寄生昆虫体外培养研究进展

<正> 随着害虫生物防治的发展,寄生昆虫是可供利用的重要昆虫天敌资源之一。如何人工体外培养大量寄生昆虫的问题,日益受到人们的重视,并且,近年取得了令人鼓舞的进展。 (一)体外培养研究中的寄生昆虫 被进行体外培育研究的寄生昆虫种类日见增多,从国外(加拿大、美国、法国等)到国内,至今报道用人     

额尔齐斯河几种鱼类寄生三代虫种类鉴定及系统发育

对采自额尔齐斯河的银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)、东方欧鳊(Abramis brama orientalis Berg)、黏鲈(Gymnocephalus cernua Linnaeus)、金鳟(Oncorhynchus mykiss Walbaum)感染的三代虫(Gyrodactylus sp.)进行了研究, 通过几丁质结构的形态测量与比较, 初步鉴定寄生于银鲫的为细锚三代(G. sprostonae), 寄生东方欧鳊的为秀丽三代虫(G. elegans), 寄生黏鲈的为普氏三代虫(G. prostate), 寄生金鳟的为细鳞鲑三代虫(G. brachymystacis)。同时将测定的三代虫的ITS序列, 与GenBank上三代虫序列进行比对分析, 发现上述4种三代虫分别与细锚三代虫、秀丽三代虫、细鳞鲑三代虫、普氏三代虫的ITS同源性都在99.3%以上, 进一步验证了形态学的鉴定结果。系统发育分析显示细鳞鲑三代虫和细锚三代虫位于G. (Limnonephrotus)亚属的一枝, 秀丽三代虫和普氏三代虫位于G. (Gyrodactylus)亚属的一枝, 而此两亚属亲缘关系较远。     

东北边境地区鼠体外寄生蜱螨的种类组成研究

采用笼日法捕鼠,收集鼠体外寄生蜱螨,研究我国东北边境地区鼠体外寄生蜱、革螨和恙螨的种类组成.结果表明,在东北边境6市县9种鼠体采获寄生蜱螨16 565只,计16属39种,其中蜱类3属4种,革螨8属20种,恙螨5属15种.优势种群:全沟硬蜱(75.6%);耶氏历螨(25.5%),厩真历螨(21.1%);波氏新恙螨(35.0%),高丽新恙螨(22.7%).不同鼠体寄生蜱、革螨、恙螨的主要种类组成有所不同.     

鳙鳃上台湾棘带吸虫囊蚴的感染

从1993年8月到1994年11月,对感染台湾棘带吸虫囊蚴的鳙鳃丝、鳃耙进行了为期16个月的调查研究表明;鳃丝、鳃耙的感染率范围为0-100%(83.33±25.47%)、(61.13±44.45%),感染强度范围分别为0-109.15(54.89±34.09)、0-125.57(41.18±49.34),囊蚴的平均密度范围分别为0-97.76(46.94±26.25),0-125.57(40.61±49.71);当鳙体长小于90mm时,鳃丝、鳃耙的感染率、感染强度、囊蚴的平均密度随着其体长的增大而增长;当体长大于90mm时,三项指标随着其体长的增大具有减小的趋势,其中鳃耙的变化规律明显;当体长大于141.7mm时,鳃耙的感染率、感染强度、囊蚴的平均密度都为0;随着鳙的生长,鳃丝囊蚴所占的比例逐渐增大,从0增加到100%,而鳃耙囊蚴所占的比例逐渐减小,从100%下降到0.       

东方杯叶吸虫囊蚴的体外培养和发育的研究

本文用含小鸡血清的培养基将东方杯叶吸虫脱囊后尾蚴体外培养至怀卵成虫,但虫卵不正常。添加小鸡小肠粘膜浸出液能明显提高怀卵率和产卵量,但不影响怀卵量,41℃比37℃培养结果更好;后尾蚴的发育经历了精巢、阴茎囊、卵巢和卵黄腺的形成及怀卵和产卵的过程,体外培养中虫体发育延缓。     

深圳郊区寄生小菜蛾的赤眼蜂种类及消长动态

在深圳郊区龙岗示范生态农场,寄生于小菜蛾的赤眼蜂为拟澳洲赤眼蜂Trichogrammaconfusum和赤眼蜂一新种Trichogramma sp.,其中拟澳洲赤眼蜂稍占优势.其寄生率受季节和化学农药的影响,全年中以秋季为最高,在收获期的菜芯地可高达30-35%;夏季降雨是寄生率低于5%的主要原因;在经常施用化学农药的菜地,寄生率始终维持在10%以下.小菜蛾卵不孵率随寄生率增加而升高,使小菜蛾卵总死亡率增加.     

寄生玉米螟卵赤眼蜂种类的鉴别

近几年北方玉米田广泛利用赤眼蜂防治玉米螟,地区间相互引进蜂种,其中存在着选用合宜的蜂种以获取较好的防治效果问题。1974年我们在开门办学中,深入农村,调查了天津自然界寄生玉米螟卵的赤眼蜂种类,同时鉴定了自河南省开封县、兰考县引入天津防治玉米螟的赤眼蜂,以及河北省博野县、唐山市郊区为防冶玉米螟繁殖的赤眼蜂。我们观察到天津自     

饲养层种类及密度对体外培养兔原始生殖细胞的影响

该研究以14~18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。     

天花粉蛋白对体外培养不同种类细胞的作用

本文进行了天花粉蛋白对离体培养的葡萄胎细胞、早孕蜕膜细胞、人胎儿肾皮质部细胞、HeLa细胞和鼻咽癌上皮细胞的损伤作用的比较研究。为了探索天花粉蛋白选择损伤细胞是否存在专一结合细胞的可能性,又以不敏感的蜕膜细胞为材料,应用辣根过氧化物酶标记技术进行了天花粉蛋白与细胞结合和进入细胞内定位的实验。此外,并以肝癌细胞为材料研究了对细胞增殖率的影响。结果表明葡萄胎合体滋胚层细胞和胎盘合体滋胚层细胞一样都是最敏感的细胞,经1微克天花粉蛋白处理即出现形态上损伤,至50微克则大多数细胞呈现不可逆的退化损伤,而其它类型的细胞则表现出有相当大的抗性。过氧化物酶标记追踪天花粉蛋白在细胞内分布的结果表明天花粉蛋白与蜕膜细胞有一定的亲和力,提示天花粉蛋白似乎不存在严格的细胞结合专一性;而天花粉蛋白在细胞内的分布一般仅限于细胞质,这一现象似乎提示细胞质区可能就是天花粉蛋白直接作用的靶的范围。细胞增殖率的实验结果表明50微克以上的药物剂量对肝癌细胞增殖率有一定的抑制作用,剂量增加抑制作用也增加。但是,经过一定的修复期以后,细胞增殖率又可得到完全恢复,反映了对细胞生长抑制的可逆作用。上述实验结果进一步加强了天花粉蛋白对滋胚层细胞具有一定细胞损伤专一性的结论。本文并对细胞损伤专一性问题进行了讨论。     

六盘山自然保护区啮齿动物及体外寄生蚤调查

1984年4至8月和1986年9至11月,在六盘山自然保护区分别选了老龙潭、西峡、秋千架、六盘沟4个点进行了啮齿动物及其体外寄生蚤类的调查,共发现啮齿动物16种,其中4种为该地区新记录种;蚤类24种,6种为该地区新记录种。有“△”者为该地区新纪录种,“△△”为首次记述的新种,“()”为其寄主。一、啮齿动物大林姬鼠Apodemus peninsulae黑线姬鼠A.agrarius小林姬鼠A.draco灰仓鼠Cric-etus migratorius黑线仓鼠C.barabensis社鼠Rattus niviventer岩松鼠Sciurotamias davidianus△达乌尔鼠兔Ochotona daurica黑腹绒鼠Eothenomys melanogaster△…     

暗黑鳃金龟甲幼虫肠道细菌分离及鉴定

目的从微生态学角度研究暗黑鳃金龟甲幼虫营养生理活动,探讨其肠道菌群的构成,为其资源开发及生物防治提供理论依据。方法按传统分离方法,从暗黑鳃金龟甲幼虫肠道环境中分离纯化获得10个细菌菌株,对其菌体形态、染色反应、培养性状、生理生化反应进行了系统研究。结果研究结果表明,上述10个细菌菌株分别属于鲁氏耶尔森菌（Yersinia．ruckeri）、侧胞芽胞杆菌（Bacilluslaterosporus）、坚强芽胞杆菌（Bacillus．firmus）、放线杆菌属（Actinobacillus）、飞虫杀雄菌（Arsenophonusllasoniae）、不动杆菌属（Acinetobacter）、气单胞菌Aeromonas）、沙门菌属（Sal—moneUa）、短芽胞杆菌（Bacillusbrevis）、变形菌属（Proteus）。结论通过对暗黑鳃金龟甲幼虫肠道细菌的鉴定,其肠道细菌在培养性状、生理性状、生理生化测定等方面存在较多差异。     

台湾棘带吸虫囊蚴在鳙鳃丝、鳃耙上的分布

通过对鳙为期16个月的定期取样研究发现,1993年8月到1994年3月,台湾棘带吸虫的囊蚴主要分布在鳃耙上,1994年4月至11月,囊蚴则主要分布在鳃丝上;当鳙体长范围为30-90mm时,囊蚴主要分布在鳃耙上,当体长大于90mm时,囊蚴主要分布在鳃丝上,随着鳙的生长,鳃丝囊蚴所占的比例逐渐增大,从0增加到100%,而鳃耙囊蚴所占的比例逐渐减小,从100%下降到0;不同月份、不同体长组鳙其不同组鳃丝囊蚴分布规律相同,第2组鳃丝囊蚴分布较多,第3、第1、第4组鳃丝囊蚴分布依次减少：其不同组鳃耙囊蚴分布规律也相同,总是第1组鳃耙囊蚴分布较多,其余依次为第2、第3、第4组鳃耙;囊蚴在鳙鳃丝和鳃耙上的分布都呈聚集分布,且聚集的强度随囊蚴内种群密度的增高而增高。     

对鲇鱼鳃部寄生的固着鳋的生态研究

作者研究了江西江口水库鲇鳃部寄生固着鳋的种群生态学及其对寄生部位的选择性。固着鳋的感染率和丰盛度表现出明显的季节变化,以夏初最高;其繁殖也具有季节性,怀卵个体的比例同样有夏初最高。固着鳋对寄生部位的选择性似乎与种群的数量有关,当种群数量高时更多的固着鳋分布于中间的鳃片上,对多种寄生虫同时寄生条件下固着鳋寄生部位选择性的研究,将有助于进一步了解固着鳋和寄生鲇鳃部其它种类的寄生虫之间的关系。     

小鼠脂肪来源干细胞体外培养、诱导分化及鉴定

目的:观察C57小鼠ASCs (Adipose-derived stem cells,ASCs)体外培养的生物学特性,探讨其成脂成骨诱导分化能力.方法:无菌条件下切取C57小鼠腹股沟处脂肪组织,0.25％Ⅰ型胶原酶消化,分离培养ASCs,37℃,5％CO2饱和湿度孵箱培养,细胞融合达80％时消化传代.观察其细胞形态;MTT比色法测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞表面标志物;取第2代细胞行成骨及成脂诱导培养,3周后分别茜素红染色和油红O染色鉴定.结果:从C57小鼠脂肪组织中分离获取的ASCs呈长梭形,成纤维细胞样.细胞生长曲线呈“S”型,证明ASCs具有很强的增殖能力;流式细胞术分析结果:CD29、CD44、CD90阳性表达,CD31、CD34、CD45阴性表达;成骨诱导后茜素红染色阳性,成脂诱导后油红O染色阳性.结论:本试验分离培养的细胞为ASCs,具有确切分化能力.     

小鼠骨髓源树突状细胞体外诱导培养及初步鉴定

用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重组小鼠白细胞介素4（rmIL-4）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,进行形态学变化观察,分析细胞表面分子,刺激T细胞增殖,探讨小鼠骨髓源树突状细胞（BMDC）体外诱导培养并进行初步鉴定。体外培养9d后BMDC可达80%以上,光镜下可见典型的树突状细胞形态。清楚表达成熟期主要表面标志物,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。获得了较高纯度的BMDC,避免了使用传统磁珠分离方法所带来的成本高,操作复杂,产出率低的弊端,为研究BMDC功能以及运用开展下游实验提供材料。     

大鼠前列腺上皮细胞培养鉴定及体外炎症模型建立初探

目的:在体外培养大鼠前列腺上皮细胞,建立脂多糖和蛇毒诱导的大鼠前列腺上皮细胞的体外炎症模型。方法:采用WAJC404培养基在体外培养大鼠的前列腺上皮细胞,通过免疫细胞化学方法对其进行鉴定,加入脂多糖和蛇毒用以建立体外的前列腺炎症模型。结果:在体外培养了大鼠的前列腺上皮细胞,泛细胞角蛋白染色阳性,脂多糖和蛇毒可损伤体外培养的前列腺上皮细胞,但不影响体外培养的前列腺上皮细胞培养液中细胞因子TNF-α和IL-1β及免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的含量。结论:在体外培养了大鼠的前列腺上皮细胞,对大鼠前列腺体外炎症模型的建立进行了初步探索。     

SD大鼠骨髓间充质干细胞体外原代培养及鉴定

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养以及扩增的方法并鉴定。方法:取100g左右雄性SD大鼠后肢股骨、胫骨骨髓,原代全骨髓培养法,多次传代纯化,体外扩增后,观察细胞形态,并免疫组化及流式细胞仪检测cd34、cd90、cd105细胞因子,鉴定是否为BMSCs。结果:所获取的细胞呈长梭形,呈现特征性的漩涡状生长,CD34阴性,CD90、CD105阳性。结论:利用全骨髓培养法成功分离骨髓间充质干细胞,10代以内的细胞纯度高,活性好。全骨髓培养较为简便、易行。     

SD大鼠骨髓间充质干细胞体外原代培养及鉴定

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外分离培养以及扩增的方法并鉴定。方法：取100g左右雄性SD大鼠后肢股骨、胫骨骨髓,原代全骨髓培养法,多次传代纯化,体外扩增后,观察细胞形态,并免疫组化及流式细胞仪检测cd34、cd90、cd105细胞因子,鉴定是否为BMSCs。结果：所获取的细胞呈长梭形,呈现特征性的漩涡状生长,CD34阴性,CD90、CD105阳性。结论：利用全骨髓培养法成功分离骨髓间充质干细胞,10代以内的细胞纯度高,活性好。全骨髓培养较为简便、易行。     

阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞体外分离培养及鉴定

探讨阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞(Arbas cashmere goat bone marrow-derived mesenchymal stem cells,g BMMSCs)体外分离培养,并对其生物学特性进行系统的鉴定,进一步深入分析体外诱导时多向分化相关基因动态表达情况。结果显示,原代培养的g BM-MSCs呈梭形或纺锤形、放射状排列的细胞集落,能够连续稳定传代至15代以上;免疫荧光及流式细胞术检测显示,g BM-MSCs表达间质系特异性表面标志物,如:CD13、CD29、CD44、CD106、CD90及CD166,不表达造血干细胞表面标志物CD45及CD34;体外诱导实验证实该细胞具有多向分化潜能,能够向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化;荧光定量PCR实验结果显示,g BM-MSCs多向分化相关基因的表达水平随着诱导天数的增加呈上升趋势。实验结果证实阿尔巴斯绒山羊骨髓中分离培养的细胞具备g BM-MSCs的生物学特性。     

不同龄期华支睾吸虫囊蚴对猫寄生力的分析

采用捕获于华支睾吸虫病流行区的麦穗鱼,隔离饲养,用不同日龄囊蚴感染猫,感染后30d做解剖,收集成虫做统计分析的方法,进行了不同日龄寄生力分析。结果表明,0、379、762、1038日龄囊蚴感染的获虫率分别为43．07％、85．45％、4．51％、9．80％。结合国内资料,建立了计算华支睾吸虫囊蚴对猫寄生力的数学模型。