人淋巴细胞经冻存复苏后DNA,RNA和蛋白质的合成代谢

本实验采用同位素掺入和光镜放射自显影技术,研究新鲜未经冻存、冻存1年和冷冻杀伤的人外周血淋巴细胞,对3~H-TdR、3~H-UR和3~H-亮氨酸的掺入量进行测量。并观察其掺入部位,以反映淋巴细胞经过冻存不同时间后,它们的DNA、RNA和蛋白质的合成强度和合成部位。实验结果表明,冻存1年的淋巴细胞,复苏后的回收率和存活率均在90％以上。PHA刺激后的3~H-TdR、3~H-UR和3~H-亮氨酸的掺入量,虽比冻存前降低,但仍相当活跃,保持较高水平。3~H-TdR集中在细胞核,3~H-UR和3~H-亮氨酸除分布在细胞质外,在核内也有一定数量。表明在合适的冻存条件下,长期深低温冻存的淋巴细胞,能保持较高的DNA、RNA和蛋白质合成代谢水平。     

人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能

研究人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能。应用包含10%二甲基亚砜、90%小牛血清的冻存液冻存6个T细胞系(5个CD4 T细胞系,1个CD8 T细胞系)细胞,液氮中冻存32~54个月后复苏,台盼蓝染色法检测复苏后T细胞系细胞的存活率,用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测复苏后T细胞系细胞的功能。结果显示,6个T细胞系细胞液氮冻存解冻后细胞的存活率为24.7%~93.5%,过夜培养后细胞的存活率为2.5%~72.2%。CD8 T细胞系细胞的存活率高于CD4 T细胞系细胞。6个复苏后的T细胞系细胞在PHA诱导后均能分泌IFN-γ。人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存复苏后能够保持较好的存活率和功能。     

冻存前后人脐带间充质干细胞对T和B淋巴细胞免疫抑制能力的差异比较

目的 探讨冻存前和复苏后人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对T和B淋巴细胞免疫抑制能力的差异.方法 分离健康人外周血单个核细胞,使用Anti-CD3和Anti-CD28单克隆抗体体外激活T淋巴细胞,使用ODN2395,hCD40L,羊抗人IgM抗体和白介素2体外刺激经过分选的B淋巴细胞,通过冻存前后hUCMSCs进行...     

冻存后脐血NK细胞的培养及CAR-NK的功能初探

该研究优化冻存后脐血NK细胞的培养条件,构建了靶向CD19的CAR-NK细胞,并探究了CD19-CAR-NK对CD19⁺ B细胞淋巴瘤的杀伤作用。首先将冻存的脐血单个核细胞复苏并静置18 h,通过CD56磁珠纯化NK细胞,使其在CBMC中的比例从13.8%提高至96.6%。然后比较使用不同细胞因子及其组合对NK细胞增殖、分化、凋亡及功能的影响,发现IL-2和IL-15均能活化NK细胞,但IL-2培养时NK细胞增殖优于IL-15(P<0.05),IL-2+15下CD56dim NK亚群占比[(74.33±5.03)%]最多,凋亡[(4.6±0.14)%]最少,累计增殖(62.67±3.21)倍,显著优于其他细胞因子组合(P<0.05)。该研究使用PDK1抑制剂BX795提高CAR-19慢病毒载体对NK细胞的转导效率,发现6 μmol/L BX795可将病毒转导效率提高3.6倍,且在此浓度下病毒转导效率[(36.4±1.91)%]最大。最后在体外验证CD19-CAR-NK对CD19⁺肿瘤细胞的杀伤能力,发现CD19-CAR-NK可增强...     

人外周血淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

应用电镜酶细胞化学方法研究了人外周血淋巴细胞ＡＴＰ酶、Ｇ６Ｐ酶、５′ＮＤ酶的超微结构定位与活性。结果：１ＡＴＰ酶主要定位在淋巴细胞膜下方,在内质网及线粒体等膜相结构也见到此酶的分布。Ｇ６Ｐ酶主要定位在内质网、线粒体等膜相结构。５′ＮＤ酶主要定位在细胞膜外表面。三种酶定位准确,颗粒清晰。２此结果与我们对人体淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位结果相同。结果提示应用电镜酶细胞化学方法可以检测人外周血淋巴细胞酶活性变化,对于判定免疫细胞功能状态,具有一定意义。     

两种不同冻存保护剂对细胞冻存效果的比较

为比较甘油和二甲基亚砜这两种细胞冷冻保护剂对同一种细胞冷冻保存的效果,通过甘油和二甲基亚砜分别与血清、基础培养基的不同配比,进而比较二者对肿瘤细胞的冻存效果,并且分别探索出二者哪种用于细胞冻存效果更好和各自最佳冻存效果的比例。本文研究成果将为细胞冻存提供更明确的冻存方法。     

小鼠精原干细胞冻存后体外培养

目的:研究冷冻后精原干细胞体外培养时的生物学行为.方法:体外培养冻存后的6日龄小鼠生精上皮细胞,并利用碱性磷酸酶活性及细胞形态,检测其中的精原干细胞.结果:当有BRL饲养层时,冻存后的精原细胞在贴壁、存活及增殖等生物学行为方面与新分离的精原细胞均无明显不同.培养25～30 d,培养体系中仍保留有少量精原干细胞及其最初几代分化细胞.结论:冷冻保存后的精原干细胞能在BRL细胞饲养层上正常地贴壁、生长和分裂.     

冻存密度对外周血单个核细胞冻存效果的影响

探讨冻存密度对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)冻存效果的影响。设定新鲜PBMC组(F组)及3个PBMC冻存密度组即2.0×10~7/mL(A组),4.0×10~7/mL(B组),6.0×10~7/mL(C组)。通过对冻存前后的PBMC活率及复苏后多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer,CIK)的扩增倍数、淋巴细胞亚群、体外杀伤效率进行比较,验证其冻存效果。结果显示,冻存前F组与冻存后A组、B组、C组的细胞活率分别为(96.0±0.3)%、(95.6±0.4)%、(94.7±0.2)%和(94.9±0.4)%,B组与C组显著低于A组,P0.05;细胞扩增14 d后,F组与A组、B组、C组细胞扩增倍数分别为(156.4±18.2)倍、(160.2±28.4)倍、(126.1±19.8)倍和(110.4±11.3)倍,B组与C组显著低于F组(P0.05);PBMC冻存前复苏后淋巴细胞亚群结果无显著差异。与F组相比,A组、B组、C组细胞扩增14 d后,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD56+、CD3+CD56+淋巴细胞亚群无显著差异(P0.05),体外杀伤效率无显著差异(P0.05)。过高的冻存密度会影响PBMC冻存效果而间接影响细胞的复苏应用,而过低的冻存密度则增加冻存体积而大大提高冻存成本,因此,选择合适的细胞冻存密度是细胞库或细胞银行必须要考虑的问题。     

胚脑神经元冻存和培养的研究进展

影响胚脑神经元冻存效果的关键因素有:冷冻保护剂及其浓度、降温和复温速率、储存温度等。以10％DMSO作为冷冻保护剂,以接近1—2℃/分的速率降温,37℃水浴中快速复苏,储存在液氮中,能较好的保证冻存神经元的存活率。冻存的胚脑神经元,培养后继续存活的细胞数比未经冻存的明显减少,但生长、分化情况却无显著差别,仍保持了神经元的形态学特征和特异性酶的表达及递质合成的功能,并能在宿主脑内继续生长、发育、发生整合。     

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制作技术

从肘静脉采血于含有肝素的一次性注射器中,采用RPMI1640全培养基进行体外淋巴细胞培养。通过对采血后细胞培养时间、秋水仙素浓度及加入时间、低渗时间及培养温度等条件的模索．建立了较成熟的淋巴细胞体外培养方法及染色体制作技术。     

细胞的冻存与复苏

1986年11月美国标准培养物保藏中心(ATCC)在上海举办了细胞系质量控制方法学习班,现将有关内容整理介绍如下,供大家参考。 冷冻时,细胞受损伤的程度因冷却速度的不同而异。快速冷冻,细胞内外液一起冻,细胞不失水;慢冻则细胞失水。 冷冻保护剂能保护细胞存活。加10％保护剂,细胞几乎100％存活;不加保护剂细胞几乎都不能存活。     

低浓度二甲基亚砜保护SSMC7721细胞冻存后活力

目的研究二甲基亚砜作为冻存保护剂对SSMC7721细胞冻存复苏后细胞生长相对活力和凋亡的影响。方法选择传代培养处于对数生长期SSMC7721细胞,体积分数2%、5%、10%和20%DMSO分别冻存10d、30d后复苏,采用倒置显微镜形态学观察、MTT法测定细胞相对活力、流式细胞仪检测细胞凋亡,综合分析不同浓度DMSO冻存不同时间复苏对SSMC7721的影响。结果各浓度DMSO冻存SSMC7721对细胞生长和凋亡均有影响。20%DMSO对SSMC7721细胞影响明显,细胞培养不易贴壁逐渐脱落,浓度低于5%时,细胞生长状态良好;10%和20%DMSO细胞相对活力急剧下降;随着DMSO浓度增加和冻存时间延长,细胞凋亡率明显上升,存活率明显下降,5%DMSO冻存的凋亡率10.24%,20%DMSO冻存的凋亡率93.49%。结论 2%~5%DMSO冻存肝癌SSMC7721细胞,复苏后培养有较好的细胞相对活力,能有效减少细胞凋亡,起到的冻存保护剂作用。     

X射线对人外周血淋巴细胞DNA损伤修复和凋亡的影响

目的 研究不同时间诱导X射线照射的淋巴细胞进入细胞周期DNA损伤修复与凋亡的影响.方法 X射线（0.5 Gy）作用于正常人外周血淋巴细胞,以照射后不同时间点（0、4 h）分别加入PHA并分成两组,即照射后0 h加PHA组（A组）和照射后4 h加PHA组（B组）,再分别培养0、0.5、2 h,用流式细胞术和免疫印迹法检测A组和B组γ-H2AX蛋白的表达,Annexin-V/PI法分析A、B两组的细胞凋亡率.结果 流式细胞术及免疫印迹结果均显示A组的γ-H2AX蛋白表达高于B组（P＜0.05）,且均先升高后降低.A组细胞凋亡率亦大于B组.结论 不同时间诱导被打击的淋巴细胞进入周期其可能发生DNA修复并同时伴随细胞凋亡的发生.     

大肠杆菌感受态细胞培养与冻存条件的研究

测定大肠杆菌JM107在37℃培养条件下的生长曲线,制备其对数生长期不同阶段感受态冻存细胞,并对冻存细胞的转化率进行研究。结果显示：分离良好的单个新鲜菌落接种于50mlSOB培养基,经37℃,170～180r/min振荡培养210min左右,所得冻存细胞转化率最高,－7O℃保存时可达5．2×10⁷转化子／μgDNA且感受态保持时间长,即使存放两个月仍能保持相当高的转化率。－20℃保存时也能在三周内保持较高转化率。     

冻存对自发性高血压大鼠精子顶体功能的影响

应用金霉素(CTC)荧光检测、精子穿卵试验和项体酶β-D-半乳糖苷酶活力测定等方法检测冻存对大鼠精子顶体的影响。CTC荧光反应显示,与未冻存精子比较,冻存后精子顶体反应的类型发生改变,AR型(发生了顶体反应)精子比例明显下降,冻存前为68.6％,冻存后为13.4.％,但是获能精子的比例未发生明显变化(92.6％对90.8％)。与未冻存的精子相比,冻存组精子的穿卵试验的受精指数下降(23.4±7.02对10.2±3.95),而且冻存后精子顶体酶——β-D-半乳糖苷酶活力明显下降(9.39±1.98对4.50±1.40)。结果表明冻存后精子的顶体功能受到较明显的破坏。实验结果为今后针对性地改进大鼠精子的冻存方法,改善大鼠精子的冻存保护剂提供实验和机制上的依据。     

人外周血活化淋巴细胞survivin基因的转录激活和表达相关的信号转导通路研究

Survivin是与细胞增殖和细胞凋亡调控密切相关的重要功能蛋白质,也是肿瘤临床诊断的分子标志物及治疗研究的理想靶标.由于发现人外周血活化淋巴细胞存在Survivin蛋白的显著表达,故以植物血凝素(PHA)和IL-2共刺激培养的正常人外周血单个核细胞为实验材料,采用RT-PCR、蛋白质印迹以及细胞周期分析等实验方法,观察淋巴细胞活化与Survivin蛋白表达之间的相互关系,并利用3种激酶抑制剂探索了淋巴细胞活化所致Survivin蛋白表达相关的信号转导通路.实验结果表明：人外周血单个核细胞在刺激培养36 h前后出现survivin基因的明显转录激活和蛋白质的起始表达,表达产物的水平随培养时间的延长而增加,且具有明显的细胞周期和周期时相依赖性.JAK2的抑制剂AG490阻断细胞周期的运行,且强烈抑制survivin基因的转录激活和蛋白质表达,PI3K和MEK的抑制剂Wortmannin和PD98059也有一定程度的抑制作用.所得实验结论是：survivin基因的转录激活和蛋白质表达与淋巴细胞活化相关联,代表细胞处在增殖状态.JAK2介导的JAK-STAT信号通路是淋巴细胞活化,Survivin蛋白表达必需和最重要的信号转导通路,PI3K和MEK介导的信号通路也具有一定的影响作用.     

急性白血病患者外周血白细胞诱生干扰素的能力和淋巴细胞转化功能的研究

用微量细胞病变抑制法测定了53例急性白血病患者外周血白细胞诱生干扰素的水平,以及18例急性淋巴细胞性白血病患者的淋巴细胞转化功能。发现前者体外诱生干扰素的水平显著下降,并与病程转归有密切关系;后者淋巴细胞转化指数低于正常,但与干扰素水平之间无平行关系。本文还对急性白血病患者白细胞体外诱生干扰素水平下降的可能原因进行了讨论。     

人绒毛膜促性腺激素中糖链的结构和功能研究

人绒毛膜促性腺激素中糖链的结构和功能研究李家大王克夷（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词绒毛膜促性腺激素糖链人绒毛膜促性腺激素（ｈｕｍａｎｃｈｏｒｉｏｎｉｃｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ,ｈＣＧ）是一个来源于胎盘的异源二聚体的糖蛋白激素...     

有效冻存昆虫细胞的新方法

有效冻存昆虫细胞的新方法金立杰,薛伟钢,张士安（卫生部长春生物制品研究所,长春）近年来,昆虫细胞Ｓｆ９和Ｓｆ２１作为基因工程的宿主细胞,越来越多地应用于研究和生产中。昆虫细胞的有效保存成为应用中的一个重要问题。我们根据几年来的工作经验,摸索出简单有效...