狂犬病毒aG株在Vero细胞上传代适应研究

为研制有效、安全和稳定的Vero细胞狂犬病疫苗提供实验室基础资料。采用狂犬病固定毒4aG株在Vero细胞上进行传代适应,同时对该毒株在Vero细胞上的增殖条件,病毒液的回收方法进行研究。结果显示,狂犬病固定毒4aG株在Vero细胞上多次传代后获得一株Vero细胞适应株(4aG-V株),该毒株的毒力可达8.50 logLD50/ml,且具有很好的抗原性及免疫原性。结果表明,感染Vero细胞最适种毒比例为1∶103,病毒滴度随着时间的延长而增强到第12天后逐渐减弱,且采用低温冻融破碎法回收的病毒液滴度优于直接收液法。4aG-V株在Vero细胞上维持时间长,可连续收液,有望其生产高滴度的狂犬病毒液。     

英国植物组织和细胞培养研究概况

英国的植物组织和细胞培养研究有较好的基础。著名植物生理学家、已故的Street教授在这方面作出了很大的贡献。他主持召开了1974年第三届国际植物组织和细胞培养会议。由于Street教授多年的努力,并利用在莱斯特(Leicester)大学植物系他主持的组织培养实验室,培养了一大批人材。近十几年来,英国的植物组织和细胞培养的研究也得到了迅速发展。下面就作者在英工作两年期间的所见所闻作一介绍。长期以来,Street教授的实验室一直是国际     

浙江地区鼬獾和犬源狂犬病病毒分离株全基因组测序与分析

测定浙江地区狂犬病病毒分离株(鼬獾和犬)全基因组序列,从分子水平对病毒进行遗传变异特征分析,了解狂犬病病毒在浙江的流行和变异情况以及目前浙江流行株的遗传学背景,以丰富中国狂犬病病毒街毒流行株的全基因组信息。脑内接种1~2日乳鼠分离狂犬病病毒,RT-PCR反应测定浙江地区狂犬病病毒分离株全基因组核苷酸序列,并进行编码蛋白和序列相似性比较及种系发生分析。测序获得狂犬病病毒浙江淳安鼬獾分离株F02、F04和松阳犬分离株D01、D02全基因组核苷酸序列信息:基因组全长11 923和11 925 nts,前导序列Leader长58nts,5个ORF为:NP(1 353 nts);PP(894 nts);MP(609 nts);GP(1 575 nts);LP(6 386 nts),N-P-M-G间隔序列长2、5、5 nts;G-L基因间的伪基因Ψ长423 nts;Trailer尾长70 nts。核酸BLAST及多重序列比对分析显示浙江地区4个狂犬病病毒分离株的全基因组序列的组成和结构符合弹状病毒科狂犬病病毒属的特征;中国毒株之间特别是浙江同种动物狂犬病病毒之间各个基因区域核苷酸与氨基酸序列相似性最高,浙江病毒全基因组序列编码蛋白氨基酸序列相似性高于核苷酸序列相似性,说明蛋白质编码基因的核苷酸变异大多属于同义突变;浙江病毒负链RNA基因组5个基因编码氨基酸的长度没有变异,5个编码蛋白仅表现较少的序列变化;浙江病毒与本研究选择的代表性引用街毒株或者来自街毒的减毒株的变异位点和变异类型相似,多重序列相似性的比较和种系发生分析显示所分离的狂犬病病毒浙江街毒株均属于基因1型,具有较独特的中国地域性特点,故本研究中的浙江地区分离株极有可能是自然界中固有的街毒株。     

细胞培养狂犬病毒悬液的制备

<正> 狂犬病毒属于弹状病毒科,狂犬固定毒是一个实验室毒株,其特点是致病性低,能在幼地鼠肾细胞(BHK-21C13)中迅速繁殖,该细胞主要用于狂犬病毒复制研究和生产兽用疫苗。 对于严重暴露的病人,在疫苗自动免疫力产生之前,在伤口周围注射抗血清作局部被动抗体使用,可以收到良好的效果。但是,由于过多的被动抗体会抑制自动抗体的产生,因此必须调整好疫苗与抗血清的关系。 抗狂犬病血清传统的生产方法,是用狂犬固定毒注入兔脑内,待发病取脑制备悬液,再用于超免马生产抗血清。这种抗血清     

用人体细胞制备狂犬病疫苗的进展和远景

<正>到1984年,世界将庆祝Louis pasteur发明狂犬病疫苗一百周年。1885年他制成疫苗,第一次给一个叫Josef Meister的小孩使用,自从1884年以来的头三分之二世纪里,在狂犬病研究中很少有很本性的进展。而在本世纪的最近几年中,则有突破。包括对狂犬病的形态和抗原性的阐述。使用抗狂犬病血清提高其保护作用。并研制出了安全有效的组织培养疫苗。在这项工作中,Hilary Koprowski和他的同事Tadeusz Wiktor的Wistar研究所实验室里,就象早年在Pasteur研究院实验室研究狂犬病一样,取得了卓越的成就。     

家养犬、猫及野生动物中狂犬病病毒流行病学调查及我国不同类型狂犬病疫苗免疫效果观测研究

选择我国狂犬病高发地区(湖南、贵州)、低发地区(江苏、武汉)和无狂犬病报告地区(沈阳)等三种不同类型的地区,开展针对家养犬、猫和啮齿类动物,以及蝙蝠等野生动物的狂犬病病毒带毒率的流行病学调查,对分离到的病毒株在抗原型别、基因变异以及与现行疫苗是否匹配等方面进行分析、比较研究。结果显示:我国狂犬病的主要宿主动物为犬,捕获犬总带毒率为2.56%;犬中狂犬病病毒的监测点最高阳性检出率达到20.0%;啮齿类动物及蝙蝠等野生动物在本次研究未检测到狂犬病病毒。我国自主研制成功的以aG株和CTN株为毒种的现行人用狂犬病疫苗,经应用研究发现,CTN株的糖蛋白基因与本研究分离到的街毒核酸序列更接近。为进一步评价现行疫苗的有效性,在5个观察点分别以aG株和CTN株毒种生产的疫苗接种两组人群(每组各约50人),结果显示均未出现中、强度反应,疫苗免疫后第7d和14d产生的中和抗体分别达到0.49IU/mL~0.52IU/mL和6.7IU/mL~7.53IU/mL;抗体阳转率分别为45.1%~47.9%和100%,表明这些疫苗具有良好的安全性和保护效果。     

狂犬病病毒糖蛋白重组人腺病毒的构建及免疫效果的初步研究

构建表达狂犬病病毒弱毒SRV9糖蛋白(GP)的重组人5型腺病毒,检测其对小鼠的免疫效果。将狂犬病病毒SRV9株GP基因的完整开放阅读框克隆到腺病毒表达系统中的穿梭质粒多克隆位点,构建重组穿梭质粒pac-Ad5CMV-Gs9,以罗氏转染液介导线性化骨架质粒和重组穿梭质粒共转染293AD细胞,细胞病变后取培养物进行PCR鉴定并电镜观察,在293AD细胞上测定病毒滴度。以106 TCID50重组腺病毒腹腔接种昆明小鼠,免疫后不同时段采尾静脉血通过荧光抗体病毒中和试验(FAVN)检测小鼠血清狂犬病中和抗体效价。正确构建重组穿梭质粒pacAd5CMV-Gs9;获得表达狂犬病病毒SRV9株GP蛋白的缺陷型重组人5型腺病毒;病毒滴度达到106 CFU/mL以上;腹腔接种小鼠14d后均产生了抗狂犬病中和抗体,有效保护率达90%。成功获得了表达狂犬病病毒GP基因的重组腺病毒,该腺病毒免疫小鼠可产生保护性中和抗体,为进一步开发新型兽用狂犬病疫苗奠定了物质基础。     

狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法的建立

建立狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法,并进行评价和初步应用。针对狂犬病病毒L基因保守区域设计特异性引物、探针,建立PCR反应体系并评价检测体系的扩增效率、灵敏度、特异性和准确性等指标,灵敏度评价结果与现有巢式RT-PCR和基于N基因qRT-PCR检测方法相比较。结果显示本研究建立的基于L基因qRTPCR检测体系扩增效率高于90%;最小检测病毒滴度为2.7×10~(-3)FFU/mL,灵敏度高于基于N基因qRT-PCR和巢式RT-PCR 100倍;最小检测核酸拷贝数为100拷贝,建立了基于目的基因RNA标准品的标准曲线,可用于定量检测;对于我国的狂犬病病毒流行毒株检测范围较广,动物样本检测结果与金标准DFA检测结果相一致,准确性较高。本研究建立的狂犬病病毒qRT-PCR可用于狂犬病病毒实验室检测。     

狂犬病病毒Vero细胞适应株3aG-V的致病性和免疫原性

狂犬病病毒3aG—V株是3aG—5在vero细胞适应的毒株,对其在小鼠、豚鼠、家兔、犬的不同感染途径的致病性,小鼠、豚鼠、兔子上的免疫原性进行研究,同时进行纯毒及在中枢神经系统中能否形成尼氏小体试验,结果表明：狂犬病病毒3aG—V株潜伏期较长,在动物脑内不形成尼氏小体,为固定毒,其在实验动物上具有较弱的致病性和较好的免疫原性,可作为纯化Vero细胞狂犬病疫苗的生产用疫苗株。     

顺访巴甫洛夫生理学研究所

1989年7月,在出席第31届国际生理科学大会(芬兰赫尔辛基)之后,我们一行5人怀着兴奋的心情参观访问了苏联生理学研究中心——巴甫洛夫生理学研究所。50年代曾在北京大学讲学的苏沃洛夫教授接待了我们。在简短的介绍之后,参观了高级神经活动生理学和病理学等三个实验室;最后,现任所长、科学院院士Говырии教授接见了我们。他对与中国同行的学术交流和人员交流怀有浓厚的兴趣,并希望同中国生理学界加强各方面的联系。     

《自然》:科学家发现能杀死不同艾滋病毒抗体

<正>南非国立传染病研究所(NICD)近日发布新闻公报表示,该所研究人员与美国同行合作,成功确认并在实验室复制出一种能够杀死不同艾滋病病毒(HIV)毒株的抗体,有望据此研发新型抗艾滋病疫苗,相关成果发表在在最新一期英国科学杂志《自然》上。研究人员对一名感染艾滋病病毒的女性的感染反应情况进行了研究,从其血液分离出她所产生的抗体,并运用克隆技术,在实验室中成功复制出了这种抗体。该抗体属于广泛中和抗体,能够杀死多种艾滋病病毒毒株。     

《自然》:科学家发现能杀死不同艾滋病毒抗体

<正>南非国立传染病研究所(NICD)近日发布新闻公报表示,该所研究人员与美国同行合作,成功确认并在实验室复制出一种能够杀死不同艾滋病病毒(HIV)毒株的抗体,有望据此研发新型抗艾滋病疫苗,相关成果发表在在最新一期英国科学杂志《自然》上。研究人员对一名感染艾滋病病毒的女性的感染反应情况进行了研究,从其血液分离出她所产生的抗体,并运用克隆技术,在实验室中成功复制出了这种抗体。该抗体属于广泛中和抗体,能够杀死多种艾滋病病毒毒株。     

兰州大学干旱农业生态国家重点实验室简介

干旱农业生态国家重点实验室是1991年由国家计委批准、利用世界银行贷款、依托在兰州大学建设的,1995年11月通过国家验收,并正式对国内外开放。原实验室主任、著名生态学家赵松岭教授逝世后,由兰州大学副校长李廉教授代理实验室主任,现任实验室主任为陈家宽教授;北京师范大学教授、中国科学院院士孙儒泳先生任学术委员会主任,学术委员会由国内生态学界著名专家学者15人组成。实验室拥有面积2200多平方米的独立实验楼一座,环境优美。现有固定人员20人,其中研究人员16名(高级职称12人,中级职称4人),研究人员中有博士学位的12名;技术和管理人员…     

92例狂犬病的临床特点及预后分析

本文旨在分析狂犬病患者的临床特点及预后,以提高对其诊断及防治的认识。通过采用病历调阅及患者家属电话问卷调查方式,描述性分析西南医科大学附属医院2002—2015年收治的92例狂犬病住院患者的一般情况、临床资料、实验室检查结果、预防接种及预后情况。92例患者中,男女比为1.6∶1,96%来自农村。主要在秋季发病,犬为主要传染源。3个月以内发病者占54%(50/92)。98%患者未注射狂犬病疫苗,61%患者不知晓需接种疫苗。发病至死亡最短时间为20h,最长为11d。所有患者最终均死亡。结果提示,我国西部农村地区仍是狂犬病高发地区,应加大狂犬病预防知识的普及,特别是针对15岁以下儿童及40~60岁人群;同时应注意疫苗质量的监管。     

一种新型原代地鼠肾细胞（PHKC）精制狂犬病疫苗的实验室质量评估

本文通过对一种新型疫苗－ＰＨＫＣ精制狂犬病疫苗的全面实验室检定并与法国Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗比较,认为该疫苗安全性良好,纯度较高,与法国Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗具有相同的免疫效果。     

重组人抗狂犬病病毒单抗SO57、SOJB对不同狂犬病病毒毒株中和作用的研究

用不同的动物模型研究了具有专利的重组人抗狂犬病病毒单克隆抗体SO57、SOJB对不同狂犬病病毒株的中和作用,100IU/kg的SO57能100%保护被中国街毒株SBD攻击的中国仓鼠;首次用小鼠模型模拟人体被狂犬病病毒攻击后的治疗情况,在小鼠被CVS及中国街毒代表株攻击后,SO57与HRIG具有相近的对小鼠的暴露后保护作用;同时结果显示HRIG对SBD株攻击的保护率不能到达100%,仅使用疫苗是不能对感染病毒的小鼠百分之百的保护;SOJB与SO57 1:1联合使用未显示比SO57单独使用更好的保护效果。SO57极有可能在中国代替HRIG用于狂犬病病毒暴露后治疗。     

实验室大纪事

本实验室学术委员会第一次会议于一九八五年十一月二十七一二十九日在北京举行.除了艾棣教授(赫尔辛基大学)、柯夫教授(康乃尔大学)及朱澄教授(北京大学)因故缺席以外,其余委员都出席了会议.中国科学院微生物研究所所长宋大康教授致辞并代表研究所向各委员颁发了聘书.研究所业务处处长杨菊菊同志出席了会议.学术委员会主任魏江春同志向委员们传达了中国科学院院长卢嘉锡及副院长周光召关于开放实验室的讲话内容;介绍了该实验室的筹建过程;提出了本实验室的研究方向及课题申请指南草案交会议审议.经会议讨论修改后一致通过了本实验室的研究方向及课题申请指南.会议还审议了十二件课题申请书;通过了其中九项.此外,经会议讨论决定,本实验室将编辑出版年报,以发表本实验室的研究成果.年报将以英文版公开发行.本实验室学术委员会同时也是年报编辑委员会.     

鉴别伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒荧光定量PCR方法的建立

根据猪伪狂犬病病毒(PRV) gH、gE基因的序列, 设计了两对引物及其对应的TaqMan探针, 通过对引物、探针、Mg2+的浓度和样品DNA提取方法等进行优化, 建立了鉴别PRV野毒与疫苗毒感染的荧光定量PCR方法。该方法线性范围为101~108拷贝/mL, 达8个数量级, 灵敏度可达101拷贝/mL, 比常规PCR高100倍。用此方法对60份疑似组织样品进行检测, 并与血清中和试验、常规PCR相比较, 结果显示该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能对样品进行定量检测等优点, 并且该法以闭管的模式操作, 减少了后续步骤污染的可能性, 整个PCR检测过程不到2 h。此方法的建立, 为猪伪狂犬病病毒的早期鉴别诊断和定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础。     

人狂犬病免疫球蛋白使用效果观察

为了解人狂犬病免疫球蛋白的作用效果,我们将观察对象随机分成了A、B、C三组,分别采用三种措施进行狂犬病的预防治疗,即：A组联合使用狂犬病疫苗与人狂犬病免疫球蛋白;B组联合使用狂犬病疫苗与抗狂犬病血清(马源);C组仅注射狂犬病疫苗,并采用小鼠中和试验对这三组成员在免疫后3、7、14、45天及1年时的中和抗体水平进行检测。结果表明：狂犬病疫苗与人狂犬病免疫球蛋白或抗狂犬病血清联合使用,可使体内更早出现抗狂犬病的中和抗体。注射人狂犬病免疫球蛋白后未发生临床副反应。     

赴美参加“国际麻醉药研究学会”年会的一些观感

应“国际麻醉药研究学会(International Narcotic Research Club,INBC)”主席 E.L.Way 教授的邀请,我在最近参加了在美国麻省举行的该学会1979年会,同时有机会参观了华盛顿,波士顿、布法罗、旧金山、贝克莱、Palo Alto 等六个城市的六个实验室,通过这些学术活动介绍了我国针刺镇痛方面的一部分研究成果,向国外同行学习先进技术和了解一些学术动向;同时也增进了中、外科学界,特别是中、美科学界的相互了解。