食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项

1菌落总数及测定菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数就是指食品检样经过处理     

TTC在螺旋平板法测定冷冻水产品中菌落总数的应用研究

研究以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)作为指示剂在螺旋平板法测定冷冻水产品中菌落总数的适宜用量。通过对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌三株标准菌株制备的菌悬液在含梯度含量TTC的平板计数琼脂(PCA)中分别进行菌落计数、生长和显色观察实验,初步筛选出适宜的TTC含量范围。以冷冻水产品样品在该用量范围内的菌落计数和显色观察实验,验证在实际应用中的适宜性。验证实验结果显示:在TTC含量为1.5mg/100ml的组与未添加TTC的对照组菌落计数结果经统计学检验无显著性差异,且菌落显色情况良好,有利于计数的准确性。     

测定λ原噬菌体诱导频率的新方法

本文报道两种测定λ原噬菌体紫外诱导频率的新方法—菌落计数法和平板诱导法。将溶源菌液经紫外诱导暗培养稀释后直接涂布在平板上培养 ,根据平板上菌落形成单位数计算λ噬菌体紫外诱导频率。另一种是将溶源菌与指示菌混合制备的平板用紫外线诱导 ,根据平板上噬菌体形成单位确定λ噬菌体紫外诱导频率。这两种方法不仅能准确测定噬菌体紫外诱导频率 ,而且操作简便 ,节省时间和用具 ,重复性好。本研究还将冬虫夏草浸出汁与溶源菌混合后进行紫外辐射 ,通过几种方法进行比较 ,结果证明建立的新方法确实可行 ,易操作 ;同时也表明冬虫夏草具有较强的抗紫外辐射作用     

测定λ原噬菌体诱导频率的新方法

本文报道两种测定λ原噬菌体紫外诱导频率的新方法 - 菌落计数法和平板诱导法.将溶源菌液经紫外诱导暗培养稀释后直接涂布在平板上培养,根据平板上菌落形成单位数计算λ噬菌体紫外诱导频率.另一种是将溶源菌与指示菌混合制备的平板用紫外线诱导,根据平板上噬菌体形成单位确定λ噬菌体紫外诱导频率.这两种方法不仅能准确测定噬菌体紫外诱导频率,而且操作简便,节省时间和用具,重复性好.本研究还将冬虫夏草浸出汁与溶源菌混合后进行紫外辐射,通过几种方法进行比较,结果证明建立的新方法确实可行,易操作;同时也表明冬虫夏草具有较强的抗紫外辐射作用.     

长木蜂蜂粮中微生物丰度及抑菌活性菌株的筛选

长木蜂属于野生蜂类,后代的生存和繁衍完全依靠雌蜂所提供的蜂粮,蜂粮保鲜时间的长短对蜂群的繁衍具有关键性作用。本文采用营养琼脂培养基、改良"LB"培养基、MRS(4.5)、MRS(6.5)培养基分别对芍药的手采花粉、长木蜂蜂花粉和不同酿制时间的蜂粮样品中的微生物进行菌落计数、分析和分离鉴定。酿制初期的蜂粮样品在营养琼脂培养基生长的细菌菌落数占优势,随酿制时间的延长而迅速下降;7d、8d蜂粮样品在改良"LB"培养基上生长的细菌菌落数占优势;10d之后的蜂粮样品在MRS(6.5)培养基上微生物菌落数占优势;分离的68株菌株,其中细菌43株,酵母17株,放线菌8株。从蜂粮中分离的酵母菌和放线菌菌株均来自长木蜂雌蜂的体表。分离的68株菌株中有12株有较强抑菌活性,尤其是放线菌NF-34菌株对真菌和细菌均有抑菌活性。     

菌落总数检测胶膜的制备与应用

本文应用胶膜法和平板倾注法,检验省内外14个单位的食品、水、化妆品等10种2445份样品的菌落总数,经符号秩和统计,P>0.05,结果无显著差异,胶膜法操作简便,成本低廉、结果准确、运输和保存方便,对基层检验单位有广泛的应用价值。     

3M Petrifilm快速菌落总数测试片法与 食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2‒2010）的比较

摘要：目的 比较3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片（RAC）法与食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2?2010）检测熟肉样品、人工污染熟肉样品中的菌落总数结果的一致性。方法 分别用两种方法对129份熟肉样品和166份人工污染熟肉样品进行菌落总数项目的检测,并对3MTM PetrifilmTM快速菌落测试片法与国标方法的实验结果进行配对资料t检验、线性回归分析以及对数值差值绝对值（|dlog|）汇总分析。结果 第一部分：两种方法检测熟肉样品、人工污染熟肉样品的菌落总数检测结果t=1.5704、P=0.1188,差异无统计学意义;相关系数R2值分别为0.897、0.964;|dlog|≤0.500所占百分比分别为97.7％、100.0％。第二部分：两种方法检测295份样品,t=1.1336,P=0.2586;相关系数R2=0.992;|dlog|≤0.500的结果百分率为99.0％。结论 在检测熟肉样品、人工污染熟肉样品时,3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片法与国标方法检测结果的一致性较好。     

奶糖的样品前处理优化与微生物检测结果影响因素相关性讨论

本文的主要研究目的是找到针对不同奶糖样品最适合的前处理方法、快速有效的检测方法以及影响检测结果的相关性因素。通过溶化温度、溶化方式、溶化时间等不同实验条件,找出了能满足不同奶糖菌落总数检测要求的样品前处理方法,即将25 g奶糖样品称取到预温至45℃的225 m L灭菌生理盐水中,在45℃气浴恒温振荡器中以220 r/min振荡11 min,使奶糖完全溶化。同时由于奶糖中有些菌落会蔓延生长,为了不影响计数结果,在倾入平板计数琼脂培养基冷却后再在其表面覆盖一层5 m L培养基抑制菌落蔓延,对抑制效果不佳的使用光学放大菌落计数器计数,以保证最终检测结果的准确性。不同奶糖中水分、营养含量及pH相差不大,实验结论表明与其菌落总数检测结果高低无相关性。通过36℃培养24 h与48 h菌落总数检测结果没有明显差异,可以将培养24 h的检测结果作为参考。     

婴幼儿配方奶粉菌落总数检验中不确定度的评定

分析样品中菌落总数不确定度的来源,采用合并样品标准差的方法来评定菌落总数的不确定。研究表明：实验中的扩展不确定度为0．046％,采用此法适合于菌落总数检验结果的评定。且该法简便,适合于每一个样本的检验结果,随着检验结果的不断增加,可随时加入到合并样本中,重新计算合并样本标准差,更新不确定度的取值范围。     

ATP生物荧光法快速检测化妆品中菌落总数的研究

本文从快速检测的必要性出发,介绍了ATP生物荧光法及其原理,并针对某款化妆品通过一系列实验建立了一种快速检测菌落总数的方法。将该方法用于CTFA(美国化妆品香料香精协会,Cosmetic Toiletry and Fragrance Association)实验中,并通过与平板计数法结果进行比对,发现该方法可以有效的运用于样品细菌总数的快速检测。     

初探内疗素单菌落形态发育与产素

初探内疗素单菌落形态发育与产素潘钧陶,李东海（辽宁省微生物研究所,朝阳１２２０００）当琼脂平板上隐约可见菌落时,采用琼脂块法打取单个菌落,标记时间,置温箱培养,定时观察其形态发育特征,并测其生物效价。现将琼脂平板上,内疗素单菌落形态发育六个时期简介于...     

微菌落观察法快速检测和鉴别结核杆菌培养物的研究

将取自肺结核患者的219例痰标本接种匡氏琼脂平板,共分离到112例结核菌生长物。其中培养法104例(92.8％)阳性,微菌落观察法108例(96.4％)阳性,微菌落法阳性率稍高。培养法和微菌落法阳性标本首次检出时间分别为18.6d和11d,微菌落检出时间更短(P<0.01)。常规菌型鉴别方法与微菌落法对结核杆菌菌型鉴别的符合率为99％。     

自然界中难分离培养微生物的分离和应用*

采用在分离培养基中添加自然来源的抽提液,或加入一些特殊化合物,使其中处于Viable but non-culturable(VBNC)状态的微生物恢复其生长繁殖能力,从而得到分离。实验结果发现甜菜碱、丙酮酸钠、SOD以及过氧化氢酶可使分离到的微生物种类及菌落总数明显增加。还采用固液结合的方法来分离那些在普通平板培养基上不能形成肉眼可见菌落的那些微小菌落的微生物。采用这几种方法从4份土壤样品中共分离得到52株放线菌,103株细菌,17株真菌。对其中的放线菌和真菌进行了生物活性的测定,得到多株具有抗菌活性的微     

真菌孢子三种计数方法相关性的探讨

以对数期生长旺盛的黑曲霉、白地霉和康宁木霉孢子为试验材料,分别用血球计数法、比浊法和平板菌落计数法进行计数,用所测得的孢子数分别与其对应的OD值建立回归方程,方程分别为y=2.193×10-2 8.714×10-8x、y=6.472×10-2 7.251×10-8x和y=5.571×10-2 7.163×10-8x。3种真菌孢子计数方法所测得的孢子数与其对应OD值均有极显著的直线回归关系(P<0.01),计数真菌孢子时用比浊法测得OD值带入方程便可快速准确地得出孢子数目。因此,可用比浊法替代血球计数法和平板菌落计数法,作为实验室计数真菌孢子的首选方法。     

基于Photoshop 和计数软件精准计数平板上菌落的新方法

正"菌落总数"是农业、食品、医药卫生等行业进行质量检测的重要指标之一,目前常规的菌落计数方法是肉眼观察平皿逐个计数,需要花费较多的时间和精力[1-2]。本文推荐一种简便的平板菌落计数方法,经过使用和验证,与目测直接计数法相比,其计数结果更加准确,且效果明显优于菌落自动计数仪计数结果。现将方法介绍如下。     

细菌平板菌落计数的改进方法

细菌平板菌落计数是微生物教学、科研及生产实践中最常用的活细菌总数测定方法。由于它是根据固体平板上一个菌落代表一个细菌的原理而设计的,因此深层菌落的存在、菌落的大小及疏密程度等因素均影响观察者观察计数。为便于观察.提高菌落的检出率,对常规平板菌落计数法做如下改进: 在倒平板之前,向装有150ml牛肉膏蛋白胨固体培养基的三角瓶内加入1/1000浓度的氧化还原染料     

自然界中难分离培养微生物的分离和应用

采用在分离培养基中添加自然来源的抽提液,或加入一些特殊化合物,使其中处于Viable but non-culturable（VBNC）状态的微生物恢复其生长繁殖能力,从而得到分离。实验结果发现甜菜碱、丙酮酸钠、SOD以及过氧化氢酶可使分离到的微生物种类及菌落总数明显增加。还采用固液结合的方法来分离那些在普通平板培养基上不能形成肉眼可见菌落的那些微小菌落的微生物。采用这几种方法从4份土壤样品中共分离得到52株放线菌,103株细菌,17株真菌。对其中的放线菌和真菌进行了生物活性的测定,得到多株具有抗菌活性的微生物,经过多次复筛的平均阳性率为4.325％,略高于用常规方法分离得到的微生物。因此证明有效的分离方法将为今后微生物药物的筛选和药用微生物菌种的保藏提供更丰富的来源。     

菌落PCR快速扩增工业酿酒酵母基因组DNA片段

针对工业酿酒酵母细胞破壁难和提取基因酵母组DNA费时长(2-3 h/样品)的问题,研究了SDS-微珠涡旋破壁的方法。以破壁液上清为模板进行菌落PCR扩增酿酒酵母南阳K基因组中铜抗性蛋白基因(cup1)片段和rDNA片段。结果表明,在不需要提取酵母基因组前提下,利用该方法能有效地扩增酵母基因组DNA片段,同时该方法也适用于对转基因酿酒酵母进行菌落PCR从而实现对转化子的准确和快速地鉴定筛选,是一种成本低和易于操作的适于处理大量样品的方法。     

技术新趋势:微生物菌落计数和形态分析自动化

1 新趋势的背景 在常规的微生物学实验中常常需要对样品中的微生物进行定量或者浓度计算,众多微生物定量方法中最常用的就是对培养后的皮氏培养皿上所生长菌落进行总数统计的方法.其中菌落计数环节最耗费人力和影响准确性,已经成为利用平板菌落总数统计进行样本中细菌定量的速度瓶颈.     

多重PCR鉴定不同毒素型的产气荚膜梭菌菌落

参照文献报道的产气荚膜梭菌a, b, e, t 毒素基因cpa、cpb、etx 及iA序列合成了针对4种毒素基因的4对特异引物, 建立了一种简单的产气荚膜梭菌定型的菌落多重PCR方法。结果本所保存的A, B, C, D, E各型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期条带, 而诺维氏梭菌、腐败梭菌和破伤风梭菌的扩增均为阴性; 将单个菌落稀释100倍利用此菌落多重PCR仍能扩增到相应的目的片段。并利用此多重PCR对13株不同动物来源的产气荚膜梭菌进行了定型鉴定, 并与毒素中和试验鉴定结果进行了比较, 结果表明两种方法具有较高的符合率。本方法的建立对于产气荚膜梭菌的快速检测、定型具有十分重要的意义。