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番茄叶片基因组DNA快速制备技术及其在基于实时荧光定量PCR的转基因检测中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
以番茄(Solanum lycopersicum L.cv.Micro-Tom)叶片为试材,建立了一种简便快速制备叶片基因组DNA的方法。2~20 mm2的叶片即可满足制备要求,制备过程只需一种提取试剂、只涉及1次移液和1次离心操作,不涉及沉淀。确定了所制备的DNA用于实时荧光定量PCR的合适用量为0.1~0.2μL(反应总体积为12.5μL),发现过量模板的使用可降低PCR效率且可导致扩增失败。该项DNA快速制备及相适应的实时荧光定量PCR技术已成功应用于番茄转基因植株检测。 相似文献
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转基因植物快速检测方法的研究 总被引:16,自引:0,他引:16
本试验对转基因植物检测中的DNA提取和PCR扩增程序作了改进。经试验,本研究建立的DNA快速提取法与目前广泛使用的CTAB法相比更为简便,快速和经济,提取的DNA质量主扩增效果无明显差异,可用于多种转基因植物,多种植物组织的DNA提取,利用复合PCR法可在同一反应管中同步检测35N,NOS及CP4-EPSPS基因,明显提高了检测效率。应用本试验建立的DNA快速提取-复合PCR扩增-银染检测技术可在6小时内得出结果,达到了快速,简便,灵敏,可靠的检测目的。 相似文献
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大肠杆菌质粒DNA PCR模板的快速制备 总被引:2,自引:1,他引:2
在分子遗传学的研究中要频繁地用到PCR的方法。本文基于粗糙脉孢霉的方法[1] 发展了快速制备大肠杆菌质粒DNAPCR模板的程序 ,具有良好的重复性 ,为分子遗传学研究提供了快速有效的方法。收稿日期 :2 0 0 1 - 1 0 - 2 0 ;修回日期 :2 0 0 1 - 1 1 - 2 1基金项目 :广东省自然科学基金 (No.980 30 3) ;国家自然科学基金 (No .30 0 70 4 2 0 ) ;教育部高等学校骨干教师计划资助项目 (No.2 0 0 0 - 0 61 -31 4 30 1 )作者简介 :罗樨 (1 977- ) ,女 ,硕士 ,从事生物钟研究。图 1 质粒DNAPCR扩增结果1 DL2 0 0 0分子量标… 相似文献
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大豆油中转基因成分的Nested PCR和Semi-nested PCR检测方法研究 总被引:3,自引:0,他引:3
对大豆油中DNA提取方法进行了研究,结果表明CTAB、SDS和Wizard试剂盒提取大豆油DNA均具有良好的效果。利用nested PCR和semi—nested PCR检测大豆(Roundup Ready)油中的转基因成分发现,该方法能够检测到大豆原油中的Lectin基因(112bp)、CaMV35S基因(147bP)和CP4-EPSPS基因(205bp),检测灵敏度达到10^-6ng/μl;但该方法未能从人豆成品油(一级)中扩增到上述基因,当中的转基因成分DNA含量低于10^-12ng/μl。 相似文献
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建立了商业化种植的NewLeaf-Y^tm转基因马铃薯的筛选检测和鉴定的PCR方法。该方法根据马铃薯自身patatin基因作为内源特异参照基因扩增216bp片段,检查模板DNA提取的质量,避免了假阴性结果,同时扩增FMV35启动子基因225bp片段和PVY-CP基因161bp片段,PCR反应循环参数是94℃2min;94℃40s,55℃60s,72℃60s,35次循环;之后72℃延伸5 min。本实验中的F-PRIMER(pvy01-5)/r-primer(PVY01-3)引物是针对商业化种植的NewLeaf-y^tm转基因马铃薯PV-CP抗病毒基因而设计的,具有很强的特异性,可以达到对NewLeaf-Y^tm转基因马铃薯鉴定的目的。 相似文献
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1996—2000年全球转基因作物的种植面积,由原来的170万公顷增到4420万公顷,5年间猛增了25倍。近年来,随着转基因作物的种类和产量的不断增加,其产品的安全性问题,即它对人类健康、环境保护和生态平衡等存在的潜在危害,也越来越多的受到人们的广泛关注。至今,已有20多个国家已开展了基因工程技术的安全性研究,同时还陆续制定了相关的实验研究、工业化生产和向环境释放等一系列安全准则、条例、法规或法律。1998年以来,欧盟规定对含有转基因成分的食品及其它商品必须加注标签。最近,日本、韩国、澳大利亚和… 相似文献
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番木瓜环斑病毒PCR检测技术研究 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了检测番木瓜环斑病毒 (PRV)的免疫捕捉 PCR (IC PCR)法、ELISA PCR法和巢式 PCR法 ,它们分别能从 10 - 4、10 - 7和 10 - 14 稀释度的番木瓜叶粗汁液 (所含鲜叶组织的量分别 0 .5ug、0 .5ng和 5× 10 - 6ng)中检测出PRV。 相似文献
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制备基因组DNAPCR模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组DNA ,然后做PCR扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNAPCR模板的程序 ,具有良好的重复性。1 材料与方法1.1 材料酿酒酵母菌种 1c163 6darg11,ura 3为比利时OrianeSoetens馈赠。酵母载体pYX13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉arg 13cDNA的酵母表达载体pYXA5。培养基为SD或YPD固体培养基。1.2 酵母质粒提取[3]取 1.5ml… 相似文献
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对T 4代转基因番木瓜进行了分子生物学和果实品质分析,结果表明,筛选获得的转基因番木瓜均为转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶突变体基因(RP),且对PRV抗性达到了高抗或免疫,RP基因在转基因植物中能稳定遗传至后代并在RNA水平上表达。在田间种植时,转基因木瓜的生长状况普遍好于普通番木瓜,尤其在生长后期(10月以后),普通番木瓜100%发病(大规模种植时),而大部分(约91.8%)转基因植株生长良好,果实较多且表面光洁、基本上无环斑。与非转基因亲本相比,T 4代转基因番木瓜的果实长度增加2.6%~5%,果实直径变小0.6%~1.5%,果肉厚度增加了12%~15%,因而果实形状与亲本相近或更好,且信用价值更高。转基因番木瓜果实中水分、蛋白质、氮、脂肪、还原性糖、维生素A、维生素C和类胡萝卜素的含量与对照都无显著性差异,即转基因番木瓜与亲本具有实质等同性,这表明转入的外源基因对番木瓜果实品质没有不良影响。 相似文献
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近年来,转基因作物在全球得到了迅猛发展,1988年第一批水稻转基因植株问世以来,各国科学家在水稻转基因研究领域取得了一系列成果,而对转基因水稻及其产品的检测,也成为世界各国公众关心的热点,从PCR法、基因芯片法等讨论转基因水稻的检测方法的研究进展,让读者对转基因水稻检测方法有初步的认识和了解,对开展转基因水稻检测的研究工作有一定的参考价值。 相似文献