结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生

结球白菜（Brassica campestris ssp．pekinensis）的原生质体培养由于基因型依赖性强,细胞易褐化,愈伤组织的芽诱导率低等而难于再生植株。本实验以结球白菜的下胚轴原生质体为试材,研究了影响其细胞分裂及愈伤组织形成的因素,探索了经过体细胞胚发生途径获得再生植株的技术。结果表明,试材的基因型及培养基组成影响细胞分裂及褐化;KM8P是结球白菜原生质体培养更适宜的培养基,能显著减轻细胞的褐化;液体培养基中一定浓度的活性炭能在一定程度上减轻细胞褐化进程,并有利于星状细胞团的形成;基因型Asko中,愈伤组织形成体细胞胚的结构,其发生的频率约为5％,该类体细胞胚能全部顺利地发育成完整植株。本技术具有再生植株形成容易、频率较高且通过体细胞胚发生途径等优点。     

结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生

结球白菜(Brassica campestris ssp. pekinensis)的原生质体培养由于基因型依赖性强, 细胞易褐化,愈伤组织的芽诱导率低等而难于再生植株。本实验以结球白菜的下胚轴原生质体为试材, 研究了影响其细胞分裂及愈伤组织形成的因素, 探索了经过体细胞胚发生途径获得再生植株的技术。结果表明, 试材的基因型及培养基组成影响细胞分裂及褐化; KM8P是结球白菜原生质体培养更适宜的培养基, 能显著减轻细胞的褐化; 液体培养基中一定浓度的活性炭能在一定程度上减轻细胞褐化进程, 并有利于星状细胞团的形成; 基因型Asko中, 愈伤组织形成体细胞胚的结构, 其发生的频率约为5%, 该类体细胞胚能全部顺利地发育成完整植株。本技术具有再生植株形成容易、频率较高且通过体细胞胚发生途径等优点。     

不结球白菜小孢子胚植株再生及倍性研究

以不结球白菜子叶型小孢子胚为外植体,研究冷处理、活性炭及AgNO3对小孢子植株再生的影响,并对再生植株染色体倍性进行鉴定.结果表明:对小孢子胚进行5 d的4℃冷处理培养能提高其胚芽诱导率和胚芽数;培养基中添加1.0 g/L的活性炭对提高小孢子胚芽诱导率没有明显效果,但能有效减轻胚芽的玻璃化;添加5.0或7.0 mg/L的AgNO3对小孢子胚芽诱导有显著效果.染色体倍性鉴定结果表明:不结球白菜小孢子植株的染色体自然加倍率较高,在50%～100%之间;不同基因型不结球白菜小孢子植株的倍性变异具有多样性;在部分基因型中嵌合体占较高比例,最高达到42.86%.     

新疆紫草的无性繁殖及其再生植株的遗传稳定性初探

诱导新疆紫草多种外植体脱分化均已成功,嫩芽切段最快,胚轴切段次之。培养期间,2,4－D不可缺少,KT的作用优于6－BA。降低2,4－D浓度利于愈伤组织扩增和再分化。KT或6－BA都可诱导出不定芽,前者还有利于球形胚的形成。适当的昼夜温差（10－28℃）和自然光照有利于壮苗的形成和移栽成活。的疆紫草种子萌发苗根细胞染色体为14条,再生试管苗根细胞染色体为14条的占97.1%。     

不结球白菜离体培养与植株再生体系研究

以4个不结球白菜品种为试材,对外植体、苗龄、激素的组配、培养基中琼脂和AgNO3浓度等再生因素进行了筛选优化,并探讨了抗坏血酸(AsA)对不结球白菜不定芽分化的影响。结果显示:以4~7d苗龄的带柄子叶为外植体诱导不定芽效果较好;MN培养基中4mg/L6-BA与0.5mg/LNAA的搭配有利于不定芽形成;琼脂的浓度变化对不定芽分化影响较大,以9g/L琼脂为宜;培养基中添加5~7.5mg/L的AgNO3、0.1~0.5mmol/L的AsA可显著提高不定芽的发生频率和质量。通过不定芽继代培养、生根培养和驯化移栽建立了能够获得较高再生频率的不结球白菜离体再生体系。     

结球白菜带柄子叶外植体不定芽离体再生能力的遗传分析

解析控制植物不定芽离体再生能力的遗传因素,有助于从根本上提高离体培养困难材料的不定芽再生能力,是植物基因工程遗传改良的基础.本研究以结球白菜4个纯合亲本及其杂交后代的带柄子叶为外植体,建立了高频率离体不定芽再生技术.据此我们还对白菜不定芽再生能力进行遗传分析,并开展亲本与后代杂种的离体培养及反应研究,包括对培养基的激素需求,不定芽形成频率,不定芽形成数量,芽形态等系列特征.研究结果表明,杂种与亲本在培养基的激素浓度上有类似需求;杂交后代的不定芽再生率均至少高于一方亲本,在一些组合中可以高于双亲;在适宜的杂交组合及培养条件下,结球白菜带柄子叶外植体的不定芽再生率可以达100%,每一外植体上的不定芽数达3～7个.方差分析表明,结球白菜的不定芽离体再生能力存在基因的加性效应.     

不结球白菜杂种优势及相关分析

以4个不结球白菜不育系与4个父本系以NCⅡ法配制16个杂交组合,研究了16个F1组合的杂种优势表现及其与亲本之间的相关关系,同时对性状间的遗传相关进行分析.结果表明:不结球白菜产量性状杂种优势＞农艺性状杂种优势＞光合性状杂种优势＞品质性状杂种优势.产量性状以超亲优势为主,农艺性状和光合性状以中亲优势为主,品质性状中可溶性糖含量以中亲优势为主, Vc含量和蛋白质含量均为弱的负向优势.亲子相关分析表明,一些性状F1与中亲值、低亲值或高亲值显著相关,因此在亲本选配时,注意亲本差异的同时,中亲值特别是低亲值不能过低,尤其是品质性状.性状间相关分析显示,光合性状与产量性状显著正相关,说明F1高效的光合同化作用是杂种高产的基础.品质性状中,可溶性糖含量与产量显著正相关,但Vc和蛋白质含量与产量负相关,在亲本选配时还应注意二者的协调.     

不结球白菜叶子重量性状遗传模型分析

应用主基因+多基因6个世代联合分离分析方法, 对不结球白菜SI×秋017组合的叶片重和叶柄重性状进行了分析。结果表明, SI×秋017组合的叶片重性状遗传受1对负向完全显性主基因+加性-显性多基因(D-4)控制, 主基因加性效应为1.8991, 显性效应为-1.8991; 多基因加性效应为-1.2934, 显性效应为1.7933; 势能比值为-1.3865, 显性度为-1.0000; B1、B2和F2世代群体叶片重的主基因遗传率分别为6.98%、4.33% 和36.08%; B1、B2和F2世代群体叶片重的多基因遗传率为16.03%、7.39%和23.96%。叶柄重的遗传受1对加性主基因+加性-显性多基因(D-2)控制, 主基因加性效应为-1.1457, 显性效应为0; 多基因加性效应为1.3472, 多基因显性效应为2.5788; 势能比值为1.9142, 显性度为0。B1、B2和F2世代群体叶柄重的主基因遗传率分别为31.72%、5.27%和57.94%。B1、B2和F2世代群体叶柄重的多基因遗传率分别为0.42%、4.59%和4.80%。对SI×秋017组合叶片重性状的改良要在晚代选择; 对叶柄重的改良要以主基因为主, 可在早代选择。     

结球白菜离体子叶不定芽再生过程中的组织学及生理变化

以日本引进品种爱知结球白菜(Brassica rapa ssp．pekinensis CV．AiehiHakusai,C1)为试材,对离体子叶不定芽再生过程中的组织学和生理变化进行了研究。结果表明,子叶在离体培养过程中,不定芽发生方式为器官直接发生。在不定芽形成前,可溶性蛋白质含量、POD和SOD的活性均呈上升趋势。随着细胞的脱分化,代谢活动逐渐旺盛,酶活性增强,可溶性蛋白质含量增加,表明不定芽形成过程中形态变化与生理变化紧密相联。培养基中添加AgNO3对酶活性有促进作用,并促进不定芽的分化。     

壳寡糖对不结球白菜子叶离体培养再生体系的影响

以不结球白菜（Brassica campestris L．ssp．chinensis Makino）子叶为外植体,考察壳寡糖对不结球白菜子叶离体培养再生体系的影响。在添加外源激素6．BA和NAA的条件下,比较了不同浓度（0．5、1．0、2．0和10．0mg·L^-1）壳寡糖对不结球白菜子叶形成愈伤组织、再生芽和再生不定根的影响。实验结果表明,低浓度的壳寡糖能促进子叶形成愈伤组织、再生芽。壳寡糖促进子叶形成愈伤组织和再生芽的最适浓度为0．5mg·L^-1,与其他浓度壳寡糖处理组相比,该浓度壳寡糖促进了子叶愈伤组织的形成,使出愈率达到92％。此外,该浓度壳寡糖能提高子叶的芽再生频率,使再生率达到80％,同时再生芽长度、叶绿素含量及外植体总鲜重达到最大,均显著高于对照组。然而,壳寡糖对再生芽生根有抑制作用,形成的不定根数目、平均根长和最长根长度均小于对照组。     

不同氮素结合形式对结球生菜植株再生的影响

结球生菜(Lactuca sativa var.capitata)是一种世界性蔬菜,其食味与营养均佳,深受人们的喜爱。但它的留种播期与蔬用播期不一致,加之在南方栽培种株易烂根死亡,给其繁殖与生产带来了一定困难。为了寻找解决这些问题的新途径,作者曾进行了它的组织培养与器官发生的研究。现在此基础上进一步专门研究了在组织培养条件下不同氮素结合形式对该     

壳聚糖对不结球白菜营养品质和某些农艺性状的影响

0.4～0.6mg·g~(-1)(种子)和20～40μg·mL~(-1)浓度范围内壳聚糖拌种及喷叶处理都能提高不结球白菜叶片中可溶性蛋白、总氨基酸、可溶性总糖、维生素C以及总叶绿素含量,降低粗纤维含量,从而改善不结球白菜的营养品质,同时不结球白菜的单株总鲜重、株高、最大叶面积、根鲜重以及根长也有增加。     

不结球白菜分子遗传图谱的构建及分析

以不结球白菜'常州乌塌菜'和'二青'杂交产生的181株F2代分离材料为作图群体,利用ISSR、RAPD、SSR、SRAP等分子标记来构建不结球白菜分子遗传连锁图谱.结果表明,构建的连锁图谱包含11个连锁群,由139个标记组成,其中包括4个ISSR标记、19个RAPD标记、22个SSR标记和94个SRAP标记.其中偏分离标记37个,占26.6%;每条连锁群上的标记数在4～33个之间,连锁群长度在61～164 cM的范围,覆盖基因组950 cM,总平均图距6.8 cM.     

不结球白菜种质资源形态性状多样性分析

分析了125份不结球白菜的形态多样性.结果表明,我国不结球白菜具有丰富的形态多样性,以江苏的平均多样指数最高,达0.972,性状中以叶柄长的变异系数最大,达59.77%.通过多变量的主成分分析,第一主成分和第二主成分代表了不结球白菜形态多样性的48.4%.通过系统聚类,把125份不结球白菜种质资源聚成6类,普通白菜不同程度地分别与塌菜、菜心、分蘖菜和薹菜聚在一起,说明普通白菜与其它种类间存在一定的亲缘关系.     

不结球白菜BcTuRsO基因的克隆及表达

从不结球白菜抗病品种短白梗中克隆到一个抗芜菁花叶病毒(TuMV)相关基因,命名为BcTuRsO(Gen-Bank登录号FJ600376).该基因核苷酸序列全长650 bp,编码194个氨基酸,与已克隆的抗病基因有不同程度的同源性.系统进化树分析表明,该基因在不同物种之间具有保守性.基因组DNA杂交表明,BcTuRsO基因可能以单拷贝形式存在,其表达是组成型的.实时定量PCR检测表明,芜菁花叶病毒能够诱导不结球白菜BcTuRsO基因的转录表达,其在不结球白菜叶片中的表达特征说明它可能参与寄主对病毒的抗性.     

壳聚糖调节不结球白菜叶片GDH和GS基因的差异表达研究

应用半定量RT—PCR技术检测了壳聚糖对不结球白菜叶片GDH和GS的mRNA水平的影响。结果表明GDHmRNA的变化与GDH活性的变化趋势基本一致,而GSmRNA的量基本恒定,并未与GS的活性变化相符合。即壳聚糖可能在转录水平上对氨同化关键酶GDH进行调控;而对GS的调控则不在转录水平上,有可能发生在翻译水平上。     

不结球白菜种质资源对TuMV的抗性鉴定与评价

分别利用苗期人工接种鉴定及ELISA检测方法,对127份不结球白菜种质资源进行芜菁花叶病毒(TuMV)的抗性鉴定。结果显示,苗期人工接种鉴定的病情指数(DI)分布在3.55~95.68之间,不同种质间表现出较大的抗性差异。不同抗性级别的次数分布图基本符合正态分布,略向感病区域偏离。基于病情指数的聚类分析结果与抗病性分级基本一致。通过苗期鉴定共筛选获得高抗TuMV的不结球白菜种质6份,抗病种质13份,其主要农艺性状表现出一定的多样性。其中叶面皱缩和具有刺毛的抗病材料所占比例较高,可能与TuMV抗性存在一定的相关性。ELISA检测结果显示,117份供试种质的P/N值分布在3.10~25.37之间,不同种质间表现出病毒含量的差异,但与DI值未呈现明显相关性,可作为抗病材料筛选的辅助指标。     

不同倍性不结球白菜营养品质及同工酶比较研究

对二倍体、同源四倍体不结球白菜主要营养品质及叶片和花蕾EST、POD、SOD同工酶谱带进行研究.结果表明:(1)同源四倍体可溶性糖、可溶性蛋白、维生素C、有机酸、干物质和纤维素含量分别比二倍体增加16.65%、14.08%、18.18%、15.81%、15.82%和60.00%,差异极显著.(2)叶片中,二倍体EST谱带比同源四倍体多1条;花蕾中二倍体比四倍体多2条谱带;而POD和SOD在谱带条数上没有差异,只是四倍体的谱带亮度较二倍体强,表明其表达量较高,说明它们的酶种类相似但剂量不同.     

美味猕猴桃原生质体再生植株细胞遗传学研究 Ⅰ．体细胞染色体数目的变化

研究了美味猕猴桃叶愈伤组织原生质体再生植株和母株（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｄｅｌｉｃｉｏｓａ ｌｉｎｅＮｏ．２６）茎尖体细胞染色体数目。结果表明：母株２ｎ＝６ｘ＝１７４．所测２９株再生植株的茎尖体细胞染色体数目差异显著。多为非整位体类型,占所测植株的７２．４％左右;体细胞染色体数目介于１４２－３１０条之间,其中２ｎ＝６ｘ＝１７４约占２０．７％,少于１７４条染色体的植株约占３１．０％,超过１７４条染色体     

不结球白菜自交不亲和S单元型的鉴定研究

依据甘蓝SRK基因保守序列设计SRK特异引物并进行验证,通过PCR-RFLP法分析16份不结球白菜自交系材料的SRK基因的多态性,根据其差异鉴定不结球白菜S单元型及自交不亲和性.结果表明:16个不结球白菜自交系SRK基因共产生6种不同的带型,其中有1个是强自交不亲和系,4个是弱自交不亲和系,且与田间测定的亲和指数相符,说明利用SRK基因的多态性鉴定不结球白菜纯合自交系的自交不亲和性和S单元型是可行的.同时对部分材料的SRK基因的核苷酸序列进行分析验证,表明相同类型SRK基因序列一致性较高,且SRK基因存在明显的单核苷酸多态性,为进一步自交不亲和性的研究奠定了基础.