前列腺癌干细胞的分离及鉴定

前列腺癌DU145细胞在普通培养基中培养至对数生长期,无血清培养基重悬细胞培养至形成球状体,以细胞三维(3D)培养和二维(2D)培养方法分离前列腺癌类干细胞,观察细胞球的形成及其生长情况,通过CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕修复实验检测所分离细胞的增殖能力,结果显示前列腺癌DU145细胞在普通培养基中呈长梭形贴壁生长,无血清培养基培养72 h形成大量细胞球聚集体,细胞3D培养分离的细胞球的透明度和形态比2D培养分离的细胞好,3D培养分离细胞的增殖能力和划痕修复能力明显强于2D培养分离细胞.因此,细胞3D培养技术联合无血清培养基有利于前列腺癌干细胞的分离.     

微米阵列结构聚合物薄膜的制备及其对细胞三维培养的影响

二维 (Two-dimensional,2D) 细胞实验模型是目前研究人类疾病的细胞过程和药物筛选的主流方法。然而,生物细胞的生长受到众多因素的影响,传统的2D细胞培养在精确再现三维组织内细胞的功能方面存在一些障碍。与2D细胞培养相比,三维 (Three-dimensional,3D) 细胞培养体系注重细胞间的接触及细胞-基质间的接触,更接近于生物体的生长环境,更适合于药物筛选、细胞培植等研究。文中通过纳米压印技术制备了不同结构微米阵列聚合物薄膜,并将其应用于293T细胞的培养,通过调节薄膜表面结构、表面接触角成功实现了对生物细胞生长形貌的调控。利用扫描电镜等方法,对比了聚合物薄膜不同微结构、不同表面润湿性对细胞生长形貌的影响,重点关注细胞团的形态变化。结果表明,细胞在亲水性10 μm柱形阵列薄膜上呈现三维生长状态,这种薄膜可能更适用于制备生物细胞3D培养基;疏水性3 μm柱形阵列薄膜适用于体积小、表皮硬的组织细胞的3D培养,对于体积较大的细胞效果差。另外,对于疏水性较强的薄膜,细胞倾向于球状生长,而亲水性较强的薄膜则易贴壁生长。研究结果为微结构薄膜在生物细胞3D培养方面的应用作了初步探索。     

糖类对柳橙胚愈伤组织生长的影响

糖类是植物组织和细胞培养中培养基的必要成分之一,它不仅是植物细胞生长所需的碳源,也是维持细胞生长所要求的渗透压的渗透稳定剂。由于不同植物、同一植物不同组织的细胞生长所要求的渗透压不同,对各种糖的降解利用能力也不同。糖的种类和浓度势必影响到植物组织和细胞培养中愈伤组织的形成、生长和分化。糖类对柑桔愈伤组织形成和分化的影响已有一些研究,但对其生长的影响尚未见较系统的报道。本文以柳橙胚愈伤组织作材料,从生长状况、过氧化物酶同工酶谱和酶活性等方面对这个问题进行探讨,以找出糖的最佳种类和浓度,为柑桔组织和细胞培养提供合适的碳源。     

动物细胞生物工程 第1卷

包括的内容有:一,绪论:1.引言 二、细胞培养系统的基本组成部分:2.细胞生物学——基本概念;3.细胞生物——实验;4.细胞生长培养基;5.设备消毒;6.空气消毒;。三、大量细胞培养;7.动物细胞的大批培养和产物;8.动物细胞在连续活动培养基中培养;9.单层细胞生长系统——增殖过程;10.单层细胞生长系统——异型单一过程;     

毛白杨愈伤组织悬浮细胞耐盐性研究

把生长在全盐含量为 0 .361%的土壤中的毛白杨 ( Populus tomentosa Carr.)愈伤组织悬浮细胞培养在含不同浓度 Na Cl的液体培养基中 ,定期测量各组的细胞密度 ,根据生长曲线研究其耐盐性。结果显示 ,与不加 Na Cl的液体培养基相比 ,生长于含较低浓度 Na Cl( 2 .7‰和 5.5‰ )液体培养基中的细胞生长较好 ,而在含较高浓度 Na Cl( 8.2‰和 10 .9‰ )的液体培养基中 ,细胞生长受到较强抑制。     

通过高表达Igf1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合使CHO细胞适于在无蛋白培养基中抗凋亡培

哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中,哺乳动物细胞生长活力差,且容易发生细胞凋亡,因而难以大规模培养。为解决此问题,应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr-细胞中同时表达Igf-1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合,通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力;通过Igf-1或Cyclin E促进细胞生长分裂,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO-dhfr^-细胞,应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个,对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-BC1做进一步Western blot和流式细胞分析,确认此两个细胞株分别高表达Igf-1/Bcl-2和Bcl^-2/Cyclin E基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡,并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡,证明CHO-IB3和CHO-BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr-对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明,CHO-IB3和CHO-BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHOdhfr-对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长,适于作为生物工程宿主细胞。     

黑暗和光照对丹参培养细胞生长和生理生化特性的影响

以丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)幼嫩叶片为外植体,在Ms 2,4-D0.5mg/L 6BA1．5mg/L培养基上诱导形成愈伤组织,愈伤组织置于不同条件下培养。探讨丹参细胞培养过程中蛋白质、酶活性的变化与细胞生长周期之间的关系。结果显示黑暗和光照下,培养细胞的生长周期为27天;可溶性蛋白含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性均出现两个明显峰值,而过氧化物酶(POD)活性变化较复杂。丹参细胞生长呈“S”形周期性变化,其可溶性蛋白、酶活性也呈相应的周期性变化。     

小鼠胎肝细胞透明质酸3D培养体系的建立

目的 利用透明质酸建立小鼠胎肝细胞3D培养体系。 方法 分离获得胚胎12-14天胎肝细胞,利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养,并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系。 结果 胎肝细胞在2D体系中呈现克隆状生长。分离培养获得的肝干/祖细胞克隆在透明质酸建立的3D培养体系保持增殖活性,并进一步获得肝细胞功能特性,表现为3D培养上清中白蛋白合成和尿素水平显著增加。Q-PCR结果显示随着3D培养时间的延长,其肝细胞干性标志如AFP、CK19、EpCAM、Prox1等表达水平都大幅度降低且接近成年小鼠肝脏表达水平。 结论 本研究成功建立基于透明质酸的小鼠胎肝细胞的3D无血清培养体系,并可促进小鼠胎肝细胞肝细胞功能进一步成熟。     

培养基及其组成对水母雪莲悬浮培养细胞生长及黄酮形成的影响

8种不同的基本培养基对水母雪莲(Saussurea medusa)细胞生长和黄酮形成的影响不同。实验结果表明,MS培养基较有利于细胞生长和黄酮形成。从MS培养基修饰得到的MG和MP培养基比前者细胞生长量与黄酮产量分别提高32%和70%。碳源、氮源、植物激素对细胞生长及黄酮形成的影响较为明显。用HPLC对细胞培养物中两种有效黄酮(Jaceosidin和Hispidulin)作了定性定量分析。     

不同因素对岩黄连悬浮细胞生长的影响

目的:建立一个快速生长的岩黄连悬浮细胞培养体系。方法:研究了接种量、基本培养基、初始pH值、不同碳源对岩黄连悬浮细胞生长的影响。结果:合适的接种量是7.5~10%(FW),接种量过少会抑制细胞生长;B5和MS基本培养基均适合岩黄连细胞的生长;最佳初始培养基pH值为6.0,此时获得的细胞生物量最高;岩黄连悬浮细胞培养的生长周期为24d,最大生物量出现在第18d,达到14.1g/l(DW);蔗糖比葡萄糖更有利于岩黄连细胞的生长,添加60g/l蔗糖所获得的生物量最高,达到18.5g/l(DW)。     

番木瓜细胞悬浮培养中细胞生长及过氧化氢酶的研究

按常规植物细胞培养技术获得的20天种龄的番木瓜(Carica papaya)愈伤组织,悬浮于分别含有0.3％酵母膏的MS_3-CM及B_5培养基中,于25℃、100 r╱min 进行振荡培养,测定细胞生长(根据细胞湿重)和过氧化氢酶活性的结果表明:1.在MS_3-CM培养基中,经过144小时的培养,番木瓜细胞达到最大生长量,然后逐步降低。细胞达最大量后,pH值逐步上升,过氧化氢酶开始大量产生(图1A)。2.在B_5培养基中,细胞生长迅速,84小时达到最大生长量,过氧化氢酶的产生与在MS_(?)—CM培养基中一样,同属于滞后型(图1B)。从两种培养的效     

诺丽茎段愈伤组织诱导优化及细胞悬浮系的建立

为获取诺丽茎段中的次生代谢物并为建立遗传转化体系奠定基础,以诺丽茎段(无腋芽)为外植体诱导愈伤组织,并建立细胞悬浮系,对影响愈伤组织的诱导及细胞悬浮系的因子进行了研究。结果表明:愈伤组织诱导的最优培养基是MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D;悬浮培养的最佳培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D+3%蔗糖,pH为5.85,当初始接种量为37.5g/L、摇床转速为110r/min且(25±2)℃暗培养时,悬浮细胞生长良好,生长速率最大;诺丽茎段悬浮细胞生长曲线呈"S"型,最适继代周期为12–20 d;培养过程中,培养基的pH呈先下降后缓慢升高的变化趋势,诺丽茎段愈伤组织悬浮细胞培养的最适pH在4.5–5.0之间。文中成功建立了以诺丽茎段为外植体的稳定的细胞悬浮系。     

BRL条件培养基在ES细胞培养中的应用方法探讨

目的：探讨布法罗大鼠肝细胞条件培养基（Buffalo rat liver cell conditioned medium,BRL）在ES细胞培养中的应用方法。方法：ES细胞复苏后分别培养在BRL条件培养基、小鼠胚胎成纤维细胞饲养层（mouse enbryonic fibroblast,MEF）及合并应用BRL条件培养基和MEF饲养层的环境中,通过细胞计数、拟胚体计数和ES细胞集落边缘细胞分化状态比较ES细胞在三种培养基中生长和分化差异。结果：与BRL组比较,MEF组和BRL＋MEF组细胞生长较快（P＜0.01）,ES细胞集落边缘分化细胞较少;MEF组和BRL＋MEF组无明显差异。结论：在复苏后早期阶段ES细胞培养中,不宜单独应用BRL条件培养基,须用MEF饲养层或合并应用BRL条件培养基和MEF饲养层。     

小鼠胎肝细胞透明质酸3D培养体系的建立

为了利用透明质酸建立小鼠胎肝细胞3D培养体系,分离获得胚胎12~14d胎肝细胞,利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养,并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系.胎肝细胞在2D体系中呈现克隆状生长.分离培养获得的肝干/祖细胞,克隆在透明质酸建立的3D培养体系保持增殖活性,并进一步获得肝细胞功能特性,表现为3D培养上清中白蛋白合成和尿素水平显著增加.定量PCR结果显示,随着3D培养时间的延长,其肝细胞干性标志如AFP、CK19、Ep CAM、Prox1等表达水平都大幅度降低且接近成年小鼠肝脏表达水平.本研究成功建立基于透明质酸的小鼠胎肝细胞的3D无血清培养体系,并可促进小鼠胎肝细胞的肝细胞功能进一步成熟.     

通过高表达Igf1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合使CHO细胞适于在无蛋白培养基中抗凋亡培养

哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中,哺乳动物细胞生长活力差,且容易发生细胞凋亡,因而难以大规模培养。为解决此问题,应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr^-细胞中同时表达Igf-1／Bcl-2或Bcl-2／CyclinE基因组合,通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力;通过1gf-1或CyclinE促进细胞生长分裂,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO-dhfr^-细胞,应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个,对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-Bcl做进一步Western blot和流式细胞分析,确认此两个细胞株分别高表达Igf-1／Bcl-2和Bcl-2／CyclinE基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡,并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡,证明CHO-IB3和CHO一BCl均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr^-对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明,CHO-IB3和CHO-BCl在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHO-dhfr^-对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长,适于作为生物工程宿主细胞。     

在抗病性不同的水稻品种愈伤组织上稻瘟病孢子的生长

植物组织和细胞培养的发展为细胞水平筛选抗病突变以及在细胞水平研究寄主和病原菌之间的关系提供一条新的途径。很多作者在植物离体细胞的培养基中加入致病菌分     

长春花激素完全适应型细胞的生长和阿玛碱合成特性

从长春花激素依赖型细胞系(C20D)筛选出一种激素完全适应型的细胞系(C20hi),考察了两种细胞生长、阿玛碱合成和与吲哚生物碱生物合成相关的酶的活性,结果表明:在生长培养基上二者生长无显著差异,而C20hi细胞平均阿玛碱含量是C20D的31.9倍,在生产培养基上C20hi细胞生长较C20D快,C20hi平均阿玛碱含量是C20D的18.4倍.通过比较生产和生长培养基中C20hi细胞的色氨酸脱羧酶、异胡豆苷合酶和牛儿醇-10-脱氢酶活性,发现在生产培养基中培养细胞的3种酶活性均显著高于生长培养基,但与阿玛碱积累没有密切关系.研究结果还表明,通过5年的继代培养,激素完全适应型细胞系C20hi的阿玛碱含量是比较稳定的.     

SHEE细胞形态与细胞内F-actin含量的关系

为了研究食管永生化细胞在不同的培养基中,培养后细胞形态的改变.实验利用显微镜观察,鬼笔环肽（phalloidin）-FITC标记和流式细胞仪技术分析转换培养基与未转换培养基的SHEE细胞.结果显示：转换培养基后,SHEE细胞膜边缘异常,细胞连接松散;细胞内F-actin含量降低.说明细胞培养过程中,更换细胞生长环境可影响到细胞骨架,进而改变细胞形态及细胞的粘附能力.     

中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制

【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood bee disease, CSBV）,并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15% FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。     

野葛细胞培养及其生长特性的研究

目的：以野葛不同器官来源的外植体为材料诱导愈伤组织,建立起悬浮细胞培养体系,研究愈伤组织及悬浮细胞的生长特性。方法：采用细胞生长测定、细胞培养物中有效成分含量测定及细胞的观察。结果：野葛细胞培养过程中异黄酮及葛根素含量随细胞生长逐渐积累,在细胞生长静止期含量最高,次生代谢物与细胞生长呈负相关。不同来源的愈伤组织以根愈伤组织中异黄酮及葛根素含量最高,其中总异黄酮含量为：47．60mg/g Dw、葛根素含量为：3．30mg／g Dw,其次叶、茎、子叶,悬浮细胞中含量最低。不同愈伤组织的细胞及悬浮细胞在生长过程中细胞形态有差异。