心房钠尿肽对内毒素血症大鼠肺动脉和主动脉舒缩的影响

目的:探讨心房钠尿肽(ANP)对内毒素血症大鼠(ETR)肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞的调节作用.方法:24只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组(LPS组),治疗组(ANP组).各组分别静脉注射生理盐水、2 mg/kg的LPS和2 mg/kg LPS与2μg/kg的ANP,4 h后处死动物分离肺动脉、主动脉,进行离体血管务体外灌注实验.结果:LPS组、ANP治疗组主动脉环和LPS组肺动脉环对去甲肾上腺素(NE)引起的收缩作用在NE低浓度时较对照组减弱(P＜0.01),在较高浓度时较对照组均明显增强(P＜0.01);主动脉环ANP治疗组与LPS组无显著差异(P＞0.05);肺动脉环ANP治疗组与对照组相比无显著差异(P＞0.05).ANP可明显改善ETR离体主动脉和肺动脉对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应(P＜0.01),ANP可提高ETR离体主动脉和主动脉环对硝普钠(SNP)引起的舒张反应的敏感性(P＜0.01).结论:ANP对ETR肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞可能存在调节作用.     

内皮素对离体大鼠主动脉及主动脉平滑肌细胞作用的研究

本研究着重探讨内皮素对大鼠主动脉的收缩作用及对主动脉平滑肌细胞细胞周期及能量代谢的影响。浓度为1.0～18.0nmol/L的内皮素可引起大鼠主动脉产生浓度依赖性收缩,其EC_(50)为3.75±0.75nmol/L。正常对照组中平滑肌细胞S G_2M期细胞的比例基本稳定在26.3％～29.6％的范围内;浓度为10.0和1000.0pmol/L的内皮素可使S G_2M期细胞比例明显增高,上述变化呈良好的浓度依赖性(P<0.01);内皮素作用3～24h,随作用时间延长,S G_2M期细胞比例逐步增多,呈明显的时间依赖性(P<0.01)。10.0pmol/L的内皮素作用10min后ATP含量增至对照组的139.05±1.11％(P<0.01);20min后ATP含量为对照组的65.25±5.09％(P<0.01),低于对照组水平。结果表明,内皮素具有缩血管作用及促平滑肌细胞增殖作用,上述作用可能在高血压的发病机制中有一定的意义。     

培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生巨噬细胞集落刺激因子及其受体的表达

本研究用培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）,结果如下：（１）用生物活性检测法发现ＶＳＭＣｓ无血清条件培养液可刺激巨噬细胞集落形成,其作用能被抗巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）抗体抑制;（２）用免疫细胞化学技术证明ＶＳＭＣｓ存在ＭＣＳＦ受体;（３）用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ技术证明ＶＳＭＣｓ有ＭＣＳＦ及其受本的ｍＲＮＡ表达,血清刺激使两者表达明显增强。本研究首次报道了培养大鼠主动脉ＶＳＭＣ     

兔主动脉平滑肌细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的诱导表达调节

在兔主动脉平滑肌细胞 ( SMC)培养基中分别加入正常低密度脂蛋白 ( N- LDL)、氧化低密度脂蛋白 ( ox- LDL)、正常极低密度脂蛋白 ( N- VLDL)、氧化极低密度脂蛋白 ( ox- VLDL)和 β-极低密度脂蛋白 (β- VLDL )培养 2 4 h后 ,用定量 RT- PCR和配体结合实验检测平滑肌细胞 LRP的m RNA和蛋白质水平的表达 .结果表明 :五种脂蛋白均能在转录和翻译水平诱导兔主动脉平滑肌细胞的 LRP表达 ,尤以富含胆固醇的 N- LDL ,ox- LDL和β- VLDL的刺激作用更明显 .用胆固醇单独或与脂蛋白共同温育 SMC后 ,发现胆固醇本身可促进 SMC的 LRP蛋白水平的表达 ,脂蛋白与胆固醇的共同刺激作用更为显著 .结果提示 :上述五种脂蛋白对 SMC上 LRP的表达有上调作用 ,其机制可能主要是通过其中的胆固醇来实现的 .     

心房钠尿肽对大鼠主动脉弓压力感受器活动的影响

在隔离灌流的大鼠主动脉弓－主动脉神经标本上,观察了心房肽Ⅲ（ａｔｒｉｏｐｅｐｔｉｎⅢ,ＡＰⅢ）对主动脉弓压力感受器活动的影响。主动脉弓内压保持１３．３ｋＰａ条件下向灌流液中加入ＡＰⅢ（２．０μｇ／ｍｌ）后,主动脉神经传入放电较对照值增加６４±２７％（Ｐ＜０．００１）;升降灌流压时,主动脉神经传入放电随之增减,饱和压（ＳＰ）由２２．５±０．５降至２１．３±０．５ｋＰａ（Ｐ＜０．０５）,工作范围（ＯＲ）由１２．１±０．４降至１０．６±０．４ｋＰａ（Ｐ＜０．０５）,阈压（ＴＰ）无明显变化;压力感受器机能曲线向左上方移位,曲线的最大积分值（ＰＩＶ）由５０８±６６％增至７３０±５２％（Ｐ＜０．０５）,曲线最大斜率（ＰＳ）由５５．６±７．５增至９３．２±６．８％·ｋＰａ－１（Ｐ＜０．０５）;冲洗掉ＡＰⅢ后,主动脉神经传入放电基本恢复至对照水平．主动脉弓内压保持在１３．３ｋＰａ条件下,向灌流液中加入硝普钠（ＮＰ,１．０μｇ／ｍｌ）,主动脉神经传入放电虽有所减少,但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;升降灌流压时,ＴＰ,ＳＰ,ＯＲ均无明显变化,对压力感受器机能曲线及ＰＳ也无显著影响,而ＰＩＶ由６６７±７８降至５０２±７４％（Ｐ＜     

血管钠肽对低氧大鼠心脏钠尿肽C受体表达的影响

目的 :探讨低氧对大鼠心脏钠尿肽C受体 (NPR C)表达的调节作用 ,以及血管钠肽 (VNP)对这一过程的影响。方法 :将大鼠随机分为 3组 :对照组、低氧组 (3～ 2 8d)和VNP(2 5～ 75 μg/kgbw) 低氧组 ,采用放射免疫的方法测定大鼠血浆心房钠尿肽 (ANP)的浓度 ,并采用定量PCR的方法分析NPR C的mRNA水平。结果 :低氧 2 8d大鼠血浆ANP浓度显著高于正常大鼠 (P <0 .0 5 ) ,而且每天注射 75 μg/kgbw的VNP使ANP浓度进一步升高 (P <0 .0 1)。低氧 3d对大鼠心脏NPR C的mRNA的量没有显著影响 ;低氧 7d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数显著升高 (P <0 .0 5 ) ;低氧 14d、2 8d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数进一步升高 (P <0 .0 1)。每日注射 2 5μg/kgbw的VNP对低氧诱导的大鼠心脏NPR C表达没有显著影响 ;5 0 μg/kgbw的VNP显著降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 5 ) ;75 μg/kgbw的VNP进一步降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 1)。 结论 :VNP可以升高低氧大鼠的血浆ANP水平 ;低氧可以使大鼠心脏NPR C表达增加 ,而且具有时间依赖性 ,而VNP对这一过程有抑制作用 ,并且呈剂量依赖性     

人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑肌细胞生长的影响

从动脉粥样硬化（ＡＳ）高（北京）、低（南宁）发区人正常胸主动脉内－中膜分离ＨＳＰＧ,观察其对体外培养的ＨＡＳＭＣ生长的影响,细胞计数、~３Ｈ－ＴｄＲ参入及形态观察均表明ＡＳ高、低发区人主动脉ＨＳＰＧ都能剂量依赖性地抑制ＨＡＳＭＣ增殖,但抑制百分数未见显著差异,结果提示,人动脉壁中ＨＳＰＧ的含量可能与ＡＳ发病有关．     

大鼠细小肺动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定方法的研究

目的：建立一种重复性好、培养周期短及传代次数多的大鼠细小肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）培养方法。方法：在无菌条件下,分离雄性SD大鼠肺细小动脉,剥离外膜和剔除内皮细胞,经胶原酶I消化,培养PASMCs。0.4%台盼蓝染色测定细胞活力;倒置相差显微镜观察;免疫细胞化学法和免疫荧光染色法,进行平滑肌α-肌动蛋白（α-SMactin）鉴定。结果：形态学观察、免疫细胞化学法及免疫荧光染色法鉴定表明培养细胞为PASMCs;细胞存活率在96.5%以上;原代培养后4～7d即可传代,并且生长特点、细胞形态不易发生改变。结论：采用胶原酶I消化法培养PASMCs,方法简单、酶消化时间易控制、培养周期短、重复性好,培养的原代PASMCs具有数量多和生长迅速的特点。     

小鼠主动脉平滑肌细胞的分离培养及鉴定

目的:建立分离培养小鼠原代主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的方法并检测其生长特性。方法:剥离小鼠主动脉中膜层,分别采用组织块培养法及胶原酶消化法分离培养小鼠主动脉来源的原代VSMC,免疫荧光法检测细胞的纯度和分化状态;3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定小鼠主动脉VSMC传代细胞的生长、增殖特性。结果:组织块培养法培养组织块8d后,细胞从组织块边缘爬出,18 d后细胞汇合度达到80%以上后传代;胶原酶消化法分离培养的细胞生长7 d后,汇合度可达80%,此时进行传代;2种方法获得的细胞进行免疫荧光染色,结果显示细胞传至第3代时纯度在95%以上,传至第8代时分化状态并没有改变;MTT法显示细胞生长3~5 d时处于指数生长期。结论:本研究建立了2种可靠稳定的分离和培养小鼠主动脉VSMC的方法,VSMC纯度高,多次传代后细胞特征稳定。     

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的精氨酸转运和脂质体对转运的影响

本工作在培养的自发民生高血压大鼠和对照ＷＫＹ大鼠的主动脉平滑肌细胞上,观察细胞Ｌ－精氨酸转动转征,并观察脂质体作为Ｌ－Ａｒｇ载体对Ｌ－Ａｒｇ细胞转运的影响。     

自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞内肌醇磷脂代谢的改变

本研究观察了在基础状态下和Ｇ蛋白激活性,自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞内肌醇磷脂代谢的改变。结果显示：在基础状态下自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞内三磷酸肌醇的含量基本正常;ＧＴＰγ激尖Ｇ蛋白后,动脉平滑肌细胞三磷酸肌醇的增加呈剂量和时间依赖性。     

氨氯地平对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞生长的影响

本文采用自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）动脉平滑肌细胞培养,３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）和３Ｈ－亮氨酸（３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ）掺入方法,观察到用氨氯地平（Ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）作用４８小时后,与神经肽Ｙ（ＮＰＹ）组比较,其离体培养的ＳＨＲ动脉平滑肌细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量降低５０．５％,３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量降低５６．５％。氨氯地平组与对照组比较其３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量分别降低５７．６％和３２．３％。用ＮＰＹ作用２４小时后,与对照组比较动脉平滑肌细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量却分别增加２０％和５４．６％。而细胞计数均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结果表明,氨氯地平能有效地抑制ＳＨＲ血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ和蛋白质合成,以及显著的抑制ＮＰＹ引起的ＶＳＭＣ的ＤＮＡ合成和蛋白质合成增加效应。提示氨氯地平在阻遏高血压致心血管壁肥厚的发生发展中起着不容忽视的作用     

亮氨酸脑啡肽抑制培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

实验以培养的ＳＤ大鼠胸主动脉平滑肌细胞为模型,用四唑盐比色地及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入技术动态观察发现亮氨酸脑啡肽可显著抑制血管平滑肌细胞的增殖及ＤＮＡ的合成,阿片受体阻断剂纳洛酮对ＶＳＭＣｓ的增殖及ＤＮＡ的合成无影响,但ＮＡＬ可拮抗亮氨酸脑啡肽对ＶＳＭＣｓ增殖的抑制作用。     

自发性高血压大鼠脑动脉心钠素受体分布的计量学研究

用软脑膜铺片技术,兔疫组织化学方法及全自动图像分析仪对１７周龄自发性高血压大鼠脑血管床心钠素受体分布密度进行研究、结果表明,自发性高血压大鼠脑小动脉及细动脉壁上心钠素受体分布密度明显低于正常血压大鼠,Ｐ＜０．０１。此外,在细小动脉分叉部位心钠素受体分布密度增加,而自发性高血压大鼠中其分叉部位的受体密度明显低于正常血压大鼠。从实验结果显示,我们试用的软脑膜铺片技术显然弥补了组织切片中从血管横断面观察心钠素受体分布的局限性,清楚地展现了整个血管床心钠素受体分布特征。根据实验结果提示这些阻力性动脉心钠素受体密度减少与细小动脉舒血管反应减弱,外周阻力增加,血压升高有着明显的关系;尤其是对调节外周循环血量和外周阻力充当闸门作用的细小动脉分叉部位,心钠素受体密度降低这一特征在高血压发生机制中可能起着重要作用。     

肾大部切除、高盐摄食对SD大鼠脑心房钠尿肽的影响

为探讨脑内心房钠尿肽（ＡＮＰ）的作用,本工作采用ＳＤ大鼠,用放射免疫方法测定３／４肾大部切除与高盐摄食后脑内ＡＮＰ的含量。结果表明,对照组大鼠脑内ＡＮＰ分布广泛。３／４肾切除大鼠每日饮水量,尿量均比对照组高（Ｐ＜０．０５）,尿钠浓度低于对照组时,脑内ＡＮＰ含量尽管略有增加,但１０个核团（下丘脑室周核、弓状核、室旁核、视前室周核、中缝背核、尾壳核、杏仁核、脑桥背侧部、蓝斑和大脑皮质）ＡＮＰ含量和对照组无明显差别（Ｐ＞０．０５）。高盐摄食组每日饮水量和尿量均比对照组高,且尿钠浓度高于对照组,同时下丘脑室周核和弓状核ＡＮＰ含量比对照组高（Ｐ＜０．０５）。上述结果提示,大脑第三脑室前腹侧区（ＡＶ３Ｖ区）的ＡＮＰ可能在水盐调节上发挥重要作用。     

肾上腺皮质激素对心房钠尿肽基因表达的促进作用

给完整的及切除肾上腺的雌性 Wistar 大鼠分別注射地塞米松、去氧皮质酮或地塞米松加去氧皮质酮;冷酚法提取心房总 RNA,用α-~(32P)标记的大鼠心房肽 cDNA 探针与之杂交。完整大鼠接受地塞米松和切除肾上腺后接受地塞米松加去氧皮质酮的大鼠,心房肽基因转录产物增加2倍,其余组无显著变化。结果提示糖皮质激素可促进心房肽基因表达,但此作用依赖于盐皮质激素的同时存在,单纯盐皮质激素不能增强该基因的表达。     

心钠素对卒中易感型自发性高血压大鼠血浆和脑组织加压素的影响

为研究心钠素(ANF)和精氨酸加压素(AVP)的相互作用在原发性高血压发病中的意义,对卒中易感型自发性高血压大鼠(SHRsp)和对照大鼠(WKY)侧脑室(icv)或静脉(iv)注射人ANF-(99-126)观察其对血浆、下丘脑和垂体AVP含量以及平均动脉压(MAP)和尿量(UV)、尿钠(U_(Na)V)排泌的影响。静脉注射ANF后10min,SHRsp和WKY大鼠的MAP分别下降9.4％和12.2％(P<0.05),UV分别增加9和20倍(P<0.01),U_(Na)V增加16和29倍(P<0.01)。侧脑室注射ANF对两种大鼠的MAP、UV和U_(Na)V排泌均无明显作用。静脉或侧脑室注射ANF均使两种大鼠的血浆AVP水平明显下降,其中SHRsp的血浆AVP浓度下降程度(iv,-58％;icv,-31％)弱于WKY大鼠(iv,-80％;icv,-65％),下丘脑AVP含量在两种大鼠中都明显增加,而垂体AVP含量无明显变化。 结果表明,人ANF-(99-126)有明显的抑制AVP释放和降压、利尿、利纳作用,而SHRsp对这些作用的敏感性都降低,提示SHRsp对ABF的反应减弱可能在自发性高血压大鼠的发病中具有一定的意义。