生后雌性小鼠下丘脑室旁核内ER—β表达的免疫组化研究

研究发现小鼠下丘脑室旁核(PVN)内雌激素β受体(ER-β)的表达与在大鼠等一些实验动物脑PVN的表达有差异,提示其在小鼠PVN内的表达可能有特定的生理意义。为了深入探讨ER—β在小鼠PVN内的功能,本文采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法研究了ER—β在生后雌性小鼠PVN内的表达。结果发现ER—β免疫阳性物质主要见于PVN的大细胞部,在小细胞部和背侧帽部免疫阳性细胞数目较少。免疫阳性物质主要位于细胞核内,未发现明显的胞浆或突起阳性,但在发育的某些时期可见免疫阳性细胞核局部呈现阴性反应。最高表达见于生后早期(第1—9天),随后表达降低,生后一个月即达到成年水平。PVN内ER-β的表达模式表现为生后早期表达高、随后降低,提示在该部位ER—β可能主要参与了对生后早期PVN的神经内分泌活动以及神经结构的发育与完善的调控,并可能与生后早期动物的应激、体重增加和脂肪代谢等有关。     

雌激素Beta受体在大鼠脑内表达的免疫组化定位研究

为了探讨雌激素作用于神经系统的机理,采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法研究了新的雌激素受体(ER-β)在成年雌雄大鼠脑内的分布。研究证实ER-β免疫阳性物质主要位于神经元的细胞核内,但在个别脑区也可在胞浆甚至突起内检测到。最强的ER-β免疫阳性信号见于前嗅核、大脑皮质、小脑浦肯野细胞、斜角带垂直部、蓝斑和三叉神经运动核等部位;中等强度的染色见于隔内侧核、杏仁外侧核、黑质、中央灰质等部位;较弱的阳性反应见于下丘脑与杏仁复合体的部分核团。在一些部位还存在表达水平甚至细胞内定位模式的性别差异,如前庭上核内的表达只见于雌性;雄性大鼠三叉神经运动核内ER-β蛋白主要表达于胞浆内,细胞核为阴性;而在雌性大鼠该部位ER-β蛋白主要位于细胞核等。以上结果表明ER-β蛋白在大鼠脑内分布广泛并具有一定的性别差异,在与学习记忆有关的脑区如大脑皮质和基底前脑内有很高的表达,提示在脑组织内雌激素可能通过ER-β这一新的信号途径发挥多种重要的调控作用,如学习记忆等。     

雌激素受体α和β亚型在文昌鱼神经系统、哈氏窝和性腺中的定位

用兔抗人ER-α和ER-β多克隆抗体对文昌鱼神经系统、轮器哈氏窝和性腺进行免疫细胞化学的定位研究。结果揭示幼年和成年两性不同发育时期文昌鱼在这些部位分布ER-α和ER-β蛋白。ER-α定位在端脑、中脑、后脑和神经管中大多数神经细胞核,少数在胞质及其突起和神经纤维,ER-β则定位在细胞质或细胞膜上,少数在核内。ER—α免疫阳性物质主要分布在哈氏窝下层的上皮细胞核,少数在上层细胞质,β受体则在上层细胞核。在性腺,ER-α分布在卵巢中卵原细胞和小生长期卵母细胞胞质与核仁,生发泡(核)显免疫阴性,在大生长期卵母细胞核膜和核仁的免疫阳性显著增强,成熟期则在卵细胞生发泡表达,ER-β免疫阳性物质分布在卵原细胞和早期卵母细胞质以及成熟卵细胞的卵被膜检测到,生发泡显免疫阴性。在精巢,这两种ER亚型均定位在精原细胞、初级与次级精母细胞和足细胞质,精子细胞在胞核,精子显免疫阴性。另外,双染结果还揭示ER-α和ER-β在上述部位多数共存于同一细胞,少数在不同细胞表达,且在细胞定位有不同。首次发现这两种雌激素受体亚型在文昌鱼有广泛分布,它们介导雌激素对文昌鱼神经内分泌组织的调节作用。α和β受体在靶细胞定位的不同,提示两者在介导雌激素信号路线和基因转录机制可能有不同生理作用。     

雌激素受体α和β亚型在文昌鱼神经系统、哈氏窝和性腺中的定位

用兔抗人ER-α和ER-β多克隆抗体对文昌鱼神经系统、轮器哈氏窝和性腺进行免疫细胞化学的定位研究。结果揭示幼年和成年两性不同发育时期文昌鱼在这些部位分布ER-α和ER-β蛋白。ER-α定位在端脑、中脑、后脑和神经管中大多数神经细胞核,少数在胞质及其突起和神经纤维,ER-β则定位在细胞质或细胞膜上,少数在核内。ER-α免疫阳性物质主要分布在哈氏窝下层的上皮细胞核,少数在上层细胞质,β受体则在上层细胞核。在性腺,ER-α分布在卵巢中卵原细胞和小生长期卵母细胞胞质与核仁,生发泡(核)显免疫阴性,在大生长期卵母细胞核膜和核仁的免疫阳性显著增强,成熟期则在卵细胞生发泡表达;ER-β免疫阳性物质分布在卵原细胞和早期卵母细胞质以及成熟卵细胞的卵被膜检测到,生发泡显免疫阴性。在精巢,这两种ER亚型均定位在精原细胞、初级与次级精母细胞和足细胞质,精子细胞在胞核,精子显免疫阴性。另外,双染结果还揭示ER-α和ER-β在上述部位多数共存于同一细胞,少数在不同细胞表达,且在细胞定位有不同。首次发现这两种雌激素受体亚型在文昌鱼有广泛分布,它们介导雌激素对文昌鱼神经内分泌组织的调节作用。α和β受体在靶细胞定位的不同,提示两者在介导雌激素信号路线和基因转录机制可能有不同生理作用。     

下丘脑室旁核内雌激素受体的表达与意义

下丘脑室旁核 (paraventricularnucleus ,PVN)包括大细胞部、小细胞部和背侧帽部等几个部分 ,其中大细胞部主要合成催产素和加压素 ,小细胞部主要合成促肾上腺皮质激素释放激素、甘丙肽等多种神经肽。研究发现PVN的神经内分泌活动受到雌激素的调节 ,进而影响动物的分娩、摄食、脂肪代谢、体重增加等生理功能。雌激素有α和 β两种受体 (即ER α和ER β)。在不同种属动物的PNV内两种雌激素受体的表达水平不同 ,如大鼠PVN主要表达ER β ,而小鼠PVN内除了表达ER β以外也能表达少量ER α ,提示两种ER在不同动物的PVN内功能可能不同 ,它们单独或协同介导雌激素在PVN内参与多种肽能神经元有关的生理功能。     

非基因型雌激素膜性受体GPR30在生后雌性大鼠海马内的发育学表达与亚细胞水平定位研究

为了研究非基因型雌激素膜性受体GPR30对海马的结构和功能的调节作用,应用硫酸镍铵增强显色的免疫组化技术以及酶标免疫电镜技术,观察了生后雌性大鼠海马内GPR30表达的变化及其免疫阳性产物在神经元亚细胞水平的定位情况．结果显示,GPR30免疫阳性产物主要位于海马CA区的锥体层神经元与齿状回颗粒层的神经元内,其表达水平随发育呈增加趋势．P0时在雌性大鼠海马未发现明显GPR30免疫阳性反应,P7后免疫阳性物质开始在CA2出现,P14时见于 CA1、CA2和齿状回,P30和P60主要见于CA1、CA2、CA3和齿状回．在光镜下,GPR30免疫阳性产物位于细胞核外的胞浆中,细胞核未见免疫阳性反应．在透射电镜下可见其位于神经元的胞浆内,可能主要是粗面内质网,也可见于线粒体和细胞膜．以上结果证实,GPR30是一种位于细胞核外的、非基因型作用的雌激素受体,可能参与了雌激素对海马锥体神经元突触可塑性和学习记忆等功能的调节,还可能参与了对齿状回成年神经干细胞某些活动的调节．     

雌激素Beta受体在大鼠脑内表达的免疫组化定位研究

为了探讨雌激素作用于神经系统的机理,采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法研究了新的雌激素受体（ER－β）在成年雌雄大鼠脑内的分布。研究证实ER－β免疫阳性物质主要位于神经元的细胞核内,但在个别脑区也可在胞浆甚至突起内检测到。最强的ER－β免疫阳性信号见于前嗅核、大脑皮质、小脑浦肯野细胞、斜角带垂直部、蓝斑和三叉神经运动核等部位;中等强度的染色见于隔内侧核、杏仁外侧核、黑质、中央灰质等部位;较弱的阳性反应见于下丘脑与杏仁复合体的部分核团。在一些部位还存在表达水平甚至细胞内定位模式的性别差异,如前庭上核内的表达只见于雌性;雄性大鼠三叉神经运动核内ER－β蛋白主要表达于胞浆内,细胞核为阴性;而在雌性大鼠该部位ER－β蛋白主要位于细胞核等。以上结果表明ER－β蛋白在大鼠脑内分布广泛并具有一定的性别差异,在与学习记忆有关的脑区如大脑皮质和基底前脑内有很高的表达,提示在脑组织内雌激素可能通过ER－β这一新的信号途径发挥多种重要的调控作用,如学习记忆等。     

神经型一氧化氮合酶在生后小鼠肾脏发育中的表达

目的观察生后小鼠肾脏发育不同阶段神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达,以及新生小鼠与成年小鼠肾脏nNOS表达差异,探讨nNOS在小鼠生后肾脏发育中的意义。方法分别取新生(出生小于2h)、生后3、5、7、14、40d昆明小鼠各8只,共6组。用免疫组织化学及免疫印迹方法对小鼠肾脏内nNOS表达进行定性、定量分析。结果新生小鼠生肾区nNOS呈强阳性表达,肾小管也有表达;成年小鼠肾远端小管,特别是致密斑,nNOS呈强阳性表达,集合管及肾小管均有阳性表达;新生小鼠肾脏nNOS含量最多,随后逐渐减少,成年小鼠nNOS含量最低。结论新生小鼠与成年小鼠肾脏nNOS表达部位不同,且表达含量由新生时最高到成年时降至最低。     

热敏蛋白TRPV1在小鼠睾丸生精小管中的表达特征

目的 明确热敏蛋白TRPV1在生后发育小鼠睾丸的表达和定位。方法 采用定量PCR和蛋白免疫印迹方法检测TRPV1在生后发育小鼠睾丸中的表达水平,采用免疫组织化学染色方法观察TRPV1在成年小鼠睾丸生精上皮不同周期的表达,采用免疫荧光双标染色分析TRPV1在成年小鼠睾丸各类生精上皮细胞中的定位。结果 荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测显示,TRPV1在小鼠出生后7 d的睾丸中已有表达,在21 d时其表达水平显著上升,在28 d达到顶峰,之后随小鼠发育至成年阶段其表达量逐渐降低;免疫组织化学染色显示,TRPV1在成年小鼠睾丸生精上皮的各个周期均有表达,并且从IV期开始表达量增加。免疫荧光双标染色显示,TRPV1在成年小鼠睾丸SOX9阳性的支持细胞、PLZF阳性的精原细胞和SYCP3阳性的精母细胞均有表达,并在初级精母细胞表达量较高。结论 TRPV1在小鼠睾丸生后发育的早期即开始表达,并且在生精上皮各类细胞中有广泛表达,提示其可能在生精细胞的发育过程中具有重要作用。     

LIM结构域蛋白KyoT在成年小鼠睾丸的表达

报道了KyoT在成年小鼠体内的表达,以便进一步研究KyoT在体内的功能。为研究KyoT mRNA及蛋白质水平的表达,采用Northern印迹、RT－PCR、免疫组织化学SABC和原位杂交方法。睾丸中两种KyoT的mRNA水平均很高,睾丸间质细胞的免疫化学反应阳性,阳性物质分布于细胞质内,细胞核呈阴性反应。同样,KyoT的mRNA在睾丸间质细胞杂交信号呈阳性反应,阳性物亦分布于细胞质内,细胞核呈阴性反应。生精细胞及对照组均为阴性。上述结果提示睾丸中有KyoT的表达,且特异性分布于睾丸间质细胞。     

雌激素受体在白蚁卵发生过程中的免疫细胞化学定位(简报)

雌激素受体(Estrogen receptor,ER)是一种与性腺发育和精、卵成熟有直接重要关系的性激素受体,不仅在哺乳动物中已经证实与卵子的发生有关系,近年来还发现雌激素受体也存在于雌性文昌鱼早期卵原细胞、卵黄生成期卵母细胞和成熟期卵母细胞中;Osada等在扇贝的卵巢中发现有ER免疫阳性物质存在于卵黄形成期的卵母细胞中,认为ER是基本的类固醇激素受体,有着     

雌激素受体在白蚁精子发生过程中的免疫组织化学定位(简报)

长期以来,雌激素（Estrogen）被认为是雌性特有的维持雌性性征的激素。近年来人们发现雄性体内亦存在雌激素及其受体,雌激素可作用于脊椎动物下丘脑-垂体-精巢调控轴以及精巢中体细胞和生精细胞,包括Sertoli细胞、Leydig细胞、精细胞,几乎涉及所有雄激素涉及的领域。雌激素通过与其受体结合而起作用,雌激素受体（Estrogen receptor,ER）在雄性生殖中起重要作用。     

非鸣禽脑中雌激素受体的免疫组织化学定位

应用免疫组织化学方法对非鸣禽环命脑中雌激素受体（ＥＲ）的分面进行了定位研究。结果发现：（１）ＥＲ在间脑的视前区、旁嗅叶、下丘脑腹内侧、腹外侧区及中脑丘间核（ＩＣｏ）水平有广泛分布;（２）大量脑啡肽（ｍｅｔ－ＥＮＫ）和ＥＲ双标神经元集中分 中脑丘间核的背内侧亚核（ＤＭ）中。结果提示：在鸟类可能存在一条联系发声、听觉和内分泌系统的神经网络。     

雌激素受体α和β在不同雌激素干预大鼠骨代谢中的表达

应用雌性大鼠的骨质疏松模型,通过骨密度(BMD)检测、RT-PCR和Westernblot等技术观察去卵巢(Ovariectomy,OVX)、结合性雌激素(ConjugatedEquineEstrogens,CEE)和戊酸雌二醇(EstradiolValerate,EV)对大鼠松质骨骨量以及松质骨中雌激素受体(ER)α和βmRNA和蛋白表达的影响,探讨两受体亚型在介导雌激素参与松质骨代谢的不同作用机制以及不同来源雌激素对ERα和ERβ表达的差异性调节。40只7-8周龄的雌性Sprague-Dawley大鼠,在观察动情周期后随机分成四组:对照组(Control,n=10)、去卵巢组(Ovariectomy,OVX,n=10)、去卵巢后结合性雌激素治疗组(CEE,n=10)和去卵巢后戊酸雌二醇治疗组(EV,n=10)。对照组大鼠行假手术,其余三组行去卵巢手术。术后48天(12个动情周期),对照组和OVX组用生理盐水喂养12天(3个动情周期),CEE组和EV组分别用药物的生理盐水溶液喂养12天。结果显示:在对照组中,大鼠松质骨ERα的蛋白表达水平显著性高于ERβ蛋白表达水平,而ERα的mRNA表达水平显著性低于ERβmRNA水平。与对照组相比,OVX组大鼠松质骨中ERα的蛋白表达水平显著性降低,ERαmRNA表达水平显著性增加,而ERβ蛋白和mRNA的表达水平均显著性增加。与OVX组相比,CEE组大鼠松质骨中ERβ蛋白和mRNA的表达水平均显著性下降,而EV组大鼠松质骨中ERα蛋白表达显著性上升,ERαmRNA表达显著性下降,ERβ蛋白表达显著性下降。此外,OVX大鼠松质骨的骨密度下降均可通过应用CEE和EV得到显著性改善。上述结果提示:⑴ERα可能是大鼠松质骨中优势表达的受体亚型,在介导雌激素参与松质骨代谢中起着主导作用。⑵不同来源雌激素可能侧重不同的ER亚型途径产生骨保护效应。     

7,12-二甲基苯蒽诱发大鼠乳腺癌的激素依赖性及孕、雌激素受体状况

用DMBA诱发雌性S-D大鼠乳腺癌。给50日龄大鼠每只胃饲20mg DMBA(溶于芝麻油中),一个月后第二次喂药;二次喂药组的发病率高于一次喂药组。从病理形态观察,DMBA诱发乳腺癌以乳腺小叶浸润癌和导管浸润癌为主。87%癌组织??匀浆的ER值大于10fmol/mg蛋白。56%的PR大于10fmol/mg蛋白。切除大鼠双侧卵巢观察此乳腺癌对激素的依赖性表明:65%对卵巢切除有反应性,肿瘤明显缩小。同鼠不同肿块间的ER值、病理形态近似。大鼠乳腺癌ER的特异性与人乳癌相似。试验结果表明:此工作及提供的动物实验模型为进一步研究乳腺癌内分泌治疗的机理和发展新的抗雌激素药物打下基础。     

大鼠心脏的雌激素受体免疫组织化学研究

观察雌激素受体在雌性与雄性大鼠心脏中的表达.取大鼠心房与心室组织制作冰冻切片,应用抗雌激素受体单抗进行免疫组织化学(SP法)染色并进行图像分析.结果显示,雌性与雄性大鼠心脏都存在雌激素受体,且受体的表达无性别差异(P＞0.05);心房与心室都存在雌激素受体阳性表达,其表达也无明显差异(P＞0.05);阳性反应见于心肌细胞和成纤维细胞.结果表明,大鼠心脏存在雌激素受体,心房与心室都可能是雌激素的靶组织;心血管疾病的性别差异与雌性、雄性的受体含量无关,可能与生理条件下受体的活性及功能状态有关.     

鸡输卵管胞液中雌激素受体的性质研究

以乙酚(DES)刺激未成年的雌鸡,输卵管增长到0.6到1.0克,胞液中含有的雌激素受体为0.082微微克分子/毫克蛋白,此种受体表现有以下的特性。 1.专一地结合雌性激素。以雌二醇作配基时平衡解离常数是0.25×10~(-9)M~(-1);在输卵管胞液中该受体的结合位点是1356/细胞。 2.硫酸铵沉淀胞液中的雌激素受体已转变成为团聚状态,如在硫酸铵沉淀的过程中有钼酸钠存在则能明显地减少团聚,因此钼酸钠有防止胞液中受体团聚的作用。 3.胞液中雌激素受体进行DEAE—葡聚糖凝胶柱层析,不论有或无钼酸钠存在,均表现为一个单一的峰。     

雌激素受体在小鼠睾丸表达的免疫组织化学研究

观察雌激素受体在小鼠睾丸的定位与分布。取Ａ／Ｊ系小鼠睾丸, 制备石蜡切片。用间接酶标免疫组织化学和高温处理抗原暴露技术显示雌激素受体的所在部位。睾丸所有Ｌｅｙｄｉｇ 细胞和约２０％ 的肌样细胞的胞核呈雌激素受体阳性反应。睾丸支持细胞和生精细胞为阴性。本研究首次用免疫组织化学技术证明了睾丸中雌激素受体的存在,并定位于Ｌｅｙｄｉｇ 细胞和部分肌样细胞的胞核。为研究雌激素对雄性生殖功能的调节提供了形态学依据。     

两种抗雌激素药物对雌性斑马鱼脂肪代谢的影响

为探究雌激素对雌鱼体内脂肪代谢的影响,研究分别使用50和250 μg/L的来曲唑（Letrozole、LET）与他莫昔芬（Tamoxifen、TAM）两种抗雌激素药物,构建了雌性斑马鱼（Danio rerio）雌激素缺乏模型和雌激素受体竞争抑制模型,并检测两种药物处理后斑马鱼肝脏、内脏和肌肉的甘油三酯（TG）含量变化以及肝脏内雌激素和脂肪代谢相关基因的变化。结果显示,低浓度LET处理后雌鱼肝脏和内脏TG显著上升（P < 0.05）;高浓度TAM处理后肝脏TG含量显著降低（P < 0.05）,其他各组处理TG均无差异。基因mRNA检测结果表明,两种浓度LET和TAM处理的雌性斑马鱼芳香化酶（CYP19A）表达均显著下调（P < 0.05）,低浓度TAM暴露导致雌激素受体（ERα）表达显著下调（P < 0.05）。此外,两种浓度LET处理均引起了脂肪酸合成酶（FAS）表达显著上调,微粒体的TG转运蛋白（MTP）表达显著下调（P < 0.05）;低浓度TAM引起了MTP表达显著下调（P < 0.05）,而高浓度TAM组则引起了MTP表达显著上调（P < 0.05）。综合各相关指标,研究结果表明雌激素确实在雌性斑马鱼脂肪代谢中发挥作用,然而不同程度和方式的雌激素抑制会导致不同的脂代谢失调表现,这提示鱼体内雌激素紊乱所导致的脂代谢失调与雌激素浓度和作用通路上的受阻位点有关,并受到多重因子参与的内分泌调控网络的调节。