探寻新型HCV同源病毒的自然宿主

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是一个世界性的公共卫生问题,该病毒感染后可引起急、慢性肝炎。由于HCV的宿主范围较窄,一直未找到合适的动物模型来研究该病毒的致病机制、免疫预防等,至今也无证据表明动物源的HCV同源病毒可能跨种传播给人类。最近,研究者在小型野生动物(如啮齿类动物、蝙蝠)和家养动物(如犬、马、牛)中相继发现了新型HCV同源病毒(HCV样病毒和GBV样病毒),这些病毒分别属于丙型肝炎病毒属(hepacivirus)或持续性G病毒属(pegivirus),研究这些病毒的基因组结构和生物学特征有助于HCV的起源及其致病机制和免疫等研究。本综述从HCV基本特征、相关病毒谈起,着重介绍新型HCV同源病毒,并探寻其自然宿主,进而讨论了人类重要病原之一HCV的起源问题。     

IL28B基因在HCV感染中的作用和应用前景

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)是造成慢性肝炎、肝硬化乃至肝癌的主要原因之一, 严重威胁人类健康。宿主因素可影响HCV的感染、治疗效果和自然清除率。近期, 欧美多个研究组对自愈和经过治疗的慢性丙型肝炎患者进行了全基因组关联分析(Genome-wide association study, GWAS), 证明IL28B基因(编码IFN-λ3)的单核苷酸多态位点(Single nucleotide polymorphism, SNP)影响HCV患者的治疗效果和自然清除率。IFN-λ3通过与其异源二聚受体IFN-λR1·IL-10R2结合进行信号传导, 上调干扰素刺激基因的表达, 进而发挥抗病毒、抑制肿瘤细胞生长以及免疫调节等生物学功能, 有望成为一种新型抗HCV药物。虽然IL28B基因SNP影响病毒清除的机制尚未清楚, 但其关联分析结果可作为HCV患者临床治疗的辅助指导, 对HCV患者进行IL28B基因遗传易感和功能研究将有助于该病的预防和治疗。     

慢性丙型肝炎个体化治疗研究进展

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的急、慢性传染病。丙型肝炎流行广泛,慢性化率高达50％～85％,并可转化为肝硬化和肝细胞肝癌。目前慢性丙型肝炎（CHC ）的标准治疗方案为聚乙二醇干扰素联合利巴韦林,但约50％的HCV 1型感染者不能获得持续病毒学应答。研究发现,HCV基因型、病毒载量,以及宿主的性别、年龄、乙醇摄入量、肝纤维化程度、合并感染、基因多态性等因素可影响治疗效果。其中,HCV病毒载量、HCV基因型及宿主基因多态性是预测持续病毒学应答的重要因素,可用于制订个体化治疗方案。     

嵌合中国河北株包膜蛋白基因的HCV细胞培养模型的传代分析

建立稳定的嵌合中国河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)细胞培养体系,进行传代特性分析。本研究经体外转录获得嵌合中国河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)全长RNA,脂质体法转染Huh7.5-CD81细胞,连续传代培养,进行Real Time RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot、再感染试验与感染滴度检测及序列分析。结果表明:嵌合重组HCV RNA转染Huh7.5-CD81细胞后可产生感染性的病毒颗粒(HCVcc);传代过程中,Western blot可检测细胞内HCV蛋白的表达;IFA检测阳性细胞数逐渐增多,41d升至高峰,达80%~90%;Real Time RT-PCR检测传代细胞上清中HCV RNA拷贝数在104~107拷贝/mL;再感染实验嵌合HCVcc最高感染滴度为104ffu/mL。序列分析显示在传代后期嵌合的HCV包膜基因发生了适应性突变,导致6处氨基酸改变。结论嵌合中国河北株1b亚型包膜蛋白基因的HCV细胞培养体系可以产生具有感染性的嵌合HCV病毒颗粒,传代后感染性增强并且嵌合的HCV包膜基因发生了适应性突变。     

HCV NS5A蛋白结构及生物学功能的研究进展

丙型肝炎是丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的,是导致肝硬化和肝癌的主要病因。HCV感染已成为严重危害人类健康的社会公共卫生问题。HCV非结构蛋白5A是近年来HCV抑制剂研究的重要靶点及热点,本文对NS5A的三个结构域以及各个结构域在丙肝病毒复制、病毒颗粒组装及释放方面的生物学功能的研究进展进行了综述,为NS5A抑制剂作用机制的研究提供了广泛的思路,有利于对NS5A抑制剂的研制。     

非甲非乙型(NANB)肝炎病毒研究的新进展

应中国预防医学科学院院长陈春明教授的邀请,美国加州基因工程公司G. R. Reyes博士于1991年12月13日在病毒学研究所作了丙型肝炎病毒(HCV)和戊型肝炎病毒(HEV)研究新进展的学术报告,内容包括以下几点: 一、HCV及诊断试剂研究新进展 1979年美国CDC Bradley教授报道了HCV的部分生物学特性。1989年美国Chiron公司Choo等人报     

丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子的调控作用

丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白是HCV病毒粒子核衣壳的组分,同时又是一种多功能蛋白。它能与胞内多种蛋白相互作用,调控NF-κB、AP-1、Sp1、Elk-1、STAT3、ATF-2、NF-AT等多种转录因子,影响一系列基因的表达。核心蛋白在HCV感染的病理发生和慢性化及致癌等过程中起着重要作用。     

HCV C蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其抗原表位分析

HCV是单股正链RNA病毒,不同分离株之间其基因组序列变异较大,不同区段变异程度也各不相同,相比之下C区(核衣壳蛋白)比较保守,推测可能具有重要的生物学功能。 利用各种不同的表达系统对HCV C蛋白的研究结果表明,初步加工产物为191个氨基酸,进一步的研究表明成熟的HCV C蛋白约为120个氨基酸。我们在基因克隆和序列分析基础上研究了不同区段C基因在大肠杆菌中的高效表达,制备了重组抗原,研制了单克隆抗     

丙型肝炎病毒高变区及其变异机制

丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2所含的3个高变区(HVR1/2/3)是HCV基因组中变异程度最高的部分,参与病毒识别、黏附和入侵等过程。了解HVR的特点、变异规律及其生物学意义,不仅有利于阐明HCV持续感染及耐药机制,还可为未来HCV疫苗和新型治疗药物的设计提供理论依据。     

丙型肝炎病毒基因突变与免疫逃逸

免疫逃逸（Immune evasion）是指病原体逃避机体免疫监控的现象。在宿主和病毒的长期共同进化过程中,病毒形成了各种逃选机制以逃避宿主的免疫监控,其中病毒基因变异是最主要机制。丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）在感染个体中表现出极高的基因异质性,能有效地逃逸机体免疫识剐和破坏宿主免疫应答的能力,HCV还可侵袭免疫细胞来抑制机体的免疫功能,而建立HCV持续性感染。了解HCV病毒突变与免疫逃逸机制将会为预防和控制丙型肝炎提供依据。     

SARS冠状病毒的变异特性分析

通过对目前所发表或公布的CARS相关资料进行分析,结合所做的一些工作,对SARS-CoV的变异特性、影响变异的可能因素以及变异与Ⅰ临床病程发展的联系进行了探讨。结果显示,SARS．CoV在变异发生频率和动态变化上具有RNA病毒的普遍特性,但由于其在人类的传播时间较短,相对于常见的引起慢性感染的RNA病毒,如丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)等,得到鉴定的变异序列数量相对较少。SARS-CoV5基因尤其是S1区变异程度较高,Ⅳ基因较为保守。就目前有限的研究结果分析,没有发现病毒变异与Ⅰ临床病程发展之间有明确的联系。     

丙型肝炎病毒F蛋白缺失对病毒复制及感染性的影响

探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响．利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFH1/ΔF．体外制备RNA转录体,并电穿孔转染Huh7.5.1细胞,采用免疫荧光、实时荧光定量PCR方法以及病毒感染等方法,观察F蛋白缺失对病毒复制、蛋白质表达及转染细胞上清感染性病毒颗粒产生的影响．在此基础上,构建5个单一突变病毒体,对HCV核心蛋白进行二级结构分析,观察核心蛋白二级结构对HCV复制和翻译的影响．结果显示,转染48 h后,J6JFH1/ΔF与野生型J6JFH1相比,J6JFH1/ΔF转染阳性细胞数明显降低,细胞内HCV RNA 水平降低约95%,J6JFH1/ΔF转染后不同时间点细胞上清中HCV RNA拷贝数和病毒颗粒也明显降低．5个单一突变体不影响核心基因二级结构,病毒在细胞内复制和感染性与野生型水平一致．J6JFH1/ΔF所产生的改变可能是由于5处突变导致核心基因二级结构改变而造成的．结果说明,HCV F蛋白缺失不影响病毒的复制翻译及病毒颗粒的包装释放,核心蛋白二级结构的改变对病毒复制和翻译则产生较大影响．     

HCV全长基因真核表达载体的构建及其细胞内表达

本实验成功构建了HCV全长基因的真核表达载体pCI-HCVFL,转染HepG2细胞后经免疫荧光和免疫组化法分别检测到结构基因区(C)和非结构基因区(NS3)病毒蛋白的表达,该载体可用于建立HCV转基因细胞模型以及进一步开展有关HCV复制与表达的深入研究。     

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制上的应用

痘苗病毒作为真核表达载体已广泛应用于外源基因的表达,并日益受到重视,本文就痘苗病毒的生物学特性,重组痘苗病毒的构建原则,外源基因在重组痘苗病毒中的表达情况及重组痘苗病毒作为活疫苗的优缺点等方面作一概括性综述。     

HCV全长基因真核表达载体的构建及其细胞内表达

本实验成功构建了HCV全长基因的真核表达载体pCI-HCVFL,转染HepG2细胞后经免疫荧光和免疫组化法分别检测到结构基因区(C)和非结构基因区(NS3)病毒蛋白的表达,该栽体可用于建立HCV转基因细胞模型以及进一步开展有关HCV复制与表达的深入研究.     

通过合成基因线路实现细胞分类

合成生物学是生物学与工程学结合的新兴学科,通过人工将生物元器件组合成线路引入细胞,使细胞获得对信息进行处理并做特定输出的新功能。近年来,针对疾病治疗的合成生物学研究发展迅猛,基因线路的工程化特性使通过它对疾病进行更精确、灵活的干预成为可能,在基因治疗中有广泛的应用前景。精确干预的前提是综合多种输入信号并识别出特定种类的细胞,如特异性识别出癌细胞的溶瘤病毒。疾病的发生往往伴随着细胞内多种调控网络的改变,从中提取出关键信号分子作为基因线路的输入至关重要。现综述哺乳动物细胞中对不同的信号输入进行感知的基因线路细胞分类器,为未来模块化整合信号输入、设计基因线路提供新的思路。     

肠道病毒功能基因组及基因组多样性的研究进展

肠道病毒属单正链小RNA病毒,其疾病谱较为复杂。近年来随着各种分子生物学技术的发展,特别是基因测序技术的运用,使从基因水平上分析肠道病毒的致病性、病毒毒力与变异的关系等逐步成为研究热点。本文主要就肠道病毒基因组结构及其功能、基因组多样性的形成方面综述,并进一步探讨其与病毒生物学特性、致病机制及病毒进化的关系。     

猪口蹄疫病毒与猪肠道病毒在细胞培养中的基因重组——病毒重组及一个重组株的初步鉴定

利用两株不同理化和生物学特性的不同属小RNA病毒,即口蹄疫病毒(FMDV)与猪肠道病毒(EV),建立了病毒基因重组,克隆筛选和鉴定的方法,初步证实,在实验室条件下它们可以进行基因重组,本文为研究自然界病毒变异机理,不同属病毒的基因重组提供了依据。     

戊型肝炎病毒开读框架3的分子生物学特性及研究进展

结合近年来在HEV病毒ORF3基因片断方面的研究进展,详细论述了ORF3的分子生物学特性,编码蛋白的生物学功能和它在戊型肝炎的诊断与预防中发挥的作用。对来自不同实验室的科研数据进行了综合分析及科学推论,预测并展望了今后HEV的研究方向。     

HCV感染过程中的相关免疫反应

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是慢性丙型病毒性肝炎的主要病因,也是引发肝硬化和肝癌的主要诱因。在HCV感染过程中,伴随着干扰素信号通路的激活和干扰素刺激基因(IFN-stimulated gene,ISG)的持续表达,且有HCV独特的免疫逃逸和免疫细胞的功能损伤。现就HCV感染过程中机体的固有免疫反应和适应性免疫反应的研究进展作一综述。