ec．3．1．1．3）[1]分解脂肪,催化分解三酸甘油脂,产生脂肪酸、甘油脂和甘油。它们的催化反应如图1。脂肪酸在生物体起有相当重要的生理诈用,脂肪酶的分解产物除供给生物能量外,还是合成磷脂等物质的材料,脂肪酸在动植物组织及多种微生物中普遍存在,其性质多年前就被确定了。早在六十年代我国就开展微生物脂肪酸研究。1969年研制成解脂假丝酵母脂肪酸制剂。但同淀粉酶、蛋白酶相比脂肪酸的工业应用还…     

立体选择性脂肪酶的筛选及其在薄荷醇拆分中的应用

采用双平板透明圈方法,筛选得到1株能够选择性水解L-薄荷醇丙酸酯的微生物。通过16sDNA测序,鉴定为产碱假单胞菌Pseudomonas alcaligenes。该菌所产脂肪酶可水解4对薄荷醇丙酸酯,在35℃时绝对转化率达到50％时,表现出较高的对映体过量值（e.e.p〉99％）与非对映体过量值（d．e．p〉90％）。这一结果表明,产碱假单胞菌脂肪酶是具有工业应用前景的生物催化剂。     

适用于高通量筛选的脂肪酶表达系统

突变库容量和高通量筛选方法是影响酶分子定向进化的两个决定因素,虽然巴斯德毕赤酵母pPIC9K表达系统已被广泛使用[1],但由于外源基因可通过单插入整合入基因组,产生多拷贝突变基因,从而干扰后续重组子的筛选;另一方面,pPIC9K表达系统需要甲醇诱导,需要每日补加甲醇来诱     

产脂肪酶菌株C7828-5的筛选、鉴定以及产酶条件的优化

以花生油为唯一碳源,从海口市各地被油脂污染土样中分离筛选出1株中温碱性脂肪酶菌株C7828-5。形态学、生理生化特征和分子生物学鉴定结果表明,该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。该菌所产脂肪酶的最适温度为37℃,最适pH为8.0。优化了菌株的产酶条件,最适产酶培养基(g/L)为:蔗糖5、牛肉膏20、(NH_4)_2SO_41、MgSO_4·7H_2O 0.5、CaCl_20.5,聚乙烯醇花生油乳化液120 mL,发酵72 h,获得高达8.08 U/mL的脂肪酶表达量。     

基于宏基因组学的脂肪酶筛选

脂肪酶是解酯酶的一种,在工业生产上具有极为广泛的应用。宏基因组学是一门新兴的学科,避开了传统的微生物纯化培养的难题,极大地扩展了环境微生物资源的利用范围。本文介绍了脂肪酶结构与功能特性,概述了基于宏基因组学筛选脂肪酶的两种不同方法,并评价了各自的优点与缺陷,最后指出了这一筛选策略今后的发展前景。     

低温脂肪酶产生菌的筛选、产酶发酵及粗酶性质研究

利用含有Tween 80的琼脂平板和摇瓶发酵法,从若尔盖高原土壤中筛选产脂肪酶菌株.通过菌落形态和菌体特征观察初步对菌种进行鉴定,得到一株产低温脂肪酶的适冷菌Pseudomonassp.DL-B,并设计正交试验对该菌株的产酶发酵培养条件进行了优化.摇瓶实验表明,该菌株最适产酶发酵培养基为:蔗糖10 g/L,蛋白胨20 ...     

产低温脂肪酶菌株Psychrobacter sp.7342的筛选及粗酶性质研究

从南北极环境土样中筛选到1株产脂肪酶细菌7342,16SrDNA序列分析表明该菌株属于Psychrobacter sp..p-NPP法研究显示,菌株7342所产粗酶液的最适温度为30℃、最适pH值为8.0,对热较稳定;Co2+和Cs+对粗酶液有激活作用,而Na+、Sr2+等7种金属离子对其均有不同程度的抑制作用;粗酶液能在高浓度的SDS、Tween20等变性剂中表现出较好的稳定性.     

Determination of Lipase Activity in AOT-Isooctane Reversed Micelles

In fission yeast, the conserved proteins, MO25/Pmo25, GC kinase/Nak1, Furry/Mor2, NDR kinase/Orb6, and Mob2, constitute the morphogenesis Orb6 network (MOR). Previously we showed that Pmo25 functions as an upstream component of MOR and that it plays a connecting role between the septation initiation network (SIN) and MOR. Here we establish a Pmo25-associated kinase assay and show that the activity is dependent on Nak1/MOR and Sid1/SIN.     

群体感应抑制剂的筛选及其在微生物病害防治中的应用

在绝大多数病原菌中都发现有群体感应机制存在,用于调控侵染过程中微生物致病基因的表达。群体感应抑制剂处理既能控制微生物致病毒性,又不影响细胞生长,因此不会导致抗性株的形成,是一种理想的抗病原性药物。本文重点探讨了群体感应抑制剂的筛选、种类以及在群体感应过程中的作用机理和潜在应用价值。     

A Confidence Interval for the Wallace Coefficient of Concordance and Its Application to Microbial Typing Methods

Very diverse research fields frequently deal with the analysis of multiple clustering results, which should imply an objective detection of overlaps and divergences between the formed groupings. The congruence between these multiple results can be quantified by clustering comparison measures such as the Wallace coefficient (W). Since the measured congruence is dependent on the particular sample taken from the population, there is variability in the estimated values relatively to those of the true population. In the present work we propose the use of a confidence interval (CI) to account for this variability when W is used. The CI analytical formula is derived assuming a Gaussian sampling distribution and recurring to the algebraic relationship between W and the Simpson''s index of diversity. This relationship also allows the estimation of the expected Wallace value under the assumption of independence of classifications. We evaluated the CI performance using simulated and published microbial typing data sets. The simulations showed that the CI has the desired 95% coverage when the W is greater than 0.5. This behaviour is robust to changes in cluster number, cluster size distributions and sample size. The analysis of the published data sets demonstrated the usefulness of the new CI by objectively validating some of the previous interpretations, while showing that other conclusions lacked statistical support.     

一株脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化研究

通过利用溴甲酚紫显色培养基初筛和酶活测定法复筛得到产脂肪酶的一株细菌HP2,经形态学观察和生理生化测定初步鉴定该菌株为不动杆菌属。并对该菌株的摇床培养产酶条件进行了初步研究,采用正交试验对HP2菌株发酵产脂肪酶的条件进行了优化,得到最佳发酵条件为初始pH为7.7,培养温度为35℃,接种量(V/V)为1.5%,发酵周期为48 h,酶活力达到129.7 U/mL。     

微生物脂肪酶的研究进展

详细综述了脂态酶微生物产生菌的选育、诱变育种及发酵生产技术,对微生物脂肪酶的性质、分离、纯化、固定化技术及应用进行了简要概述     

新颖微生物低温酯酶EstP8的酶学性质研究与在手性催化中的应用

从假单胞菌Pseudonocardia antitumoralis HUP007基因组中克隆了一个1 041bp的酯酶基因EstP8,编码的蛋白具有377个氨基酸残基。在E.coli BL21（DE3）中实现酯酶EstP8的高效异源表达和纯化。EstP8为脂肪酶家族Ⅳ中的一员,具有HGGG保守序列。EstP8最适底物为对硝基苯酚乙酸酯（p-NPO）,最适温度和pH分别为50℃和8.0。EstP8催化p-NPO水解反应的活性、V_max和K_m分别达到105.19U/mg、89.4μM/min、1.144mM。EstP8在pH7.0~8.0范围内具有良好的pH稳定性;在4℃时,酯酶相对活力为41.78%,在10~40℃内具有很好温度稳定性。EstP8对大部分金属离子有很好的耐受性,低浓度的Cu²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺对该酶的活性有激活作用。辛烷、庚烷、甲苯、丙酮、DMF等有机溶剂对EstP8的活性同样具有激活作用。酯酶EstP8还可以通过水解拆分高效地制备手性（R）-1-苯基乙醇;添加有机溶剂可以很好地促进该酯酶的光学选择性和产率,在共溶剂甲苯的存在下,所制备的（R）-1-苯基乙醇的e.e.和产率可达91%和18%;在共溶剂DMSO的存在下,所制备的（S）-乙酸苏合香酯的e.e.和产率可达98%和60%。酯酶EstP8在手性生物催化等诸多工业领域有很好的应用潜力。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选与特性研究

从活性污泥中筛选到1株絮凝活性很高的菌株MY-88。研究结果表明,MY-88的初始培养pH为6.5~7.0,最适温度为25~35℃,最适碳源为葡萄糖;在摇床速度为180 r/min时,其絮凝率达100%。Na 、K 、Ca2 、Fe3 均有较好的促絮凝作用,其中Ca2 尤为显著,使絮凝率达99.6%。MY-88在较大的pH、温度、摇床速度、搅拌速度、水样pH等范围内均具有较高的絮凝活性,显示出良好的应用前景。     

脂肪酶产生菌分离,鉴定及酶性质的研究

从含油污泥中分离筛选出１７株产脂肪酶菌株,对其中一株进行鉴定,为无花果丝孢酵母（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｆｉｇｕｅｒｉａｅ）．研究了该菌的最适产酶条件,并对其部分酶性质进行了研究．     

微生物代谢组学及其在工业中的应用

微生物代谢组学是系统生物学的重要组成部分,其与基因组学、转录组学和蛋白质组学相互补充,近年来受到越来越多人的重视。其主要对细胞生长或生长周期某一时刻细胞内外所有低分子量代谢物进行定性和定量分析,直接反映了细胞的生理状态,对理解细胞功能十分重要。由于代谢物的复杂性,研究者需根据不同的目的及对象选择合适的分析方法。对微生物代谢组学近年来的研究方法进行综述,包括样品处理、分析手段、数据分析,并讨论了微生物代谢组学在工业中的应用及所面临的挑战。