产适冷木聚糖酶的海洋产青霉的筛选和诱变

从黄海深层海底泥样中分离到1株产低温木聚糖酶的青霉,经EMS诱变得到11株酶活性提高的菌株,对其中1株产低温木聚糖酶活力最高的菌株产酶性质进行了初步研究。所产木聚糖酶在pH4．6,45℃时酶活可达25．8u／ml,比出发菌株提高126％。诱变后菌株所产木聚糖酶在0℃仍有显著酶活性,达8．2u／ml。     

斜卧青霉纤维素酶和木聚糖酶高产菌株的选育

以纤维素酶高产菌株斜卧青霉A50为出发菌株,通过紫外诱变原生质体获得1株木聚糖酶活力提高80%而纤维素酶活力没有改变的6号菌。蛋白质电泳和酶谱检测结果显示,纤维素酶谱基本无差别,而木聚糖酶谱显示6号菌比A50多了一条带。6号菌优化后的产酶培养基组成为:麸皮7%、葡萄糖0.1%,该条件下,纤维素酶活为19.7IU/mL,木聚糖酶活力为215.4IU/mL。     

等离子体法诱变淡紫拟青霉产几丁质酶菌种的筛选

采用菌株诱变技术,提高生防用淡紫拟青霉菌株产几丁质酶的能力。通过常温常压等离子体诱变技术(MPMS)对淡紫拟青霉进行诱变育种处理,对处理的菌种先采用透明圈法进行初筛,然后采用发酵方法进行复筛。采用MPMS法诱变淡紫拟青霉产几丁质酶菌种时,温度25℃,处理时间30 s,样品处理量60μL,诱变菌的致死率为30.33%时,正突变率为14%。采用摇瓶分批发酵培养,诱变菌种的几丁质酶活为0.17 U/mL。结果表明,经过对淡紫拟青霉的诱变处理,获得高活性几丁质酶产生菌株,几丁质酶酶活提高180%。     

顶青霉D15木聚糖酶提纯及性质研究

经硫酸铵分级沉淀,BiO-gelP60凝胶过滤,和DEAE离子交换层析,从顶青霉D_15的麦麸培养物中提纯,得到4个具有凝胶电泳纯的木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x2)、2_(x3)、D_(x4)、SDS—凝胶电泳法测得各个组分的分子量是:D_(x1),76000;D_(x2),4300;D_(x3),32500;D_(x4),29500。圆盘等电聚焦电泳法测得4个组分的等电点分别为4.50、5.70、5.30和5.20。热处理60分钟,D_(x1)、D_(x2),D_(x3)、D_(x4)的半失活温度分别为51.7℃、50.8℃、54.6℃和55.6℃。D_(x1)、D_(x4)在pH3.6—6.6稳定,D_(x2)和D_(x3)则在pH2.4—6.0稳定。各组分的A_(280)(1cm(?)mg/m1)分别是:D_(x1),0.97;D_(x2),1.46;D_(x3),0.98和D_(x4),1.07。     

顶青霉D_(15)木聚糖酶性质研究

本文对项青霉D_(1(?))的四个木聚糖酶组分的特性进行了研究。木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x4)的最佳反应pH为4.8,最适温度分别为40℃和50℃,D_(x2)和D_(x3)的最适pH和温度都分别为pH4.2和50℃。Ag~(++)、Hg~(++),Cu~(++)对四个组分的活性均有强烈的抑制作用,SDS也能产生明显的抑制效果。Mn~(++)对D_(x1)具有促进作用。D_(x1)、D_(x4)在以燕麦木聚糖为底物时活性最高,其Km值分别为11.7(mg/ml)和8.3(mg/ml),D_(x2)和D_(x3)则分别在水解红麻杆木聚糖和落叶松木聚糖时活性最强,Km值分别为8.4(mg/ml)和6.3(mg/ml)。水解燕麦木聚糖,D_(x1)的产物主要为木糖,同时带有少量的低聚木糖。D_(x2)、D_(x3)和D_(x4)的产物则包括木糖和较多的低聚木糖。D_(x4)与D_(x2)及D_(x3)之间在水解燕麦木聚糖时存在协同作用关系。     

木聚糖酶高产菌株的诱变*

出发菌株Aspergillus niger M1经过紫外线诱变得到一株木聚糖酶活力提高30％的突变株A．niger J506。木聚糖酶谱带检测发现,突变株成熟发酵液中有3种类型的木聚糖酶,而出发菌株中只有两种。经过正交试验得出突变株产酶的最佳发酵条件为：主碳源浓度4％、麸皮与玉米芯的比例为5：5、葡萄糖浓度0．1％、草酸铵浓度2．0％,培养基初始pH为5．0,250mL三角瓶的装液量为100mL。     

嗜热拟青霉固体发酵产木聚糖酶的纯化和性质

研究一株新的嗜热拟青霉J18的固体发酵产木聚糖酶的纯化和性质。固体发酵的粗酶液经硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和离子交换层析得到了一种分子量约为26 kDa的电泳纯木聚糖酶,酶活力回收率为33.5%,纯化了5.27倍。该木聚糖酶具有很好的温度和pH稳定性,在pH7.0~pH 9.0下,60℃处理24 h,酶活力能保存80%以上。该酶水解玉米芯木聚糖生成以木二糖、木三糖和木四糖为主的低聚木糖,薄层层析分析表明不含木糖,适合生产低聚木糖。     

嗜热拟青霉固体发酵产木聚糖酶条件的优化*

从土壤中筛选出一株高产木聚糖酶的嗜热真菌J18,经鉴定为一种新的拟青霉,暂定为嗜热拟青霉。该菌能够利用几种天然纤维质材料固体发酵产木聚糖酶,小麦秸杆为最佳碳源。单因素优化试验表明：小麦秸杆粒度为0．3mm-0．45mm,初始水分含量83％,初始pH7．0,温度为50℃为最佳产酶条件。在优化后的条件下,培养8d产木聚糖酶的水平高达18,580U／g干基碳源。因此,嗜热拟青霉固体发酵产木聚糖酶将具有很大的工业化应用前景。     

耐冷皮壳正青霉一种木聚糖酶的纯化与性质研究

研究了耐冷皮壳正青霉Eupenicillium crustaceum一种木聚糖酶的纯化和酶学性质。采用硫酸铵沉淀和阴离子交换层析的方法,从耐冷皮壳正青霉液体发酵液中分离纯化出一种亚基分子量35kDa的木聚糖酶。酶学性质研究表明,酶的最适pH值为5.5,在pH4.5-6.5范围内具有较高的催化活性。最适温度为50℃,20℃下酶活为最高酶活的40%。Ag+和Fe2+大幅度提高木聚糖酶的酶活,而Mn2+和Hg2+强烈抑制木聚糖酶的活性。同时,该木聚糖酶具有严格的底物特异性。     

激光诱变青霉PT95原生质体选育类胡萝卜素高产菌株

采用激光对青霉PT95菌株的原生质体进行了诱变处理,选育到一株菌核生物量和类胡萝卜素含量均有显提高的突变菌株L05。与出发菌株相比,L05菌株的菌核生物量提高了98.6%,菌核中的类胡萝卜素含量提高了28.3%,在查氏平板上的类胡萝卜素产率提高了154.0%。所选育的L05菌株经3次传代培养,菌落没有发生扇形变异,菌核生物量和类胡萝卜素含量没有明显改变,说明该菌株具有良好的遗传稳定性。     

碱性脂肪酶产生菌扩展青霉W—1382的诱变育种

以扩展青毒（Ｐｅｎｉｃｉｌｕｍｅｘｐａｎｓｕｍ）Ｓ－１４作为出发菌株,分别比较ＵＶ、Ｃｏ６０－γ射线、ＮＴＧ单因子的诱变效应和以ＮＴＧ、Ｃｏ６０－γ射线、ＵＶ＋ＮＴＧ作为诱变剂及自然分离在内四代的诱变育种。单因子诱变剂最适剂量分别为ＵＶ１５０ｓ,Ｃｏ６０－γ射线４８０００ｒａｄ,ＮＴＧ３００μｇ／ｍｌ８０ｍｉｎ,比较诱变效果表明：ＮＴＧ最佳,Ｃｏ６０－γ射线次之,ＵＶ较差;连续三代诱变各代诱变剂及剂量分别为ＮＴＧ３００μｇ／ｍｌ１００ｍｉｎ,Ｃｏ６０－γ射线２００００ｒａｄ,ＵＶ３０ｓ＋ＮＴＧ１５０μｇ／ｍｌ,４０ｍｉｎ。复合处理比单因子处理效果好。实验中选育成功高产酶变株Ｗ－１３８２,结合自然分离和诱变育种,其酶活力较出发菌株提高了５３．６％。     

球孢白僵菌的紫外诱变及几丁质酶高产菌株的筛选

以球孢白僵菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａｂａｓｓｉａｎａ）１３１６为出发菌株,通过２０ｍｉｎ和３０ｍｉｎ的紫外线交替诱变分生孢子,采用透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法,得到一突变株ＣＨ－１３１６。和原始菌株相比,该突变株的几丁质酶活力提高了近３倍,经传代培养,该菌株的几丁质酶高产特性能稳定遗传。     

产胞外木聚糖酶链霉菌发酵条件的正交试验

通过正变试验,设计出适合链霉菌（Streptomycessp.Strz—6）产胞外木聚糖酶的发酵条件,培养基（g／L）含麦草半纤维素5,NaNO31.67,酵母膏2,乳糖2,Tween801.5K2HPO4·3H2O1,MgSO4·7H2O0.5,NaCl0．3,微量元素B、Mn、Fe、Zn、Mo。接种量为1．4×108个孢子／50ml培养基,振荡,（120r／min）培养5d.     

草菇耐低温菌株的诱变选育与鉴定

在草菇V23原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体。分别用紫外线(UV),60Co-γ射线,硫酸二乙酯(DES)对原生质体进行复合诱变。初筛、复筛获得耐常规低温(4℃)10d的菌株VH。栽培实验证明:VH在26℃下的生物学效率明显优于V23(CK),且差异极显著。同工酶分析表明:VH过氧化物同工酶,酯酶同工酶谱带数量及酶活性均发生变化;RAPD实验显示:VH相对于V23的变异系数为0.213。VH菇体正常,味道鲜美,食用后无毒副作用。氨基酸组成分析表明:除总氨基酸和谷氨酸含量VH高于V23外,其它氨基酸差异不明显。VH遗传性状稳定,是具有潜在应用价值的优良菌株。     

木聚糖酶高产菌株Bacillus pumilus H—101的筛选及产酶条件的研究

从34株细菌中筛选到一株木聚糖酶高产菌株BacilluspumilusH－101。适宜的产酶培养基含2．0％小麦秸半纤维素、0．2％（NH4）2SO4、0．1％NH4NO3、0.1％K2HPO4、0．01％MgSO4·7H2O、0.02％NaC1、0.02％CaCl2·2H2O和1.0％的酵母膏。在上述培养基中,32℃振荡培养48h,总半纤维素酶活力达235．6u／ml,木聚精酶活力达1164．2u／ml酶反应的最适温度为50℃,最适酸碱度为pH6．5;Na 、Mg2 等离子可提高木聚精酶的水解活性,而Zn2 、Cu2 等离子则对木聚糖酶活性有明显的抑制作用。     

里氏木霉GXC木聚糖酶的研究*

研究了里氏木霉GXC产木聚糖酶的条件和酶学性质。结果表明,适宜产酶碳源为乳糖、甘露糖、棉子糖、木聚糖和麸皮,氮源为牛肉膏和酵母膏;产酶的最适初始pH为4.0,30℃培养60h。对以麸皮为碳源的培养液进行纯化的酶特性研究表明,木聚糖酶的最适反应温度为50℃,pH为5.5,该酶在pH5.0(7.0和40℃以下相对稳定。Fe3+和Mn2+对木聚糖酶有较大的促进作用,Cu～2+、Fe～2+和Ca～2+ 具有抑制作用。     

里氏木霉GXC木聚糖酶的研究

研究了里氏木霉GXC产木聚糖酶的条件和酶学性质。结果表明,适宜产酶碳源为乳糖、甘露糖、棉子糖、木聚糖和麸皮,氮源为牛肉膏和酵母膏;产酶的最适初始pH为4.0,30℃培养60h。对以麸皮为碳源的培养液进行纯化的酶特性研究表明,木聚糖酶的最适反应温度为50℃,pH为5.5,该酶在pH5.0(7.0和40℃以下相对稳定。Fe3+和Mn2+对木聚糖酶有较大的促进作用,Cu～2+、Fe～2+和Ca～2+ 具有抑制作用。     

青霉PT95菌株菌核内产生类胡萝卜素的研究

从土壤中分离到一株经鉴定属于Penicilliumthomiiseries的菌株PT95,该菌株在6种固体培养基上都能形成大量的橙红色菌核,其中在察氏培养基上形成的菌核量最大,而在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上形成的菌核的类胡萝卜素含量最高。培养基初始pH对菌核形成和色素含量无明显影响,但对菌落生长速度有显著影响。光照培养对菌核形成和色素含量无明显影响。薄层色谱分析表明,PT95菌株菌核内产生的类胡萝卜素由两种色素成分组成,其中β-胡萝卜素占总色素量的64．3％。