酪氨酸酶产生菌诱变及其转化条件的研究

<正> 酪氨酸酶(Tyrosinase)是一单加氧酶,可从哺乳动物、真菌、链霉菌属细菌、链孢霉属菌、芽孢杆菌属细菌中提取,它催化L—酪氨酸转化成L-3,4-二羟基苯丙氨酸(即左旋多巴,L—Dopa),转化能力的高低与菌株酪氨酸酶活性高低普遍具有正相关性。     

酪氨酸酶的应用研究进展

酪氨酸酶具有重要的生理生化特性,在医药、环境、食品、精细化工等领域具有广泛的用 途。酪氨酸酶可以氧化L-酪氨酸合成L-多巴和黑色素,L-多巴用于帕金森症的治疗,黑色素能够 杀死HIV病毒。酪氨酸酶可用于环境工程领域处理含苯酚及胺类废水,用于精细化工领域催化 有机合成反应。综述了酪氨酸酶在各个领域的应用概况,阐明了其在工业生产领域的应用前景。     

他卡西醇对人黑素细胞生物学性状的影响

目的:观察他卡西醇对体外培养的正常人黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(TYR)mRNA表达、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)mRNA表达的影响,探讨他卡西醇治疗白癜风的机制.方法:体外黑素细胞培养,给予不同浓度他卡西醇(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)处理,用MTT法测定细胞增殖,碱裂解法测定黑素合成,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,半定量RT-PCR法检测TYR、TRP-1 mRNA的表达.结果:10-8 mol/L他卡西醇能刺激黑素细胞增殖,10-8、10-9 mol/L能促进黑素合成,10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能显著增强正常人黑素细胞酪氨酸酶活性并上调TYR、TRP-1mRNA的表达.结论:他卡西醇可促进黑素细胞增殖,并提示该药物可能通过上调酪氨酸酶家族中关键基因TYR、TRP-1mRNA的表达来提高酪氨酸酶活性,最终增加黑素合成.     

6种植物提取物对酪氨酸酶活性的影响

近年来,中草药美容由于疗效显著、毒副作用小而风靡全球。与此同时,中外众多研究者从中国古代治疗皮肤病的方剂中筛选出多种中药,以现代实验手段探讨它们的作用机理,从而更有效地指导美容用品的研制开发,植物药对酪氨酸酶活性的影响便是其中的研究课题之一。已有证据表明,酪氨酸酶在黑色素生成过程中起着极为关键的作用,用药物调节酪氨酸酶的活性,能医治相关的皮肤病[1]。Ｙｕｋｉｍｉｔｓｕ等[2]选用26种在古方中用于皮肤增白的中药进行了酪氨酸酶活性的抑制性试验;雷铁池等[3]用计算机从古今中医治疗色素增加性皮肤病方剂中精选69首进…     

磺化煤层离法生产L-盐酸组氨酸工艺简介

<正> L—组氨酸是主要用于治疗消化器溃疡的药物,它作用于间脑,阻止付交感神经系统的加速作用,能加速组织的增生和血液的凝固,因而治疗溃疡的功效较好;同时因为组氨酸影响自主神经,可以用来治疗心循环系统病如:心绞痛、主劲脉炎、心机不全等病;此外,也用于治疗贫血、加速红血球、白血球生成和铁摄入机体。过去我厂用猪血粉生产 L—盐酸组     

橄榄苦苷对酪氨酸酶抑制作用的研究

本文通过测定橄榄苦苷对小鼠B16黑色素瘤细胞内酪氨酸酶和蘑菇酪氨酸酶的抑制率、分析橄榄苦苷对蘑菇酪氨酸酶的抑制机理和抑制类型,研究其对酪氨酸酶的抑制作用.结果 表明,橄榄苦苷对小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶的活性有明显的抑制作用,100、200 μmol/L的橄榄苦苷对B16细胞酪氨酸酶活性的抑制率分别为8.96％±2...     

不同剂量L-酪氨酸（L—TYR）对羊驼黑素细胞增殖及酪氨酸酶mRNA表达的影响

目的：探索不同剂量的L-酪氨酸对羊驼黑素细胞增殖以及酪氨酸酶mRNA表达的影响。方法：体外培养正常羊驼皮肤黑素细胞,显微镜下观察不同剂量的L-酪氨酸（100μmol／L、200μmol／L、300μmol／L、400μmol／L）对羊驼皮肤黑素细胞增殖的影响,利用实时荧光定量PCR技术分析不同剂量L-酪氨酸对酪氨酸酶mRNA的表达量的影响。结果：研究结果显示：在培养的黑素细胞中添加了不同剂量L-酪氨酸3d后,镜检观察,黑素细胞数量相比较空白对照组有所减少,酪氨酸酶mRNA表达量增加且显著高于对照组（P〈0．05）,在200μmol／L时,酪氨酸酶mRNA表达量达到最高峰值。结论：L-酪氨酸能诱导羊驼皮肤黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达量增高。     

添加黄芩对灵芝发酵液中酪氨酸酶抑制剂活性的影响

本文以酪氨酸酶抑制率为指标,对添加黄芩的灵芝液体发酵培养基进行优化并考察其发酵过程.结合正交实验和响应面分析,优化的培养基组成为(g/L):黄芩 6.3,麸皮12.0,蛋白胨6.0,玉米粉 15.6,葡萄糖 6.86,豆饼粉11.3.在此条件下,发酵产物的酪氨酸酶抑制率理论最大值为52.87%.磷酸二氢钾的最适添加浓度为1.5 g/L,而硫酸镁添加后,酪氨酸酶抑制率持续降低,呈现出负效应.添加黄芩的灵芝发酵过程中pH变化较未添加黄芩时缓和;灵芝发酵液的酪氨酸酶抑制活性显著提高,酪氨酸酶抑制剂的产生与细胞的生长呈现部分偶联型.     

松茸多糖TMSP-5亚组分Ⅱ的美白活性及途径研究

本文初步研究了松茸多糖TMSP-5亚组分Ⅱ的美白作用机理。采用酪氨酸酶抑制实验、细胞水平黑色素测定实验来综合评价TMSP-5亚组分Ⅱ的美白功效;选定MITF、POMC和TYR三个靶基因作为研究对象,通过实时定量PCR实验,进一步阐明TMSP-5亚组分Ⅱ的美白作用靶点。结果显示,TMSP-5亚组分Ⅱ对酪氨酸酶具有一定的抑制作用,125μg/m L时酪氨酸酶抑制率为56.5%;不同浓度(3、30、300μg/m L)的TMSP-5亚组分Ⅱ样品能成剂量依赖的方式抑制B16细胞内黑色素水平,当浓度为300μg/m L时,TMSP-5亚组分Ⅱ样品能够减少黑色素的含量,且优于熊果苷;TMSP-5亚组分Ⅱ对MITF、POMC、TYR的表达水平均起下调作用,从而影响了黑素的形成。结果表明,TMSP-5亚组分Ⅱ样品具有一定的美白功效。TMSP-5亚组分Ⅱ样品对酪氨酸酶生成的重要基因和主要影响因子的基因水平的表达起到抑制作用,从而减少酪氨酸酶的量。     

小菜蛾酪氨酸酶生物化学性质研究

采用时间动力学法对小菜蛾Plutella xylostella酪氨酸酶的最适反应条件、对抑制剂的敏感度以及发育期变化规律进行了研究。结果表明：小菜蛾酪氨酸酶反应的最适pH值为6.4,反应线性时间为0～2 min,在22℃和4℃下其活性分别可保持12 h 和72 h,在-20℃下至少可保持7 天。不同发育阶段小菜蛾酪氨酸酶活性的大小依次为预蛹＞4龄幼虫＞蛹＞1龄、2龄、3龄幼虫＞成虫。苯基硫脲（phenyl thiourea,PTU）对小菜蛾阿维菌素抗性品系和敏感品系酪氨酸酶活性的抑制中浓度（I₅₀）值分别为1.1796 μmol/L和1.2795 μmol/L,二者无明显差异。     

驱虫斑鸠菊对B-16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的 :探讨驱虫斑鸠菊体外对酪氨酸酶活性影响 ,以及对小鼠B - 16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶的作用。方法 :利用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定药物对细胞增殖的影响 ;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响 ;470nm比色法测定黑素含量。结果驱虫斑鸠菊体外可激活酪氨酸酶活性 ,增强B - 16鼠黑素瘤细胞增殖 ,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力 ;对整体动物黑素细胞具有促进合成和分泌作用。结论在白癜风的治疗中 ,驱虫斑鸠菊可增强酪氨酸酶活性 ,进而促进黑素合成     

荆芥水提物对马铃薯酪氨酸酶作用的研究

本文研究了罗勒多糖对马铃薯酪氨酸酶活性的影响.实验中以L-酪氨酸为底物,从马铃薯中提取酪氨酸酶,以维生素C为对照,采用比色法测定了罗勒多糖对酪氨酸酶活性的抑制作用.结果表明,罗勒多糖在较低浓度时,其抑制作用要小于维生素C,浓度为7 g/L时,对酪氨酸酶的抑制作用与维生素C相当,之后,随浓度增加,维生素C的抑制作用下降,而罗勒多糖抑制作用继续升高,当罗勒多糖浓度为7.5 g/L时抑制率达到82.6％,远远高于同浓度的维生素C;当罗勒多糖浓度为8 g/L时,抑制作用下降,抑制率为47.8％.因此可以考虑将其作为新的植物源美白成份进行开发利用.     

驱虫斑鸠菊对人黑素瘤细胞增殖酪氨酸酶及黑素生成影响的研究

探讨驱虫斑鸠菊对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶的作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定药物对细胞增殖的影响;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响;475nm比色法测定黑素含量。结果表明驱虫斑鸠菊可以增强A375人黑素瘤细胞增殖,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力。说明驱虫斑鸠菊治疗白癜风是通过增强酪氨酸酶活性及促进黑素合成而发挥作用的。     

新疆石榴皮多酚的提取及其对酪氨酸酶的抑制作用

优化新疆石榴皮多酚的提取工艺,并研究石榴皮提取物对酪氨酸酶的抑制作用。采用超声波辅助法提取石榴皮多酚,通过单因素试验和正交试验确定其最佳提取工艺条件:丙酮体积分数70%、超声波功率200 W、提取温度40℃、料液比1∶35 g/m L、提取时间50 min、提取2次,在此条件下石榴皮多酚得率为23.77 mg/g。同时测定了石榴皮多酚提取物对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性,石榴皮多酚提取物质量浓度在12 mg/m L时,对酪氨酸酶活力的相对抑制率为44.05%。该研究为从石榴皮中提取天然酪氨酸酶抑制剂提供了实验依据。     

大黄蒽醌衍生物对酪氨酸酶的抑制作用

大黄素对酪氨酸酶有显著的竞争性抑制作用,K_i值为1.51×10~(-4)mol,50％抑制的药物浓度为36.6μg/ml;大黄酸的抑制作用较弱,芦荟大黄素几乎无抑制作用。氯化铜(3.3×10~(-7)mol/L)、半胱氨酸(3.3×10~(-7)mol/L)和牛血清白蛋白(1.0mg/ml)对大黄素抑制酪氨酸酶有较强的拮抗作用,恢复率分别为60.0％、45.7％和61.1％。大黄素能与牛血清白蛋白非特异性结合形成复合物,引起吸收光谱红移55毫微米。大黄蒽醌衍生物对酪氨酸酶的抑制作用可能是大黄抗黑色素瘤的作用机制之一。     

45味中药乙醇提取物中对酪氨酸酶的激活作用

从中医治疗白癜风方剂中筛选出中药45味,观察这些中药50%乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果显示有21味中药乙醇提取物在3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶活性、黑素生成具有激活作用,其中女贞子、梅花和八角茴香对酪氨酸酶的激活作用较明显;同时分析了其中有激活作用的中药的功用等分类情况,以探...     

DNA稳定的银纳米簇诱导的双酶催化转化检测研究

为了实现对碱性磷酸酶和邻-磷酸-L-酪氨酸的同时检测,本研究利用 DNA 稳定的银纳米簇（AgNCs／DNA）诱导的生物催化转化,基于醌类物质对 DNA 稳定的银纳米簇的荧光的猝灭效应,通过酪氨酸酶能与酪胺、多巴胺以及酪氨酸反应生成醌类物质,间接地达到了对酪胺、多巴胺以及酪氨酸的定量检测。AgNCs／DNA 还被进一步用于双酶催化级联反应,通过碱性磷酸氧化酶（ALP）和酪氨酸酶（TYR）组成的双酶系统,实现了对碱性磷酸酶和邻-磷酸-L-酪氨酸的高灵敏度检测,检测限分别达到2．5×10－5μmol·L－1和0．01μmol·L－1。     

枸骨叶提取物对酪氨酸酶的抑制与抗氧化作用

本实验以枸骨叶为研究对象,经75%乙醇浸提,用极性递增的溶剂分离制备获得枸骨叶提取物,测定了枸骨叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用,并使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除的方法检测了枸骨叶提取物抗氧化能力。实验结果表明:枸骨叶三氯甲烷和正丁醇提取物对酪氨酸酶具有较强的抑制作用,IC50值分别达到0.414 mg/m L和0.667 mg/m L,均为混合型可逆抑制类型。同时,二者均具有一定的清除DPPH自由基的能力,IC50值分别为0.132 mg/m L和0.039 mg/m L,表明枸骨叶提取物同时具有抑制酪氨酸酶活性和抗氧化的功效,在美容、药物及食品等行业具有潜在的应用价值。     

灰色链霉菌襄阳变种的鉴定

从湖北省襄阳、南漳等县的土壤和红花根瘤中分离到的鄂襄1号等3株链霉菌,在形态,培养特征、生理特性和抗菌谱等方面均相同,故以鄂襄1号为代表株。它们与灰色链霉菌模式株ISP 5230¨1也很相似,但也有显著区别：如后者在多种培养基上均不产生可溶性色素,而鄂襄1号等产生黄色可溶性色素;后者酪氨酸酶反应阳性、不利用L一阿拉伯糖,而鄂襄l号等酪氨酸酶反应阴性、利用L一阿拉伯糖良好。故定名为灰色链霉菌襄阳变种(Streptomyces griseusvar. Xiangyangensis n. var. Yan et al.)。