亲水性糖皮质激素衍生物对巨噬细胞呼吸爆发的影响

目的:观察糖皮质激素(GC)衍生物对巨噬细胞呼吸爆发的影响,并探讨GC对巨噬细胞呼吸爆发的非基因组作用机制.方法:合成亲水性和疏水性的系列GC衍生物,分离并培养腹腔巨噬细胞,应用细胞色素C还原法检测PMA刺激巨噬细胞生成超氧阴离子的能力.结果:获得了亲水性的GC衍生物氢化可的松-21-甘氨酸酯盐酸盐(HG)、氢化可的松-21-赖氨酸酯盐酸盐(HL)和疏水性的氢化可的松-21-苯丙氨酸酯盐酸盐(HP),HG和HL可显著促进PMA刺激巨噬细胞生成超氧阴离子,HP无显著作用.结论:GC快速增加PMA刺激的巨噬细胞超氧阴离子产生是通过非基因组机制实现的,这一作用与疏水性有关.     

α-氨基酸酯酰基转移酶表达纯化、酶学性质及其催化应用

α-氨基酸酯酰基转移酶(α-amino acid ester acyltransferase,AET)能够催化底物L-丙氨酸甲酯盐酸盐、L-谷氨酰胺合成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,丙谷二肽)。利用重组大肠杆菌saet-QC01表达α-氨基酸酯酰基转移酶,对其表达条件进行了优化,通过Ni-NTA亲和层析法分离纯化重组蛋白,并对其酶学性质、催化应用进行了研究。适合酶表达的诱导条件:温度20℃,诱导阶段(OD_(600)=2.0-2.5),IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导时间12 h。α-氨基酸酯酰基转移酶的最适反应温度27℃,最适pH 8.5,在pH 7.0-8.0很稳定,在酸性条件下相对稳定,低浓度的Co~(2+)、低浓度的EDTA对酶活有促进作用。在底物浓度丙氨酸甲酯盐酸盐600 mmol/L、谷氨酰胺480 mmol/L,丙谷二肽的产量达到78.2 g/L,生产速率达到1.955 g/(L·min),转化率达到75.0%。α-氨基酸酯酰基转移酶具有良好的酸碱耐受性,催化效率高的优良特性,在工业生产中具有较好的应用潜力。     

在毫微升生物液体试样中二十二种氨基酸的同时测定

用~(14)C—丹磺酰基化作用和薄层层析法,同时测定了血管球及肾小管液毫微升试样中22种单一氨基酸、牛磺酸、5—羟基色髌及r—氨基丁酸。含有全部其它成分的每一种氨基酸混合物的校准曲线,在含量为5.7×10~(-13)至1.145×10~(-11)摩尔范围内,有极好的线性,回归系数都大于0.95。用丹磺酰基化作用仔细地校准,该法测定小于10~(-12)摩尔的氨基酸时,能有很高的再现性。     

铜绿假单胞菌完整细胞a-氨基酸酯水解酶的性质

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) AS 1.204完整细胞a-氨基酸酯水解酶能催化a-氨基酸酯的水解和转移a-氨基酸酯的酰基到胺亲核试剂上。在水解和转移反应中酶的一般性质相同,最适pH为5．2,最适温度都是40℃。7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸(7一ADCA)抑制苯甘氮酸甲酣(PG-Ome)的水解。因此,该酶催化7一ADCA和PG-Ome转化成相应的半合成头孢菌素。     

一种亲脂性壁酸二肽衍生物和去壁酸二肽相似物的免疫刺激剂活性

<正>壁酸二肽(MDP)代表着福氏完全佐剂中完整分枝菌引起效应必需的最小活性结构。MDP及其一些佐剂活性衍生物能增强小鼠对感染的非特异抵抗力。一般认为,与细菌细胞壁有关的合成和天然醣肽的壁酸部分在免疫刺激活性中起重要作用。有些日本作者已描述一系列6,O—酰基—MDP衍生物,特别是用天然的棒状霉菌酸、如卡霉     

用高效液相色谱法测二酪氨酸、磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸

<正> 4’—二甲氨基偶氮苯—4磺酰氯化物,是一个发色剂,通常用它测氨基酸在P级。本文研究了单柱反相高效液相色谱系统,该系统描述了几种变形氨基酸的丹磺酰氯衍生物的分离和分析。高衍生的G_8(22%和31%)柱来自phenomenex公司,在pH8.1时分离二酪氨酸;磷酸代氨基酸(磷酸丝氨酸,磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸)和正常存在     

胰岛素B链中肽段的合成 Ⅱ.苄氧羰白·S-苄基半胱·甘·丝·咪唑-苄基组·白·缬氨酸甲酯的合成

胰岛素B链中B_(6-12)七肽的衍生物,即Cbz·leu·(S-Bz)cys·gly·ser·(im-Bz)his·leu·val·OCH_3曾用DCCI法依(3 4)途径,和叠氮法依(4 3)途径分别合成。两法所得产物的熔点、旋光等数据,完全—致。七肽酯及其中间体自由三肽和自由四肽,均分别用氨肽酶水解,释放出等当量的组成氨基酸,证明并无消旋氨基酸存在。     

氨基酸的气相色谱(续二)

<正> 用三甲基甲硅烷基(TMS group)取代质子(通常称为甲硅烷基化作用),已经成功地用于制备一些生物学上重要的化合物的挥发性衍生物。这些重要的化合物有糖类、嘌呤和嘧啶碱、核苷类和核苷酸类、类固醇类、胺类、和氨基酸类。现在已有各式各样的试剂和大量的方法可用于甲硅烷基化作用,任何一种特殊的方法的选择,取决于该化合物和进行反应的规模。近来对这些方法已有评论。     

His-234是毛白杨对香豆酸 ∶ CoA连接酶的重要酶催化活性残基

对香豆酸∶CoA连接酶(4-coumarate: coenzyme A ligase,4CL)是植物苯丙烷类代谢途径中的一个重要的酶．4CL以肉桂酸衍生物(香豆酸、咖啡酸、阿魏酸等)、ATP和CoA为底物合成相应的酰基-CoA酯,这些酰基-CoA酯是一系列重要化合物(如木质素)的前体．4CL的酶催化反应分两步进行：第一步以肉桂酸衍生物和Mg² -ATP为底物合成酰基-AMP,第二步用CoA取代AMP,产生酰基-CoA酯,催化过程中酶的构象产生明显的变化．因为4CL在木质素的合成中所起的作用,这个酶是通过蛋白质工程方法改进林产品质量的重要靶标．我们通过X射线衍射技术,解析了毛白杨对香豆酸∶CoA连接酶1(Pt4CL1)与其中间产物对香豆酰-AMP的复合物晶体结构,与同家族成员结构比对,确定所获得的蛋白质结构为Pt4CL1催化第二步反应,即酰基-CoA酯合成的构象．结构分析表明：His-234残基在Pt4CL1的酶催化机理中起着多重作用,即通过侧链与AMP磷酸基团形成氢键,降低磷酸基团的负电荷,催化CoA的亲核取代反应;侧链可以采取两种不同的构象以调节CoA进入Pt4CL1的催化中心;His-234的侧链还可能夺取CoA巯基的质子,从而增强CoA的亲核反应活性．突变体酶活数据结果也显示His-234对Pt4CL1的活性非常重要,是Pt4CL1催化中心的活性残基．     

N-酰基氨基酸对氨基酸产生菌噬菌体的抑制作用

在氨基酸发酵工业中,已筛选出许多对噬菌体具有抑制作用的N-酰基氨基酸。试验采用乳酸发酵短杆菌(Brevibacterium Lactofermentum)No 2256-L1噬菌体系统。供试的76种化学试剂中,在N-酰基上带有16或18个碳原子的谷氮酸的N-酰基衍生物,其浓度为20μg/ml,能选择性的抑制噬菌体感染,而对细菌的生长和发酵没育影响。该物质对其它种类的细菌噬菌体系统也有作用。N-棕橺酰-L-谷氨酸(N-Palmitoyl-L-glutamic acid)对噬菌体的抑制作用已研究。试验的结果指出;浓度为20μg/ml的N-棕橺酰-L-谷氨酸对噬菌体的吸附作用没有影响,但是它能减少噬菌体在潜伏期中的感染数目,并且抑制子代噬菌体的释放数目。     

合成生物学与代谢工程在谷氨酸棒杆菌产氨基酸中的应用

氨基酸是重要的化合物,在食品、医药、化工等领域具有广泛用途.多种氨基酸可以通过蛋白质水解提取法、化学合成法以及微生物法生产,现如今大部分的氨基酸都开始尝试微生物发酵法实现工业生产.谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为发酵生产氨基酸的先驱者,其生产的氨基酸产量已达年产数百万吨.随着合成生物学技术以及新一代基因编辑技术的兴起,谷氨酸棒杆菌能生产的氨基酸种类从传统的几种氨基酸扩大到了几乎所有氨基酸及其衍生物.本文综述了近年来利用代谢工程及合成生物学工具对谷氨酸棒杆菌的改造技术,并介绍了一些利用谷氨酸棒杆菌生产传统氨基酸以及非天然氨基酸的典型案例,为谷氨酸棒杆菌突破所有氨基酸生产瓶颈提供参考.     

肽链及蛋白质N-末端喹喔啉类荧光衍生物的形成

蛋白质及肽链N-末端经Dixon转氨后的羰酰基与邻苯二胺作用可形成喹喔啉类荧光衍生物.形成这一发色团的过程较为缓慢;喹喔啉短肽的激发(Ex 293-305nm)与发射(Em 360-365nm)波长随肽链氨基酸残基组成不同而有一定变化;喹喔啉胰岛素荧光衍生物的激发光波长为Ex318nm,发射波长为Em 353nm.喹喔啉三肽的荧光在乙二醇溶液中的变化因其氨基酸残基组成的不同而有差异.以上结果提示:喹喔啉类荧光衍生物可能作为研究蛋白和肽结构与功能的一种手段.     

薄皮甜瓜果实不同部位中的挥发性酯类物质与氨基酸的关系

结合固相微萃取法（SPME）和气质联用仪（GC—Ms）检测薄皮甜瓜果实成熟时期不同部位中挥发性酯类物质和游离氨基酸的种类及含量的结果表明,果实中有25种挥发性酯类物质,脐果肉、中果肉、蒂果肉以及瓜瓤中的酯类物质种类分别为17种、13种、7种和13种,相对含量分别为71．67％、61．45％、51．46％和68．76％。果肉中共检测到12种游离氨基酸,脐果肉、中果肉和蒂果肉中游离氨基酸含量依序呈递减趋势,与总酯类物质和支链酯类物质的种类及含量趋势变化相一致。     

植物挥发性有机物合成研究进展

植物挥发性有机物与人类生产和生活密切相关。在农业研究方面,植物挥发性有机物具有吸引传粉昆虫,抵御生物和非生物胁迫,介导作物之间信息交流,赋予果实特征风味等重要作用。综述了萜类化合物、苯/苯丙烷类化合物、脂肪酸衍生物和氨基酸衍生物等4类挥发性有机物的合成研究现状,并提出了今后应开展的工作与方法,旨在为进一步开展本领域研究提供有用信息。     

咖啡酸苯乙酯衍生物抑制红细胞溶血和HL-60细胞增殖活性的构效关系研究

蜂胶中的主要成分咖啡酸苯乙酯作为重要的抗氧化剂和癌预防试剂分子,引起了人们相当的兴趣。为了研究其构效关系,作者通过酰基化反应合成了6个咖啡酸苯乙酯衍生物,即:咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)、芥子酸苯乙酯(sinapic acid phenethyl ester,SAPE)、阿魏酸苯乙酯(ferulic acid phenethyl ester,FAPE)、4-羟基肉桂酸苯乙酯(4-hydroxycinnamicacid phenethyl ester,4-HCAPE)、3,5-二羟基肉桂酸苯乙酯(3,5-dihydroxycinnamic acidphenethyl ester,3,5-DHCAPE)和3-羟基肉桂酸苯乙酯(3-hydroxycinnamic acid phenethyl este,3-HCAPE)。以水溶性偶氮引发剂2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐诱导的红细胞溶血为模型,研究了它们的抗氧化活性。根据实验测得的有效抑制溶血时间,其活性顺序为:CAPE≈4-HCAPE>SAPE>FAPE>3,5-DHCAPE>3-HCAPE。其活性显著...     

N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐在多肽合成中的应用

本文介绍了N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐在多肽合成中应用的研究结果。N-保护氨基酸的三级铵盐在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中与N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐反应,先形成N-甲基-2-溴代吡啶卤化盐酯的活化中间体,然后在第二分子的三级胺的存在下与氨基酸或肽的酯缩合得到N-保护的肽酯。用该试剂进行缩合反应具有反应速度快、缩合率高、副产物容易去除等优点。我们用这个方法合成了一系列二肽衍生物,并用逐步递增法合成了亮氨酸脑啡肽(五肽)。N-保护的氨基酸活化后与胺基组分缩合成肽酯,其收率一般都在85%左右。     

薯蓣皂甙元丁二酸单酯氨基酸盐的合成及其动物实验——薯蓣皂甙元衍生物的研究I

以薯蓣皂甙元丁二酸单酯为原料,经过与氨基酸缩合,合成了5个新化合物,4—L—(N—丁二酸—2—基)胺基—4—氧代丁酸薯蓣皂甙元酯二钠盐(1),4—(N—乙酸—2—基)胺基—4—氧代丁酸薯蓣皂甙元酯钠盐(2),4—L(N—(5—胍基)戊酸—2—基)胺基—4—氧代丁酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐(3),4—(N—(3—咪唑-4—基)丙酸—2—基)胺基—4—氧代丁酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐(4),4—(N—戊二酸—2—基)胺基—4—氧代丁酸薯蓣皂甙元酯二钠盐(5),并对其进行了结构鉴定,同时发现这5个化合物对大鼠都具有抗心肌梗死活性。     

酶法合成糖及糖醇酯

以脂肪酸为酰基供体,糖和糖醇为酰基受体,利用吸附到涤棉布上的假丝酵母脂肪酶作催化剂,在含叔丁醇的系统中,研究了酯化反应条件。酯化最适温度和pH值分别为40℃～45℃和50～75。在酰基供体中,以亚油酸和油酸最好,C8到C22的饱和脂肪酸的酯化程度相仿。在23种糖和糖醇中,果糖、木糖、海藻糖、山梨糖、木糖醇、甘露醇以及异丙基葡萄糖和甲基葡萄糖比其它酰基受体的酯化率高。糖醇的酯化程度明显高于相应的糖。此外,酰基供体与受体的摩尔比大于2∶1时,有利于酯化。在由30mmol(085g)油酸,02mmol山梨醇(0036g),3mL叔丁醇和30mg固定化酯肪酶(600u)组成的反应系统中,40℃震荡反应48h,以等摩尔的底物计算,酯化程度达到90%以上。反应产物经薄层色谱鉴定为单酯和双酯。     

传统中藏药材小秦艽中20种氨基酸的测定

以1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)作为柱前衍生化试剂,采用梯度洗脱实现了传统中藏药材小秦艽中20种氨基酸衍生物的基线分离,利用电喷雾离子源(ESI Source)正离子模式,实现了小秦艽中氨基酸的定性测定,可为秦艽类药用植物资源化学成分的深入开发利用提供依据。结果表明,所建立的方法线性范围宽、重复性较好,大多数氨基酸衍生物的线性回归系数大于0.9990,检测限为6.5~178.2 fmol。小秦艽中氨基酸组成丰富,至少含有18种氨基酸和7种人体必需氨基酸,营养价值较高。同一氨基酸成分在不同采样点表现出不同含量,体现了小秦艽该类成分的地理分布差异特征。氨基酸成分与生态环境的相关分析结果显示只有纬度与Lys之间达到了极显著的负相关关系,其余各因子之间均未达到显著水平,说明纬度对小秦艽氨基酸含量有较大的影响。     

κ-卡拉胶琥珀酰基化衍生物的抗氧化活性研究

对κ-卡拉胶进行酸降解得到三种卡拉胶低聚糖,并进一步琥珀酰基化得到分子量分别为2720、4000和5960的κ-卡拉胶琥珀酰衍生物(A、B和C)。对产物进行FT-IR表征,并测得其琥珀酰基取代度(DS)分别为0.61、0.29和0.83。检测了三种κ-卡拉胶琥珀酰衍生物对超氧阴离子自由基O2.-、DPPH自由基、羟基自由基.OH以及过氧化氢的清除活性。结果表明:随着取代度的增加,其清除超氧阴离子自由基O2.-和DPPH自由基的能力增强;随着分子量的增加,其清除羟基自由基.OH和过氧化氢的能力增强。这可能与衍生物的羟基含量、取代基团的性质以及取代度等因素有关。