缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及人重组白细胞介素-1β的影响

采用免疫组化方法,观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元ｃ－ｆｏｓ的表达及人重组白细胞介素－１β（ｒｈＩＬ－１β）的影响。结果显示,缺氧后海马神经元中Ｆｏｓ染色阳性胞核的百分率随缺氧时间的延长而显著增加。图像分析的结果显示,缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度亦随缺氧时间的延长而显著增加。经ｒｈＩＬ－１β孵育的神经元缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的百分率和Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度均明显低于对照组。本结果表明,缺氧能诱导体外培养海马神经元ｃ－ｆｏｓ表达,ｒｈＩＬ－１β能抑制缺氧神经元ｃ－ｆｏｓ表达。提示ｒｈＩＬ－１β对海马神经元缺氧损伤具有一定调控作用。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-1β表达的影响

目的:观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和白细胞介素- 1β(IL-1β)表达的影响.方法:取培养12 d的两组(对照组和低氧预处理组)培养神经元,同时置于缺氧环境(0.9L/LN2,0.1L/LCO2)中培养2、4、8和12 h. 分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗rhIL-1β单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL-1β表达的影响.结果:经低氧预处理的海马神经元缺氧后IL-1β表达较对照组减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组.结论:低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,其中IL-1β表达降低可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化.     

人重组白细胞介素-6对缺氧时大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响

目的和方法 :采用免疫组化方法 ,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl 2表达及人重组白细胞介素 6(rhIL 6)的影响。结果 :经rhIL 6孵育的海马神经元缺氧后神经元活存数、Bcl 2表达阳性神经元数和Bcl 2表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论 :rhIL 6能增强缺氧神经元Bcl 2的表达 ,抑制缺氧后神经元的死亡 ,提示rhIL 6参与脑缺氧损伤的调控。     

重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax 表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素-6（recombinant human interleukin-6,rhIL-6）对缺氧-复氧后Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL-6组,同时于缺氧环境（90% N2 10% CO2）中培养2、4h后,再于常氧培养箱内复氧培养24和72h。于不同时间取出,分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色,观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax的表达,并用原位末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见,与缺氧前相比,缺氧-复氧后24和72h,海马神经元Bal-2表达明显减弱,Bax表达明显增强,凋亡神经元明显增多。经rhIL-6预处理的海马神经元与对照组相比,缺氧-复氧后24和72h,Bcl-2表达明显增强,Bax神经明显减弱,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示,rhIL-6对海马神经元缺氧-复氧损伤具有一定的保护作用。     

缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c—fos的表达及人重组…

采用免疫组化方法,观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元ｃ－ｆｏｓ的表达及人重组白细胞介素－１β（ｒｈｌＬ－１β）的影响,结果显示,缺氧后海马神经元中Ｆｏｓ染色了性胞核的百分率随缺氧时间的延长而显著增加。图像分析的结果显示,缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度亦随缺氧时间的延长而显著增加。经ｒｈＩＬ－１β孵育的神经元缺氧后Ｆｏｓ染色阳性胞核的百分率和Ｆｏｓ染色阳性胞核的平均光密度均明显低于对照组。本结     

人重组白细胞介素—6对缺氧时大鼠海马神经元Bcl—2表达？…

目的和方法：采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Ｂｃｌ－２表达及人重组白细胞介素－６的影响。结果：经ｒｈＩＬ－６孵育的海马神经元缺氧后神经元活存 数、Ｂｃｌ－２表达阳性神经元数和Ｂｃｌ－２表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论：ｒｈＩＬ－６能增强缺氧神经元Ｂｃｌ－２的表达,抑制缺氧后神经元的死亡,提示ｒｈＩＬ－６参与脑缺氧损伤的调控。     

缺氧/复氧对培养的大鼠海马神经元Fos、Jun表达和神经元凋亡的影响

目的：观察缺氧／复氧对体外培养的海马神经元Fos和Jun表达和神经元凋亡的影响。方法：取培养12d的海马神经元,置2000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内,连续充以无氧气体（90％N2、10％CO2）,在缺氧条件下继续培养2、4h后取出,置含10％CO2和空气的培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间取出,观察神经元存活数,分别用抗Fos和抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色,计数Fos和Jun表达阳性神经元百分率,并用原位末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别观察和测定缺氧／复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果：缺氧／复氧后Fos和Jun表达阳性神经元百分率和凋亡神经元百分率的显著增加。结论：缺氧／复氧后即早反应基因fos在神经元中的持续表达可引起神经元凋亡,原癌基因jun的表达与神经元凋亡的发生有关。     

缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl—2表达的影响

采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响。结果显示,缺氧2h时Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度较缺氧前明显增强,但缺氧4h和重新恢复供氧后24—72h时,Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度又逐渐减弱。缺氧后Bcl-2免疫反应阳性神经元数和阳性率亦随神经元存活数的下降而逐渐减少。本结果提示,缺氧早期Bcl-2免疫染色阳性神经元的免疫反应增强可能是脑细胞在缺氧条件下的自我保护机制,Bcl-2可能对海马神经元缺氧损伤具有一定调控作用。     

白细胞介素-1β对Fos蛋白表达的影响及其在癫痫发作中的作用

目的探讨白细胞介素-1(IL-1)在癫痫发病中的作用。方法将实验动物分为四组：A组(对照组)、B组(IL-1β组)、C组(IL-1β Glu,阈下剂量组)、D组(IL-1受体拮抗剂 IL-1β Glu,阈下剂量组),分别在各组大鼠侧脑室注射上述试剂,然后观察动物行为学表现并用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马Fos蛋白的表达。结果A组无癫痫发作,B组发作程度达Ⅱ～Ⅲ级,C组为Ⅳ～Ⅴ级,D组为Ⅰ～Ⅱ级。在大脑皮质及海马,Fos蛋白在A、D组无明显表达,B、C组有明显表达,而在齿状回,A组仅少量表达,B、C、D组表达均明显增强。结论IL-1β可通过其受体介导而诱导癫痫发作,与Glu联合应用可促进癫痫发作,免疫因子对神经系统的兴奋性有调节作用。     

体外培养大鼠海马细胞白细胞介素—1的表达及缺氧的影响

采用免疫组化方法,观察了体外培养大鼠海马细胞对人重组白细胞介素1β（rhIL-βH）抗血清的免疫反应以及缺氧的影响,结果可见,体外培养的大鼠海马神经元和神经胶质细胞对抗rhIL-1β抗血清均呈弱性免疫染色反应,缺氧后免疫染色反应明显增强,经图像分析表明,缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度均较缺氧前增加,尤以缺氧2h增加最明显,继续缺氧4－12h,神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱,以上结果表明,大鼠海马脑区存在抗rhIL-1β抗血清的免疫反应细胞;缺氧使对抗rhIL-1β抗血清的免疫染色反应增强,提示IL－1β与脑缺氧损伤的调控有关。     

白细胞介素-2对大鼠海马谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的影响———免疫组织化学和狭线杂交研究

本研究应用免疫组织化学（ＰＡＰ法）的方法,观察到侧脑室内注射白细胞介素２（ＩＬ２）后,大鼠海马回和齿状回内谷氨酸（Ｇｌｕ）免疫反应阳性神经元的数量明显减少、胞体皱缩、突起及其分支减少;γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应阳性神经元的数量、突起及其分支皆减少。用３２Ｐ标记的ＧＡＢＡＴｃＤＮＡ探针对大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ进行狭线杂交结果显示：实验组大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ的含量明显增多。由于ＧＡＢＡ在ＧＡＢＡＴ的作用下,可转变为Ｇｌｕ,因此,以上结果表明ＩＬ２不仅可影响海马神经元合成和释放Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ,而且还使Ｇｌｕ的释放量大于其合成量。这些变化可能与癫痫的发病机理有关     

c－Fos在培养的心肌细胞肥大过程中表达的免疫组织化学研究

实验选用ＳＤ乳鼠,取心尖作心肌细胞培养。实验组加血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）,对照组加等量生理盐水,加液后于２小时、１天、３天和第７天终止培养。利用ｃ－Ｆｏｓ的免疫组织化学技术检测Ｆｏｓ蛋白在两组中的表达强度。结果表明：①加液后２小时,加ＡｕｇⅡ组和加生理盐水组心肌细胞均呈阳性表达。②加液后１天、３天,实验组弱阳性表达,对照组未见表达。③加液持续作用７天后,加ＡｕｇⅡ组心肌细胞肥大已形成,可见胞体很大的心肌细胞呈强阳性表达,而加生理盐水组无表达、结果提示：ｃ－Ｆｏｓ基因可能参与心肌肥大的病理过程。     

体外培养大鼠海马细胞白细胞介素－1的表达及缺氧的影响

采用免疫组化方法,观察了体外培养大鼠海马细胞对人重组白细胞介素１β（ｒｈＩＬ－１β）抗血清的免疫反应以及缺氧的影响。结果可见,体外培养的大鼠海马神经元和神经胶质细胞对抗ｒｈＩＬ－１β抗血清均呈弱阳性免疫染色反应,缺氧后免疫染色反应明显增强。经图像分析表明,缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度均较缺氧前增加,尤以缺氧２ｈ时增加最明显,继续缺氧４─１２ｈ,神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱。以上结果表明,大鼠海马脑区存在抗ｒｈＩＬ－１β抗血清的免疫反应细胞;缺氧使对抗ｒｈＩＬ－１β抗血清的免疫染色反应增强,提示ＩＬ－１β与脑缺氧损伤的调控有关。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

目的 :观察低氧预处理对缺氧 复氧后大鼠海马神经元Jun表达的影响。方法 :取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 .90L LN2 0 .10L LCO2 )中培养 4h后取出 ,置含 0 .10L LCO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4h和 72h ,于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,并用抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察Jun表达阳性和阴性神经元数目 ,计算Jun表达神经元所占百分率。结果 :经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Jun表达阳性神经元百分率较对照组明显减少 ,神经元存活数明显高于对照组。结论 :低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元Jun的表达。提高神经元存活数     

中枢去甲肾上腺素通路和前列腺素参与IL-6、TNFα对大鼠下丘脑室旁核神经元的兴奋作用

应用免疫组织化学方法研究了６羟多巴胺化学性损毁中枢去甲肾上腺素通路和中枢引入前列腺素合成抑制剂消炎痛对脑室注射白细胞介素６、肿瘤坏死因子α诱导下丘脑室旁核小细胞Ｆｏｓ表达的影响。结果显示,这两种处理均可使Ｆｏｓ表达细胞数目明显减少,说明白细胞介素６、肿瘤坏死因子诱导室旁核小细胞神经元Ｆｏｓ表达的作用与中枢去甲肾上腺素通路和中枢前列腺素有关。     

大鼠海马神经元内11β-HSD1和GR的共存及其意义

本研究旨在探讨糖皮质激素代谢酶-11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型（11β-HSD1）和糖皮质激素受体（GR）在大鼠海马神经元内的共同分布及其意义。用免疫细胞化学方法研究显示,海马神经元内不仅存在11β-HSD1免疫反应物质,还存在GR免疫反应物质,而且11β-HSD1与GR共存于同一个海马神经元内,用Western印迹杂交和薄层层析（TLC）方法研究表明,地塞米松（DEX）可以促进11β-HSD1与GR共存于同一个海马神经元内,用Western印迹杂交和薄层层析（TLG）方法研究表明,地塞米松（DEX）可以促进11β-HSD1蛋白表达及其酶的活性,利用11β-HSD1基因启动子区序列构建的以CAT酶为报告基因的pBLCAT6质粒转染PC12细胞,证实DEX能够促进CAT酶的表达。以上糖皮质激素的作用均可为GR受体阻断剂RU38486所阻断,结果提示;糖皮质激素（GC）与GR结合后,可以作用于与其共存的11β-HSD1基因启动子区,使11β-HSD1表达增加,从而使更多的GC代谢产物转化为有活性的GC,此机制可能与保证GC在海马神经元内与亲和力较低的GR结合有关。     

低氧预处理对大鼠海巴神经元缺氧耐受性和IL—1β表达 …

目的：观察低氧预处理对大鼠海巴神经元缺氧耐受性和白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）表达的影响。方法：取培养１２ｄ的两组（对照组和低氧预处理组）培养神经元,同时置于缺氧环境（０．９Ｌ／ＬＮ２,０．１Ｌ／ＬＣＯ２）中培养２、４、８和１２ｈ。分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗ｒｈＩＬ－１β单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元ＩＬ－１β表达的影响。结果：经低氧预处理的海马神经     

抗坏血酸对IL-1β体外诱导中脑神经干细胞分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元作用的实验研究

目的体外观察抗坏血酸(ascroid acid,AA)对IL-1β诱导神经干细胞向酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元分化的作用,为帕金森病的细胞移植治疗提供实验资料.方法体外培养中脑神经干细胞并传代分组,在有血清条件下分别予以IL-1β及AA IL-1β诱导分化,TH免疫细胞化学鉴定分化结果并细胞计数阳性比例.结果有血清条件下IL-1β、AA IL-1β诱导中脑神经干细胞分化为TH阳性神经元比例约为12.6%和14.3%,明显高于对照组(约2.6%,P<0.01);两实验组间相对无统计学差异(P>0.05);联合诱导组TH阳性神经元细胞形态更成熟.结论 IL-1β可以明显促进中脑神经干细胞分化为TH阳性神经元,AA能够加强IL-1β诱导的TH阳性细胞的表型成熟,但在我们的实验条件下二者联合未能增加TH阳性细胞诱导率.     

川芎嗪对Aβ25-35诱导体外大鼠海马神经元细胞凋亡的影响

本文通过Aβ25-35诱导体外原代培养的SD乳大鼠海马神经元,建立Aβ毒性损伤细胞模型,结合AnnexinV-FITC/PI荧光双染法流式细胞术、MTT比色法、实时荧光定量PCR及Western blot方法检测川芎嗪(tetrameth-ylpyrazine,TMP)对原代培养的海马神经元细胞活性、早期凋亡率和Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果显示川芎嗪高、中剂量可明显增强细胞活性,增加神经元细胞的存活率(P<0.01),可显著抑制海马神经元细胞早期凋亡(P<0.01),抑制凋亡蛋白Bax的表达(P<0.01),增强抗凋亡蛋白bcl-2的表达(P<0.01)。川芎嗪可通过调节Bax/Bcl-2平衡抵抗Aβ25-35诱导的海马神经元凋亡,降低Aβ的神经元毒性,对海马神经元损伤有明显的保护作用。     

IL-1β、IL-lra对戊四氮致痫大鼠行为及皮层、海马脑电的影响

目的:了解白细胞介素1β(IL-1β)在癫痫发作中的作用.方法:采用记录脑电图(EEG)同时观察行为的方法,观察IL-1β和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra) 侧脑室注射对戊四氮(PTZ)致痫大鼠行为和皮层、海马EEG的影响.结果:IL -1β能明显缩短 PTZ致大鼠急性惊厥发作及痫波发放的潜伏期,增加痫波的发放频率.IL -1ra能减少急性惊厥痫波发放频率,对急性惊厥发作及痫波发放的潜伏期和惊厥发作强度无明显影响.但IL-1ra能显著延长大鼠点燃后PTZ诱导的惊厥发作和痫波发放的潜伏期,减轻惊厥发作强度.结论:内源性IL-1β是促进癫痫发作的因素之一,可能在癫痫慢性发展中提高大脑神经元的兴奋性中起着重要作用.