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相似文献
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1.
从端粒酶活性呈性阳的水生细胞株人肺SCP-A-1中分离了总RNA,以此为模板,结合RT-PCR技术和长模板PCR技术,用hTERT基因特异性引物扩增到一长约2.2kb的cDNA片段。将该片纯化后克隆到通用测序本T-easy vector上得到重组质粒。用测引物SP6和T7对该片段进行部分双向测序。经序列分析和同源比较推测该片段包含了hTERT基因的第3内含子。该结果提示了RT-PCR技术和长模板P  相似文献   

2.
以往研究表明, 用羟基脲诱导人红白血病细胞(HELcell)后, 能促进成年型β珠蛋白基因表达, 使HEL细胞趋向终末分化。本文试图进一步揭示羟基脲诱导HEL细胞分化的分子机制。GMSA 与Western 印迹分析结果显示, 随着羟基脲诱导HEL 细胞时间延长, 细胞核内的GATA1 转录因子的含量增加, 它与β珠蛋白基因5'旁侧DNA 序列内一个正调控序列(PCR:- 223~- 194 bp) 以及人工合成的GATADNA 序列结合能力增加; 与此相反,细胞核内的GATA2 转录因子的含量下降, 它与GATADNA 序列结合能力也下降。此外, 还检测到在羟基脲诱导HEL细胞后, 核内与YY1 类似的一个转录因子含量也迅速下降。实验结果表明GATA2 可能在红系细胞早期分化中起重要作用, 而GATA1 则在红系细胞终末分化过程中起调控作用。推测类似YY1 的一个转录因子可能具有抑制HEL细胞趋向终末分化的功能  相似文献   

3.
组蛋白与hAMFR基因启动子的结合对体外转录活性的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
曾庆华  吕延成 《遗传学报》1999,26(5):501-505
采用从鸡血红细胞中分离纯化的组蛋白,从HeLa细胞核中萃取的含有RNA聚合酶Ⅱ和多种Ⅱ类基因转录因子的可溶性抽提物,以及从非洲爪蟾卵细胞核中撮以的萃取物热处理物上清用于核小体构建,以含有人自泌移动因子受体基因启动子序列的DNA片段为模板进行体外转录实验,结果表明,组蛋白和转录因子在hAMFR基因启动子序列上的竞争性结合对转录活性具有重要的影响作用,在启动子区域预先构建的核小体能够抑制转录活性;  相似文献   

4.
hTNFα—hTGF3融合蛋白的基因构建及表达   总被引:4,自引:0,他引:4  
采用基因工程技术,将能与表皮生长因子受体(EGFR)特异结合的人转化生长因子(hTGFα)第三环区17肽通过一个柔性手臂间人肿瘤坏死因子羧端连接,成功hTNFα-hTGF3融合蛋白基因。该融合蛋白基因在PL启动子控制的温控表达载体pSB92中,于42℃诱导表达,可得50%-60%的表达产物,95%为包含体。  相似文献   

5.
应用竞争性逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定了10例急性粒细胞白血病M_2型(AML)患者外周血网织红细胞中α/β珠蛋白mRNA的相对含量,其中8例表现不同程度增高,2例正常,均值为1.513±0.182(±s),与正常对照组(1.24±0.083)进行t检验比较,有非常显著差异(P<0.01).此外,PCR-SSCP分析显示AML患者β珠蛋白基因启动子区序列(5'端-135至+122位核苷酸)无明显异常。说明AML患者珠蛋白基因表达失衡系由于转录异常,很可能系AML的发生对α/β珠蛋白基因的平衡表达产生了某种影响,从而表现为获得性β地中海贫血特征。实验结果为进一步探讨白血病的发病机理及其α/β珠蛋白基因表达失衡的机制奠定了基础。  相似文献   

6.
细胞因了IL-1β可以诱导SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中APP基因的转录,为了研究APP基因启动子区的IL-1β反应元件,用含不同长度APP启动子片段的报告基因载体,瞬时转染SH-SY5细胞,发现APP启动子在SH-SY5Y细胞中有较强活性,其中-488到303区为IL-1β诱导APP转录活性增加所必需,这个区域包括1个AP1结合位眯和1个HSE元件。  相似文献   

7.
通过DNA序列测定在一名46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区发现了一个新的突变:nt.-81G→A.该突变不见于正常男性,因此不是DNA多态性.为了检测这一点突变对SRY基因表达功能的影响,构建了分别由正常或突变的人SRY基因启动子区片段调控氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达的两个质粒,寡核苷酸探针杂交证实该启动子片段正常或携带有G→A突变.这两个质粒分别与pSV-β-半乳糖苷酶内对照质粒共转染HeLa细胞后,瞬间表达分析显示这一突变对CAT酶活性水平无显著影响(0.50>P>0.20).上述正常和突变的SRY基因启动子片段与K562细胞核抽提物的凝胶阻滞实验也表明,突变对K562细胞核蛋白与SRY基因启动子区的结合影响不大.研究SRY基因的表达调控对阐明人的性别决定机制及性反转的病理机制具有重要意义  相似文献   

8.
含人IL—2基因的真核表达质粒的构建及其在真核细胞…   总被引:4,自引:0,他引:4  
本工作用PCR由人的外周血单个核细胞cDNA中获取了带有信号肽的IL-2全cDNA克隆,并构建了不同的表达质粒:带有SV40启动子的以质粒为载体的pSVK3-IL2和以逆转录病毒为载体的pLN-IL2系列?pLNCIL2,pLNSIL2,pLIL2SN,它们分别带有CMV、SV40和LTR启动子。用DEAE-Dextran法、SA-脂质体法和电穿孔等方法分别将这些IL-2表达质粒转染入COS-7及  相似文献   

9.
为了探讨不同种属血管细胞中iNOS基因诱导表达的差异及其分子机制,采用North-ern印迹、电泳迁移率改变分析(EMSA)和细胞转染实验对iNOS基因在人、牛、大鼠血管内皮细胞(EC)和兔、大鼠平滑肌细胞(VSMC)中的诱导表达和转录调控机制进行了研究.结果显示,IL-1β可诱导人、大鼠的EC和大鼠的VSMC表达iNOS,但对兔VSMC和牛EC无诱导作用.在IL-1β+TNF-α+LPS作用下,人和大鼠血管细胞iNOS的表达活性显著高于牛和兔,同一种属动物的VSMC比EC更易被诱导活化.用含有大鼠iNOS基因上游-1037~-438片段的报告基因转染这些细胞,经细胞因子和LPS处理后,被转染细胞的CAT活性变化与细胞的iNOS表达活性相一致.上述结果表明,iNOS表达调节具有种属特异性和细胞特异性.EMSA证实在不同种属的EC和VSMC中,与iNOS基因表达调控区(-1037~-787)相互作用的蛋白因子是不均一的.提示不同种属血管细胞内特异转录因子的种类及浓度不同和(或)反式因子与顺式元件相互作用的方式不同可能是这种差异的分子基础.  相似文献   

10.
HIV-1外膜(env)基因在重组痘苗病毒中的高效表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
应用重组痘苗病毒作载体,在ATI、P7.5突变型早期启动子控制下,高效表达了(经定点突变去除一处早期终止信号的)HIV-1env基因。经Westernblot证明,晚期启动子活性强的pSFJ2-38能更高效地表达env基因。经Lentil-Lectin提取以及SDS-PAGE后的激光扫描测定结果,在107个感染细胞中可产生50-70μg的Env蛋白。  相似文献   

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为获得端粒酶阳性肿瘤细胞特异表达载体用于癌症的基因治疗 ,克隆并构建了人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因启动子调控的萤光素酶报告载体 .用脂质体转染法将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞 ,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性 .hTERT启动子在所检测的 4种端粒酶阳性的肿瘤细胞中具有明显的转录活性 ,平均为阳性对照的 4 4 3% ;而在端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞中则无明显的转录活性 .提示hTRET启动子的转录活性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中明显上调 ,由hTERT启动子构建的载体可能是一种新颖和有前景的肿瘤细胞特异性表达的基因治疗载体  相似文献   

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